41304ES60 E.coli殘留DNA檢測(cè)試劑盒
- 公司名稱 翌圣生物科技（上海）股份有限公司
- 品牌 Yeasen/翌圣生物
- 型號(hào) 41304ES60
- 產(chǎn)地 上海
- 廠商性質(zhì) 生產(chǎn)廠家
- 更新時(shí)間 2022/7/7 15:32:26
- 訪問(wèn)次數(shù) 678
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企業(yè)簡(jiǎn)介
翌圣生物科技（上海）股份有限公司【Yeasen Biotechnology (Shanghai) Co., Ltd.】是一家以蛋白質(zhì)改造和酶進(jìn)化技術(shù)為驅(qū)動(dòng)，聚焦生命科學(xué)產(chǎn)業(yè)鏈上游核心原料，從事分子、蛋白和細(xì)胞三大品類生物試劑的研發(fā)、生產(chǎn)與銷售的高新技術(shù)企業(yè)，通過(guò)打通分子酶、蛋白、抗體、核酸、細(xì)胞的技術(shù)開(kāi)發(fā)路徑，成為國(guó)內(nèi)少數(shù)同時(shí)覆蓋三大品類生物試劑、兼?zhèn)浜诵募夹g(shù)自主研發(fā)能力和規(guī)?；a(chǎn)能力的高新技術(shù)企業(yè)，產(chǎn)品廣泛應(yīng)用于生命科學(xué)研究領(lǐng)域、診斷與檢測(cè)領(lǐng)域和生物醫(yī)藥領(lǐng)域。
主營(yíng)業(yè)務(wù)
公司憑借在蛋白質(zhì)改造和酶進(jìn)化領(lǐng)域的技術(shù)優(yōu)勢(shì)和深耕生物試劑行業(yè)多年積累的豐富經(jīng)驗(yàn)，構(gòu)建了品質(zhì)優(yōu)良、類型齊全、種類豐富的產(chǎn)品管線。自公司成立以來(lái)，公司研發(fā)、生產(chǎn)和銷售的生物試劑超過(guò)3000種，涵蓋分子、蛋白、細(xì)胞三大品類的生物試劑，能夠滿足客戶多種類型生物試劑的一體化采購(gòu)需求。公司核心產(chǎn)品覆蓋qPCR系列、NGS系列、逆轉(zhuǎn)錄系列、核酸提取與純化系列、PCR系列、分子克隆系列、體外轉(zhuǎn)錄系列、抗體、蛋白純化系列、蛋白分析系列、重組蛋白、細(xì)胞分析系列、細(xì)胞培養(yǎng)系列、細(xì)胞轉(zhuǎn)染系列、報(bào)告基因檢測(cè)系列等多個(gè)品類的生物試劑，廣泛應(yīng)用于生命科學(xué)研究、診斷檢測(cè)和生物醫(yī)藥等領(lǐng)域。
發(fā)展歷程
榮譽(yù)資質(zhì)
翌圣生物通過(guò)申請(qǐng)商標(biāo)和軟件著作權(quán)的方式保障核心技術(shù)和市場(chǎng)競(jìng)爭(zhēng)力，不斷加強(qiáng)公司品牌建設(shè)。截至2022年3月31日，公司已經(jīng)獲得授權(quán)18項(xiàng)（其中發(fā)明14項(xiàng)、實(shí)用新型1項(xiàng)、外觀設(shè)計(jì)3項(xiàng)）和45項(xiàng)與生物試劑相關(guān)的軟件著作權(quán)，擁有經(jīng)國(guó)家知識(shí)產(chǎn)權(quán)局商標(biāo)局核準(zhǔn)的注冊(cè)商標(biāo)權(quán)37項(xiàng)以及4項(xiàng)境外注冊(cè)商標(biāo)，是國(guó)家高新技術(shù)企業(yè)和上海市專精特新企業(yè)。
創(chuàng)新平臺(tái)
