41302ES60 HEK293細(xì)胞殘留DNA檢測試劑盒
- 公司名稱 翌圣生物科技（上海）股份有限公司
- 品牌 Yeasen/翌圣生物
- 型號 41302ES60
- 產(chǎn)地 上海
- 廠商性質(zhì) 生產(chǎn)廠家
- 更新時間 2022/7/7 15:57:55
- 訪問次數(shù) 491
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企業(yè)簡介
翌圣生物科技（上海）股份有限公司【Yeasen Biotechnology (Shanghai) Co., Ltd.】是一家以蛋白質(zhì)改造和酶進(jìn)化技術(shù)為驅(qū)動，聚焦生命科學(xué)產(chǎn)業(yè)鏈上游核心原料，從事分子、蛋白和細(xì)胞三大品類生物試劑的研發(fā)、生產(chǎn)與銷售的高新技術(shù)企業(yè)，通過打通分子酶、蛋白、抗體、核酸、細(xì)胞的技術(shù)開發(fā)路徑，成為國內(nèi)少數(shù)同時覆蓋三大品類生物試劑、兼?zhèn)浜诵募夹g(shù)自主研發(fā)能力和規(guī)?；a(chǎn)能力的高新技術(shù)企業(yè)，產(chǎn)品廣泛應(yīng)用于生命科學(xué)研究領(lǐng)域、診斷與檢測領(lǐng)域和生物醫(yī)藥領(lǐng)域。
主營業(yè)務(wù)
公司憑借在蛋白質(zhì)改造和酶進(jìn)化領(lǐng)域的技術(shù)優(yōu)勢和深耕生物試劑行業(yè)多年積累的豐富經(jīng)驗，構(gòu)建了品質(zhì)優(yōu)良、類型齊全、種類豐富的產(chǎn)品管線。自公司成立以來，公司研發(fā)、生產(chǎn)和銷售的生物試劑超過3000種，涵蓋分子、蛋白、細(xì)胞三大品類的生物試劑，能夠滿足客戶多種類型生物試劑的一體化采購需求。公司核心產(chǎn)品覆蓋qPCR系列、NGS系列、逆轉(zhuǎn)錄系列、核酸提取與純化系列、PCR系列、分子克隆系列、體外轉(zhuǎn)錄系列、抗體、蛋白純化系列、蛋白分析系列、重組蛋白、細(xì)胞分析系列、細(xì)胞培養(yǎng)系列、細(xì)胞轉(zhuǎn)染系列、報告基因檢測系列等多個品類的生物試劑，廣泛應(yīng)用于生命科學(xué)研究、診斷檢測和生物醫(yī)藥等領(lǐng)域。
發(fā)展歷程
榮譽資質(zhì)
翌圣生物通過申請商標(biāo)和軟件著作權(quán)的方式保障核心技術(shù)和市場競爭力，不斷加強(qiáng)公司品牌建設(shè)。截至2022年3月31日，公司已經(jīng)獲得授權(quán)18項（其中發(fā)明14項、實用新型1項、外觀設(shè)計3項）和45項與生物試劑相關(guān)的軟件著作權(quán)，擁有經(jīng)國家知識產(chǎn)權(quán)局商標(biāo)局核準(zhǔn)的注冊商標(biāo)權(quán)37項以及4項境外注冊商標(biāo)，是國家高新技術(shù)企業(yè)和上海市專精特新企業(yè)。
創(chuàng)新平臺
