蛋白雙向(2-D)電泳實驗服務

實驗技術(shù)簡介:

雙向電泳(two-dimensional electrophoresis)是等電聚焦電泳和SDS -PAGE的組合，即*行等電聚焦電泳(按照pI分離)，然后再進行SDS-PAGE (按照分子大小)， 經(jīng)染色得到的電泳圖是個二維分布的蛋白質(zhì)圖。

實驗原理:

蛋白雙向(2-D)電泳實驗服務是目前為止zui有效、使用最多的蛋白分離方法。差異蛋白質(zhì)組學是在雙向電泳后用考麻斯亮藍、銀離子或熒光染料等將蛋白斑點染色,然后比較差異。本公司在各類微生物、培養(yǎng)細胞、動植物組織(如動物軟硬組織、體液、植物種子、葉子等)、亞細胞組分的雙向電泳分離及后續(xù)質(zhì)譜鑒定中均有豐富的經(jīng)驗。

蛋白雙向(2-D)電泳實驗服務技術(shù)服務項目:

1.根據(jù)客戶需求定制蛋白質(zhì)組學實驗方案

2.各種規(guī)格膠條長度的雙向電泳

3.考麻斯亮藍染色、銀離子染色; .

4.DIGE系統(tǒng)雙向電泳。

5.圖像分析

6.切膠質(zhì)譜分析

服務說明:

1.我們的實驗只對我們制作的樣本負責,如您提供的是直接做等點聚焦的樣本，我們不敢保證蛋白的有效分離。

2.蛋白質(zhì)組學實驗的總體實驗流程;

實驗流程:

1、樣本制備

2、固相預制膠條水化

3、第--向等電聚焦(IEF)

4、膠條平衡→第二向SDS-PAGE電泳

5、凝膠染色檢測

6、圖片掃描

雙向電泳服務結(jié)果提交:

1、實驗的試劑耗材、儀器設備、操作過程--份;

2、實驗結(jié)果凝膠掃描圖片;

3、電泳凝膠(可收費干膠) ;

4、剩余樣本。

說明:

1.樣品制備指可用通常程序處理的原樣，如樣品較特殊(需要去除核酸、鹽等雜質(zhì)或需要濃縮)，價格將視進一步處理的難度和耗材用量另行商定;

2.建議客戶提供的原樣(組織、細胞、菌體等)濕重不少于100mg如直接提供蛋白提取物，則濃度不少于4ug/ul,總量不少于5mg;

3.樣品的還原和烷基化過程一般在制備時進行;

4.圖象處理與切膠主要是手I操作成本。

客戶方需提供:

細胞，組織或蛋白。

實驗周期:

5-10天

可提供技術(shù)支持: .

1、從現(xiàn)有的生物有機體基因組中,經(jīng)過酶切消化或PCR擴增等方法，獲得帶有目的基因的DNA片段。

2、在體外，將帶有目的基因的外源DNA片段連接到具有選擇標記的載體分子上,形成能夠自主復制的重組DNA分子。

3、將重組DNA分子轉(zhuǎn)移到適宜的受體細胞，并使其一起增殖。

4、從大量的細胞繁殖群體中，篩選出獲得了重組DNA分子的受體細胞克隆。

5、由篩選出來的受體細胞克隆，提取出已經(jīng)得到擴增的目的基因，供進一步分析研究使用。

6、將分離到的目的基因克隆到表達載體上，導入受體細胞，使之在新的遺傳背景下實現(xiàn)功能表達，產(chǎn)生出人類所需要的物質(zhì)。