經(jīng)過(guò)多年的產(chǎn)品研發(fā)技術(shù)經(jīng)驗(yàn)的沉淀以及持續(xù)的研發(fā)創(chuàng)新，翌圣生物積極開(kāi)展“產(chǎn)學(xué)研”合作，與擁有生物催化與酶領(lǐng)域國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室的湖北大學(xué)、擁有教育部工業(yè)生物領(lǐng)域重點(diǎn)研究基地的江南大學(xué)展開(kāi)合作，優(yōu)化生物試劑關(guān)鍵原料的生產(chǎn)和表達(dá)工藝。翌圣生物以基因工程技術(shù)、生物信息技術(shù)、細(xì)胞生物學(xué)技術(shù)、免疫學(xué)技術(shù)、生化分析技術(shù)等生命科學(xué)領(lǐng)域的共性生物技術(shù)為基礎(chǔ)，建立了六大核心技術(shù)平臺(tái)——雙向分子酶理性設(shè)計(jì)與定向進(jìn)化平臺(tái)、密度發(fā)酵與超潔凈純化平臺(tái)、分子診斷試劑關(guān)鍵原料研發(fā)平臺(tái)、高通量測(cè)序建庫(kù)試劑創(chuàng)新研發(fā)平臺(tái)、高性能單克隆抗體研發(fā)平臺(tái)和mRNA醫(yī)藥應(yīng)用研發(fā)平臺(tái)，目前已經(jīng)自主研發(fā)出20項(xiàng)核心技術(shù)，打通分子酶、蛋白、抗體、核酸、細(xì)胞的技術(shù)開(kāi)發(fā)路徑，覆蓋技術(shù)研發(fā)、產(chǎn)品升級(jí)、規(guī)模生產(chǎn)和質(zhì)量控制等生物試劑研發(fā)和生產(chǎn)的各關(guān)鍵環(huán)節(jié)。
工業(yè)化生產(chǎn)
翌圣生物擁有按照準(zhǔn)GMP 標(biāo)準(zhǔn)建設(shè)運(yùn)營(yíng)的工業(yè)化生產(chǎn)基地，配有噸級(jí)發(fā)酵線、工業(yè)級(jí) AKTA 純化線和全自動(dòng)包裝線。同時(shí)，公司通過(guò)了ISO 13485:2016質(zhì)量管理體系認(rèn)證，從原料控制、生產(chǎn)管理、質(zhì)檢管控、倉(cāng)儲(chǔ)運(yùn)輸?shù)葘?duì)生產(chǎn)線進(jìn)行360度管理監(jiān)督，保證產(chǎn)品過(guò)程的可控制性及可追溯性，竭盡全力為您提供可靠的產(chǎn)品。
客戶服務(wù)
翌圣生物憑借優(yōu)質(zhì)穩(wěn)定的產(chǎn)品質(zhì)量、高效及時(shí)的響應(yīng)能力、快速穩(wěn)定的交付能力和周到完備的售后服務(wù)獲得了眾多科研用戶和工業(yè)用戶的認(rèn)可，為檢測(cè)公司、治療公司、工具類公司和科學(xué)研究實(shí)驗(yàn)室提供應(yīng)用于科學(xué)研究、體外診斷、基因測(cè)序、生物醫(yī)藥等的生物試劑。與中國(guó)科學(xué)院、清華大學(xué)、北京大學(xué)、復(fù)旦大學(xué)、上海交通大學(xué)、浙江大學(xué)等頂尖科研院所和華大基因、恒瑞醫(yī)藥、藥明康德、之江生物、圣湘生物、斯微生物、金斯瑞、思路迪等工業(yè)客戶建立了穩(wěn)定、緊密的合作關(guān)系，公司產(chǎn)品被多次使用在Nature、Science、Cell等國(guó)際頂級(jí)期刊論文發(fā)表中。
公司企業(yè)文化
幫助客戶創(chuàng)造價(jià)值，讓世界更健康更快樂(lè)