經(jīng)過多年的產(chǎn)品研發(fā)技術(shù)經(jīng)驗的沉淀以及持續(xù)的研發(fā)創(chuàng)新，翌圣生物積極開展“產(chǎn)學(xué)研”合作，與擁有生物催化與酶領(lǐng)域國家重點實驗室的湖北大學(xué)、擁有教育部工業(yè)生物領(lǐng)域重點研究基地的江南大學(xué)展開合作，優(yōu)化生物試劑關(guān)鍵原料的生產(chǎn)和表達(dá)工藝。翌圣生物以基因工程技術(shù)、生物信息技術(shù)、細(xì)胞生物學(xué)技術(shù)、免疫學(xué)技術(shù)、生化分析技術(shù)等生命科學(xué)領(lǐng)域的共性生物技術(shù)為基礎(chǔ)，建立了六大核心技術(shù)平臺——雙向分子酶理性設(shè)計與定向進(jìn)化平臺、密度發(fā)酵與超潔凈純化平臺、分子診斷試劑關(guān)鍵原料研發(fā)平臺、高通量測序建庫試劑創(chuàng)新研發(fā)平臺、高性能單克隆抗體研發(fā)平臺和mRNA醫(yī)藥應(yīng)用研發(fā)平臺，目前已經(jīng)自主研發(fā)出20項核心技術(shù)，打通分子酶、蛋白、抗體、核酸、細(xì)胞的技術(shù)開發(fā)路徑，覆蓋技術(shù)研發(fā)、產(chǎn)品升級、規(guī)模生產(chǎn)和質(zhì)量控制等生物試劑研發(fā)和生產(chǎn)的各關(guān)鍵環(huán)節(jié)。
工業(yè)化生產(chǎn)
翌圣生物擁有按照準(zhǔn)GMP 標(biāo)準(zhǔn)建設(shè)運營的工業(yè)化生產(chǎn)基地，配有噸級發(fā)酵線、工業(yè)級 AKTA 純化線和全自動包裝線。同時，公司通過了ISO 13485:2016質(zhì)量管理體系認(rèn)證，從原料控制、生產(chǎn)管理、質(zhì)檢管控、倉儲運輸?shù)葘ιa(chǎn)線進(jìn)行360度管理監(jiān)督，保證產(chǎn)品過程的可控制性及可追溯性，竭盡全力為您提供可靠的產(chǎn)品。
客戶服務(wù)
翌圣生物憑借優(yōu)質(zhì)穩(wěn)定的產(chǎn)品質(zhì)量、高效及時的響應(yīng)能力、快速穩(wěn)定的交付能力和周到完備的售后服務(wù)獲得了眾多科研用戶和工業(yè)用戶的認(rèn)可，為檢測公司、治療公司、工具類公司和科學(xué)研究實驗室提供應(yīng)用于科學(xué)研究、體外診斷、基因測序、生物醫(yī)藥等的生物試劑。與中國科學(xué)院、清華大學(xué)、北京大學(xué)、復(fù)旦大學(xué)、上海交通大學(xué)、浙江大學(xué)等頂尖科研院所和華大基因、恒瑞醫(yī)藥、藥明康德、之江生物、圣湘生物、斯微生物、金斯瑞、思路迪等工業(yè)客戶建立了穩(wěn)定、緊密的合作關(guān)系，公司產(chǎn)品被多次使用在Nature、Science、Cell等國際頂級期刊論文發(fā)表中。
公司企業(yè)文化
幫助客戶創(chuàng)造價值，讓世界更健康更快樂
◎ 成為生命科學(xué)工具領(lǐng)域全球Top⑩
◎ 具備驅(qū)動產(chǎn)業(yè)變革的技術(shù)創(chuàng)新能力
◎ 擁有一支持續(xù)學(xué)習(xí)型的翌圣鐵軍
翌圣生物始終秉承“幫助客戶創(chuàng)造價值，讓世界更健康更快樂”的使命，專注于技術(shù)創(chuàng)新和產(chǎn)品升級，不斷拓展核心技術(shù)的應(yīng)用領(lǐng)域，為客戶提供更為的產(chǎn)品與服務(wù)，助力我國打造自主可控的生物試劑產(chǎn)業(yè)鏈。同時，翌圣生物將進(jìn)一步推進(jìn)國際化戰(zhàn)略，繼續(xù)布局和拓展海外市場，為全球生物試劑產(chǎn)業(yè)發(fā)展貢獻(xiàn)力量。
分子生物學(xué)試劑，細(xì)胞生物學(xué)試劑，免疫學(xué)試劑，蛋白組學(xué)試劑等
| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 100T |
|---|---|---|---|
| 貨號 | 41302ES60 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 醫(yī)療衛(wèi)生,生物產(chǎn)業(yè),制藥 |
| 主要用途 | 用于定量分析檢測各種生物制品的中間品、半成品和成品中的Vero殘留DNA含量的試 |
產(chǎn)品信息
產(chǎn)品名稱 | 產(chǎn)品編號 | 規(guī)格 | 價格（元） |
HEK293 Host Cell DNA Residue Detection Kit HEK293宿主細(xì)胞DNA殘留檢測試劑盒 | 41302ES50 41302ES60 | 50T 100T | 13,695.00 |
25,285.00 |
產(chǎn)品描述
HEK293宿主細(xì)胞DNA殘留檢測試劑盒是用于定量分析檢測各種生物制品的中間品、半成品和成品中的HEK293殘留DNA含量的試劑盒。
本試劑盒采用探針法熒光定量PCR原理，可專一快速的檢測HEK293細(xì)胞的殘留DNA，其檢測限可以達(dá)到fg水平；且試劑盒中含有UDG酶，可以消除擴(kuò)增產(chǎn)物帶來的污染。該試劑盒可與本公司的磁珠法殘留DNA樣本前處理試劑盒（Cat#18461ES/18462ES）配套使用。
產(chǎn)品組分
類別 | 組分編號 | 組分名稱 | 產(chǎn)品編號/規(guī)格 | |
41302ES50（50T） | 41302ES60（100T） | |||
Part I | 41302-A | HEK293 qPCR mix (UDG plus) | 0.8 mL | 1.6 mL |
41302-B | HEK293 Primer&probe mix | 200 μL | 400 μL | |
41302-C | DNA Dilution Buffer | 2×2 mL | 4×2 mL | |
Part Ⅱ | 41302-D | HEK293 DNA Control（30 ng/μL） | 25 μL | 50 μL |
【注】：本試劑盒不含ROX 參比染料，若您目前使用的Real Time PCR擴(kuò)增儀需要添加ROX參比染料，推薦您購買本公司的50× ROX Reference Dye（Cat#10200ES）。
運輸和保存方法
1. Part I 組分干冰運輸，-20℃保存，有效期1年。
2. Part II 組分干冰運輸，-80℃保存，有效期1年。
3. 收到貨后，請檢查Part I 和Part II共2個組分是否齊全，并立即放入對應(yīng)的保存溫度中儲存。
注意事項
1. 使用本試劑前請仔細(xì)閱讀本說明書，實驗應(yīng)規(guī)范操作，包括樣本處理、反應(yīng)體系的配制及加樣。
2. 加樣和配液步驟盡量都在冰上操作。
3. 每個組分在使用前都應(yīng)充分震蕩混勻，低速離心。
4. 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
5. 本產(chǎn)品僅作科研用途。
適用機(jī)型
包含但不限于以下儀器：
Bio-Rad：CFX96 Optic Module；
Thermo Scientific：ABI 7500；ABI Quant Studio 5；ABI Step OnePlus.
