熒光定量PCR板實驗，細節(jié)決定成敗，有哪些注意事項不能忽視？
熒光定量PCR實驗時，首先要做好防護，佩戴一次性乳膠手套并經(jīng)常更換，使用負壓式生物安全柜防止污染。實驗中，嚴格防止氣溶膠交叉污染，使用一次性帶濾芯移液吸頭，不在生物安全柜以外開啟試劑或PCR管。試劑和樣本需嚴格按照生物安全規(guī)定操作，熒光探針避光保存，RNA操作時使用無RNase的實驗器具。所有試劑在開啟前后都要瞬時離心以去除氣泡。加樣時，避免在PCR管上做標記，不能用手接觸采光部位。實驗中，設置無模板對照以排除非特異性反應。實驗結束后，使用過的槍頭、EP管密封存放。注意模板降解、引物探針設計、Mg2+濃度等問題，確保擴增曲線和熔解曲線的特異性。