◎ 成為生命科學(xué)工具領(lǐng)域全球Top⑩
◎ 具備驅(qū)動(dòng)產(chǎn)業(yè)變革的技術(shù)創(chuàng)新能力
◎ 擁有一支持續(xù)學(xué)習(xí)型的翌圣鐵軍
翌圣生物始終秉承“幫助客戶創(chuàng)造價(jià)值，讓世界更健康更快樂(lè)”的使命，專注于技術(shù)創(chuàng)新和產(chǎn)品升級(jí)，不斷拓展核心技術(shù)的應(yīng)用領(lǐng)域，為客戶提供更為的產(chǎn)品與服務(wù)，助力我國(guó)打造自主可控的生物試劑產(chǎn)業(yè)鏈。同時(shí)，翌圣生物將進(jìn)一步推進(jìn)國(guó)際化戰(zhàn)略，繼續(xù)布局和拓展海外市場(chǎng)，為全球生物試劑產(chǎn)業(yè)發(fā)展貢獻(xiàn)力量。
分子生物學(xué)試劑，細(xì)胞生物學(xué)試劑，免疫學(xué)試劑，蛋白組學(xué)試劑等
| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 100T |
|---|---|---|---|
| 貨號(hào) | 41304ES60 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 醫(yī)療衛(wèi)生,生物產(chǎn)業(yè),制藥 |
| 主要用途 | 用于定量分析檢測(cè)各種生物制品的中間品、半成品和成品中的CHO殘留DNA含量的試劑 |
產(chǎn)品信息
產(chǎn)品名稱 | 產(chǎn)品編號(hào) | 規(guī)格 | 價(jià)格（元） |
E.coli Host Cell DNA Residue Detection Kit E.coli宿主細(xì)胞DNA殘留檢測(cè)試劑盒 | 41304ES50 41304ES60 | 50T 100T | 8895.00 16425.00 |
產(chǎn)品描述
E.coli宿主細(xì)胞DNA殘留檢測(cè)試劑盒是用于定量分析檢測(cè)各種生物制品的中間品、半成品和成品中的E.coli宿主細(xì)胞DNA殘留片段含量的試劑盒。
本試劑盒采用PCR熒光探針原理，專一快速的檢測(cè)E.coli細(xì)胞的殘留DNA，其檢測(cè)限可以達(dá)到fg平。試劑盒配套有E.coli DNA Control（DNA定量參考品）。本試劑盒需要與磁珠法殘留DNA樣本前處理試劑盒（Cat#18461/18462）配套使用。
產(chǎn)品組分
組分編號(hào) | 組分名稱 | 產(chǎn)品編號(hào)/規(guī)格 | |
41304ES50（50T） | 41304ES60（100T） | ||
41304-A | E.coli qPCR mix | 0.9 mL | 1.8 mL |
41304-B | E.coli Primer&probe mix | 100 μL | 200 μL |
41304-C | DNA Dilution Buffer | 2×2 mL | 4×2 mL |
41304-D | E.coli DNA Control（30 ng/μL） | 25 μL | 50 μL |
【注】：適用機(jī)型（包含但不限于以下儀器）：
Bio-Rad：CFX96 Optic Module；
Thermo Scientific：ABI 7500；ABI QuantStudio 5；ABI StepOnePlus；
上海宏石醫(yī)療科技：SLAN-96S.