使用方法
一、HEK293 DNA定量參考品的稀釋和標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備
用試劑盒中提供的DNA稀釋液將DNA定量參考品進(jìn)行梯度稀釋，稀釋濃度依次為300 pg/μL、30 pg/μL、3 pg/μL、300 fg/μL、30 fg/μL。
具體操作如下：
1. 將試劑盒中的DNA定量參考品和DNA稀釋液置于冰上融化，待*融化后，輕微振蕩混勻，低速離心10 sec。
2. 取6支潔凈的1.5 mL離心管，分別標(biāo)記為3 ng/μL，①，②，③，④，⑤。
3. 在標(biāo)記為3 ng/μL的1.5 mL離心管中加入90 μL DNA稀釋液和10 μL DNA定量參考品（30 ng/μL），即稀釋為3 ng/μL，振蕩混勻后短時間快速離心10 sec，該濃度可分裝置于-80℃短期保存（不超過3個月），使用時避免反復(fù)凍融。
4. 在 ①，②，③，④，⑤ 管中先分別加入90 μL DNA稀釋液，再進(jìn)行梯度稀釋，稀釋方法如下：
稀釋管 | 稀釋比例 | 終濃度 |
① | 10 μL 3 ng/μL+90 μL DNA Dilution Buffer | 300 pg/μL |
② | 10 μL ①+90 μL DNA Dilution Buffer | 30 pg/μL |
③ | 10 μL ②+90 μL DNA Dilution Buffer | 3 pg/μL |
④ | 10 μL ③+90 μL DNA Dilution Buffer | 300 fg/μL |
⑤ | 10 μL ④+90 μL DNA Dilution Buffer | 30 fg/μL |
【注】：
1. 每個濃度做3個復(fù)孔，該試劑可測試30 fg/μL-300 pg/μL線性范圍。若需要，可適當(dāng)擴(kuò)大或縮小線性范圍。
2. 為減少反復(fù)凍融次數(shù)和避免污染，建議初次使用時將DNA定量參考品分裝儲存于-80℃。
3. 已融化未使用的 DNA 稀釋液可保存于2-8 ℃ 7天，若長時間不用，請放置于-20℃。
4. 為確保模板*混勻，每個梯度稀釋時需輕微震蕩混勻約1 min。
二、樣本加標(biāo)回收質(zhì)控QC的制備
根據(jù)需要設(shè)置QC中的HEK293 DNA標(biāo)準(zhǔn)品濃度（以制備加3 pg/μL DNA量的樣本加標(biāo)回收為例），具體操作如下：
1. 取100 μL待測樣本加入1.5 mL潔凈的離心管中，再加入10 μL溶液③，混勻，標(biāo)記為加標(biāo)回收QC。
2. 加標(biāo)回收QC和同批待測樣本一起進(jìn)行樣本前處理，制備加標(biāo)回收QC純化液。
三、標(biāo)準(zhǔn)品回收質(zhì)控QC的制備（可選）
根據(jù)需要設(shè)置QC中的HEK293 DNA標(biāo)準(zhǔn)品濃度（以制備加3 pg/μL DNA量的標(biāo)準(zhǔn)品回收為例），具體操作如下：
1. 取100 μL 溶液③加入1.5 mL潔凈的離心管中，標(biāo)記為標(biāo)準(zhǔn)品回收QC。
2. 標(biāo)準(zhǔn)品回收QC和同批待測樣本一起進(jìn)行樣本前處理，制備標(biāo)準(zhǔn)品回收QC純化液。
四、陰性質(zhì)控NCS的制備
根據(jù)實驗設(shè)置陰性質(zhì)控，具體操作如下：
1. 取100 μL樣本基質(zhì)溶液（或DNA 稀釋液）加入1.5 mL潔凈的離心管中，標(biāo)記為陰性質(zhì)控NCS。
2. 陰性質(zhì)控NCS和同批待測樣本一起進(jìn)行樣本前處理，制備成陰性質(zhì)控NCS純化液。
五、無模板對照NTC的制備
根據(jù)實驗設(shè)置無模板對照NTC，具體操作如下：
1. 無模板對照NTC無需進(jìn)行樣本前處理，在qPCR法檢測殘留DNA含量階段開始配置即可。
2. 每管或孔中的NTC樣本為20 μL Mix混合液（即16 μL HEK293 qPCR mix + 4μL HEK293 Primer&probe mix） + 20 μL DNA Dilution Buffer，建議配置3個重復(fù)孔的量。
六、反應(yīng)體系
組分 | 體積（μL） |
