網(wǎng)狀纖維染色銀染

網(wǎng)狀纖維染色銀染實驗服務(wù)

實驗技術(shù)簡介:網(wǎng)狀纖維(reticular fiber)網(wǎng)狀纖維在疏松結(jié)締組織中含量較少,纖維較細，有分支,彼此交織成網(wǎng)狀。用浸銀法可將纖維染成黑色，故又稱嗜銀纖維(argyrophilic fiber)。電鏡觀察，網(wǎng)狀纖維具有等間距的橫紋結(jié)構(gòu)，其化學(xué)成分也是膠原蛋白，和膠原纖維相似。網(wǎng)狀纖維的嗜銀性是由于包在原纖維上的糖蛋白所致。

實驗技術(shù)原理:氨銀液被組織吸咐與組織中的蛋白結(jié)合，經(jīng)甲醛還原成黑色的金屬銀沉積于組織內(nèi)及表面。用氯化金調(diào)色后，再用硫代硫酸鈉液洗去未還原的銀鹽,從而將組織內(nèi)的網(wǎng)狀纖維清晰地顯示出來。

實驗操作流程:

1、切片脫蠟至水，蒸餾水洗,

2、用0.5%高 錳酸鉀氧化5min,

3、自來水洗，繼用蒸餾水洗,

4、用2%草酸漂白切片2min,

5、自來水洗，蒸餾水洗,

6、2%硫酸鐵鈹媒染5min,

7、水洗，蒸餾水洗,

8、滴入氨性銀溶液浸染3 -5min,

9、蒸餾水洗數(shù)次,

10、 10%甲醛液還原5-10min,

11、水洗2min,

12、用核固紅染色10-15min,

13、水洗10min, 各級酒精脫水,

14、 常規(guī)透明，中性樹膠封固。

結(jié)果:網(wǎng)狀纖維黑色，核紅色,膠原纖維黃棕色。

實驗注意事項:

客戶提供:

1、組織樣品:新鮮組織放入液氮或80度保存，組織不少于100mg;

2、培養(yǎng)細胞:通過細胞計數(shù)取不少于2x106個細胞于EP管,加入0 .5ml生理鹽水或蛋白保護劑，溝后保存于冰箱(-80°C, 避免反復(fù)凍融) ;

3、血液細胞標(biāo)本:以抗凝管保存血樣或以淋巴細胞分離液分離細胞后加入05ml生理鹽水或蛋白保護劑,保存(-80°C可長期保存,避免反復(fù)凍融) ;

4、血清或細胞培養(yǎng)液標(biāo)本:離心去掉雜質(zhì)后取上清入EP管,保存(49C可保存15-20天, -80°C可長期保存，避免反復(fù)凍融) ;

5、石蠟切片，冰凍切片以及細胞爬片，涂片等。

6、樣本運輸:可選擇以下任何一種方式寄送標(biāo)本

組織樣本、細胞樣本以干冰運輸或加入蛋白保護劑后，加冰袋寄送;

細胞樣本也可直接寄送培養(yǎng)瓶(密封保證不污染、培養(yǎng)液不漏出) ;

血清或上清液直接加冰袋寄送(視快遞時效一般控制在2-3天內(nèi))，

交付標(biāo)準(zhǔn):

1、圖片;

2、完整項目報告(材料、試劑、儀器、方法、數(shù)據(jù)分析、實驗結(jié)果)。

其他:

1、所使用的玻璃儀器，須用清潔液處理。

2、配制氨銀溶液時，氨水加入的量不能過多或不足，過多感應(yīng)下降，會使液體過堿，滴染時，切片容易脫落，過少則感應(yīng)上升，浸染效果不佳，不好掌握。

3、配制氨銀液時，有可能用玻璃蒸餾水。

4、使用的化學(xué)試劑應(yīng)盡量用分析純以上。

5、切片氧化漂白應(yīng)*，不能使殘存的福爾馬林留于片上，否則將導(dǎo)致過早還原而使浸染不均勻。

6、如果有某種原因而導(dǎo)致切片脫落時，應(yīng)使用涂膠的載片，以增加附貼性。

7、如有可能，氨銀溶液以新配為佳，但也可保存于4°C冰箱中達一 個月左右,這種液體易揮發(fā)，用后即須蓋緊，當(dāng)沉淀物出現(xiàn)時，該溶液應(yīng)拋棄。

8、應(yīng)秀氯化金調(diào)色時，可將膠原纖維著染的黃棕色去除掉。