運(yùn)輸和保存方法
冰袋運(yùn)輸。-20℃儲(chǔ)存，有效期2年。收到貨后，建議將D組分E.coli DNA Control儲(chǔ)存于－80℃，其它組分儲(chǔ)存于－20℃。
注意事項(xiàng)
1. 加樣和配液步驟盡量都在冰上操作。
2. 每個(gè)組分在使用前都應(yīng)充分震蕩混勻，低速離心。
3. 為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
4. 本產(chǎn)品僅作科研用途。
使用方法
一、E.coli DNA Control的稀釋和標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備
用試劑盒中提供的DNA Dilution Buffer將E.coli DNA Control進(jìn)行梯度稀釋，稀釋濃度依次為 300 pg/μL、30 pg/μL、3 pg/μL、300 fg/μL、30 fg/μL。
具體操作如下：
1. 將試劑盒中的E.coli DNA Control和 DNA Dilution Buffer置于冰上融化，待*融化后，輕微振蕩混勻，低速離心10 sec。
2. 取6支干凈的1.5 mL離心管，分別標(biāo)記為 3 ng/μL，①，②，③，④，⑤。
3. 在標(biāo)記為3 ng/μL的1.5 mL離心管中加90 μL DNA Dilution Buffer和10 μL E.coli DNA Control，即稀釋為 3 ng/μL，振蕩混勻后短時(shí)間快速離心10 sec，該濃度可分裝置于－80℃短期保存（不超過(guò)3個(gè)月），使用時(shí)避免反復(fù)凍融。
4. 在①，②，③，④，⑤管中先分別加入90 μL DNA Dilution Buffer，再進(jìn)行梯度稀釋，稀釋方法如下：
稀釋管 | 稀釋比例 | 終濃度 |
① | 10 μL 3 ng/μL+90 μL DNA Dilution Buffer | 300 pg/μL |
② | 10 μL ①+90 μL DNA Dilution Buffer | 30 pg/μL |
③ | 10 μL ②+90 μL DNA Dilution Buffer | 3 pg/μL |
④ | 10 μL ③+90 μL DNA Dilution Buffer | 300 fg/μL |
⑤ | 10 μL ④+90 μL DNA Dilution Buffer | 30 fg/μL |
【注】：1. 每個(gè)濃度做3個(gè)復(fù)孔。該試劑可測(cè)試30 fg/μL-3 ng/μL線性范圍，如需要，可擴(kuò)大或縮小線性范圍。
2. 為減少反復(fù)凍融次數(shù)和避免污染，建議初次使用時(shí)將DNA定量參考品分裝儲(chǔ)存于－80℃。
3. 已融化未使用的DNA Dilution Buffer可保存于2-8℃ 7天，如長(zhǎng)時(shí)間不用請(qǐng)放置于－20℃。
4. 為確保模板*混勻，每個(gè)梯度稀釋時(shí)需震蕩混勻1 min以上。
二、加樣回收質(zhì)控QC的制備
根據(jù)需要設(shè)QC中的E.coli DNA加樣濃度（以制備加3 pg/μL DNA量的樣本QC為例），具體操作如下：
取100 μL待測(cè)樣本加入1.5 mL干凈的離心管中，再加入10 μL②，混勻，標(biāo)記為加樣回收QC。
加樣回收QC和同批待測(cè)樣本一起進(jìn)行樣本前處理，制備加樣回收QC純化液。
三、標(biāo)準(zhǔn)品回收質(zhì)控QC的制備（可選）
根據(jù)需要設(shè)QC中的E.coli DNA標(biāo)準(zhǔn)品濃度（以加3 pg/μL DNA 標(biāo)準(zhǔn)品為例），具體操作如下：
取100 μL 3 pg/μL定量參考品的稀釋液加入1.5 mL干凈的離心管中，標(biāo)記為標(biāo)準(zhǔn)品回收QC。
標(biāo)準(zhǔn)品QC和同批待測(cè)樣本一起進(jìn)行樣本前處理，制備標(biāo)準(zhǔn)品QC純化液。
四、陰性質(zhì)控NC的制備
根據(jù)實(shí)驗(yàn)設(shè)置陰性質(zhì)控，具體操作如下：
取100 μL樣本基質(zhì)溶液（或DNA Dilution Buffer）加入1.5 mL干凈的離心管中，標(biāo)記為陰性質(zhì)控NC。