HEK293 qPCR mix (UDG plus) | 16 |
HEK293 Primer&probe mix | 4 |
DNA template | 20 |
總體積 | 40 |
【注】：
1. 根據(jù)反應(yīng)孔數(shù)計算本次所需的Mix混合液總量：Mix混合液 =（反應(yīng)孔數(shù)+2）× (16+4) μL（含有2孔的損失量）。通常，每個樣本做3個重復(fù)孔。
2. 加樣完成密封好管子后，請先低速離心10 sec將管壁的液體離心收集至管底，再震蕩混勻5 sec以上，*混勻反應(yīng)液，再低速離心10 sec將管壁的液體離心收集至管底，如有氣泡，需將氣泡排盡。
下圖為參考板位：
該示例是對HEK293殘留DNA qPCR法檢測操作的展示，檢測樣本包括：1個無模板對照NTC、5個濃度梯度的DNA標(biāo)準(zhǔn)曲線、3個樣本加標(biāo)回收QC（即加樣回收QC）、3個待測樣本、3個標(biāo)準(zhǔn)品回收QC（可選）、3個陰性質(zhì)控NCS（1個即可）。建議每個樣本做3個重復(fù)孔。
七、擴(kuò)增程序參數(shù)設(shè)置（兩步法）（以ABI公司7500 qPCR儀、軟件版本2.0為例）
1. 創(chuàng)建空白新程序，選擇絕對定量檢測模板。
2. 創(chuàng)建1個檢測探針，命名為“HEK293-DNA”，選擇報告熒光基團(tuán)為“FAM”，猝滅熒光基團(tuán)為“none”。
3. 在“Assign target (s) to the selected wells”面板中，將標(biāo)準(zhǔn)曲線孔的“Task”一欄設(shè)置為“Standard”，并且在“Quantity” 一欄分別賦值為“300000”、“30000”、“3000”、“300”、“30”（含義為每孔的DNA濃度，單位為fg/μL），并且在相應(yīng)的“sample name”一欄中命名為“300 pg/μL”、“30 pg/μL”、“3 pg/μL”、“300 fg/μL”、“30 fg/μL”；將無模板對照NTC孔的“Task”一欄設(shè)置為“NTC”；將陰性質(zhì)控NCS孔、待測樣本孔、樣本加標(biāo)回收QC孔的“Task”一欄設(shè)置為“Unknown”，并且在相應(yīng)的“Sample Name”一欄中分別命名為“NCS”、“TS”、“QC”，之后點擊“Start Run”，開始儀器運行。
4. 擴(kuò)增程序設(shè)置：設(shè)置反應(yīng)體積40 μL。
循環(huán)步驟 | 溫度（℃） | 時間 | 循環(huán)數(shù) |
擴(kuò)增產(chǎn)物消化 | 37 ℃ | 5 min | 1 |
預(yù)變性 | 95 ℃ | 10 min | 1 |
變性 | 95 ℃ | 15 sec | 40 |
退火/延伸（收集熒光） | 60 ℃ | 60 sec |
八、qPCR 結(jié)果分析
1. 在“Analysis”的“Amplification Plot”面板中，系統(tǒng)會自動給出Threshold，有時系統(tǒng)給出的Threshold離基線太近，導(dǎo)致復(fù)孔之間Ct相差甚遠(yuǎn)，可手動調(diào)節(jié)Threshold 至合適位置，點擊“Analyze”。此時可在“Multicomponent Plot”初步查看擴(kuò)增曲線的形態(tài)是否正常。
2. 在“Analysis”的“Standard Curve”面板中，可讀取標(biāo)準(zhǔn)曲線的R2、擴(kuò)增效率（Eff%）、斜率（Slope）、截距（Intercept）等。正常的標(biāo)曲：R2＞0.99；擴(kuò)增效率在90%≤Eff%≤110%范圍內(nèi)；Slope在3.4左右。
3. 在“Analysis”的“View well table”面板中，“Quantity”一欄可讀取無模板對照NTC、陰性質(zhì)控NCS、待測樣本TS、樣本加標(biāo)回收QC的檢測值，單位為fg/μL，后續(xù)可在檢測報告中將單位換算成pg/μL或pg/mL。
HB220518
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