陰性質(zhì)控NC和同批待測(cè)樣本一起進(jìn)行樣本前處理，制備成陰性質(zhì)控NC純化液。
五、反應(yīng)體系
組分 | 體積（μL） |
E.coli qPCR mix | 18 |
E.coli Primer&probe mix | 2 |
DNA template | 20 |
總體積 | 40 |
【注】：1. 根據(jù)反應(yīng)孔數(shù)計(jì)算本次所需的 qPCR MIX 總量：qPCR MIX =（反應(yīng)孔數(shù)+2）×40 μL（含有2孔的損失量）。實(shí)驗(yàn)中每一個(gè)樣品模板最好重復(fù)做3個(gè)以上。
2. 加樣完成密封好管子后，請(qǐng)先低速離心10 sec將管壁的液體離心收集至管底，再震蕩混勻5 sec以上，*混勻反應(yīng)液，再低速離心10 sec將管壁的液體離心收集至管底，如有氣泡，需將氣泡排盡。
下圖為參考板位：
該示例表示的是檢測(cè)6個(gè)濃度梯度的DNA標(biāo)準(zhǔn)曲線、1個(gè)無(wú)模板對(duì)照NTC、3個(gè)陰性質(zhì)控NC、3個(gè)待測(cè)樣本、3個(gè)加樣回收QC和3個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品回收QC。每個(gè)檢測(cè)做3個(gè)重復(fù)孔。
六、擴(kuò)增程序參數(shù)設(shè)置（兩步法）（以ABI公司7500 qPCR儀、軟件版本2.0為例）
創(chuàng)建空白新程序，選擇絕對(duì)定量檢測(cè)模板。
創(chuàng)建1個(gè)檢測(cè)探針，命名為E.coli-DNA，選擇報(bào)告熒光基團(tuán)為FAM，猝滅熒光基團(tuán)為none。
在Assign target (s) to the selected wells面板中，將標(biāo)準(zhǔn)曲線孔的Task一欄設(shè)置為Standard，并且在Quantity 一欄分別賦值為300000、30000、3000、300、30（含義為每孔的DNA濃度，單位為fg/μL），并且在相應(yīng)的sample name一欄中命名為300 pg/μL，30 pg/μL，3 pg/μL，300 fg/μL，30 fg/μL；將無(wú)模板對(duì)照NTC孔的Task一欄設(shè)置為NTC；將陰性質(zhì)控NC孔、待測(cè)樣本孔、樣本QC孔的Task一欄設(shè)置為Unknown，并且在相應(yīng)的Sample Name一欄中命名為NTC、NC、YP、QC，之后點(diǎn)擊 。
4. 擴(kuò)增程序設(shè)置：設(shè)置反應(yīng)體積40 μL。
循環(huán)步驟 | 溫度（℃） | 時(shí)間 | 循環(huán)數(shù) |
預(yù)變性 | 95℃ | 10 min | 1 |
變性 | 95℃ | 15 sec | 40 |
退火/延伸（收集熒光） | 60℃ | 30 sec |
七、qPCR 結(jié)果分析
在 Analysis的Amplification Plot面板中，系統(tǒng)會(huì)自動(dòng)給出Threshold，有時(shí)系統(tǒng)給出的Threshold離基線太近，導(dǎo)致復(fù)孔之間Ct相差甚遠(yuǎn)，可手動(dòng)調(diào)節(jié)Threshold至合適位置，點(diǎn)擊Analyze。此時(shí)可在Multicomponent Plot初步查看擴(kuò)增曲線的形態(tài)是否正常。
2. 在Analysis的Standard Curve面板中，可讀取標(biāo)準(zhǔn)曲線的斜率（Slope）、截距（Intercept）、R2、擴(kuò)增效率（Eff%）。正常的標(biāo)曲，R2＞0.99；90%≤Eff%≤110%。
3. 在Analysis的View well table面板中，Quantity一欄可讀取無(wú)模板對(duì)照NTC、陰性質(zhì)控NCS、待測(cè)樣本、樣本ERC的檢測(cè)值，單位為fg/μL，后續(xù)可在檢測(cè)報(bào)告中將單位換算成pg/μL或pg/mL。
HB220322
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