40101ES Trypsin 1:2501:250(粉末)
- 公司名稱(chēng) 翌圣生物科技(上海)股份有限公司
- 品牌 BioAssay Systems
- 型號(hào) 40101ES
- 產(chǎn)地
- 廠商性質(zhì) 生產(chǎn)廠家
- 更新時(shí)間 2025/2/7 13:36:30
- 訪問(wèn)次數(shù) 226
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供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 醫(yī)療衛(wèi)生,生物產(chǎn)業(yè),制藥 |
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產(chǎn)品描述
(Trypsin)是一種普遍發(fā)現(xiàn)于脊椎動(dòng)物消化系統(tǒng)的蛋白酶,能水解蛋白,以無(wú)活性的原(trypsinogen)的形式分泌于胰腺中。其切割肽鏈的位點(diǎn)主要位于或的羧基端(二者緊接的情況除外)。包括兩個(gè)亞基,α亞基(有2個(gè)多肽鏈構(gòu)成)和β亞基(有1個(gè)多肽鏈構(gòu)成)。其水解活性可被多種抑制劑抑制,包括:1)有機(jī)磷化合物,如氟磷酸異丙酯;2)來(lái)源于胰腺、大豆、青豆、蛋清的天然抑制劑;3)銀離子;4)特定蛋白酶抑制劑,如AEBSF、DFP、PMSF、TLCK等;
本品是來(lái)源于的凍干粉,經(jīng)γ射線處理滅活病毒,酶活≥ 250 units/mg。廣泛用于細(xì)胞傳代,將貼壁細(xì)胞從培養(yǎng)板上消化水解下來(lái)制備單細(xì)胞懸液,常用的工作濃度是0.25-5%(w/v)。
產(chǎn)品性質(zhì)
中文別名(Chinese synonym) | ,豬胰臟來(lái)源; |
英文別名(English synonym) | Trypsin, porcine pancreas; Parenzyme; Tryptar; Trypure; Parenzymol; U-4858; |
CAS號(hào)(CAS NO.) | 9002-07-7 |
分子量(Molecular weight) | 23.8 kDa |
外觀(Apperance) | 白色至類(lèi)白色粉末 |
消光系數(shù)(Extinction coefficient) | E1%280=14.3 |
等電點(diǎn)(Isoelectric Point) | pH 10.5 |
溶解性(Solubility) | 溶于水,幾乎不溶于乙醇和甘油 |
比活力(Specific activity)* | >250 U/mg |
*活力定義(Unit definition):The activity causing a change in absorbance of 0.003/minute at 253 nm. |
運(yùn)輸和保存方法
冰袋運(yùn)輸。凍干粉2~8℃干燥保存,有效期2年。
注意事項(xiàng)
1)為了您的安全和健康,請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
2)胰蛋白凍干粉產(chǎn)品常遇到的活性定義及其轉(zhuǎn)換,
1 BAEE U:在25℃,pH 7.6 的條件下,以BAEE為底物,3.2 mL的反應(yīng)體系中,A253吸光值每分鐘會(huì)發(fā)生0.001的變化即為一個(gè)酶活單位。
1 TAME U:在25℃,pH 8.2,0.001 M的Ca2+的條件下,每分鐘水解 1 μM的TAME 的樣品量。
1 USP U:在條件下,每分鐘引起吸光值發(fā)生0.003的變化的樣品活性。
1 TAME unit = 19.2 USP or NF units = 57.5 BAEE Unit
3)本產(chǎn)品僅作科研用途!
使用方法(用于貼壁細(xì)胞的消化)
1. 濃縮液(0.25%)的配置
稱(chēng)取0.25 g粉末溶于100 mL HBSS(無(wú)鈣,鎂)緩沖液,并調(diào)整pH在7.4-7.6范圍。此時(shí)得到的即0.25%濃縮液,置于4℃短時(shí)間保存,3個(gè)月相對(duì)穩(wěn)定。建議分裝凍存,利于長(zhǎng)期保存。解凍后可能會(huì)出現(xiàn)少量沉淀,屬于正常現(xiàn)象,不會(huì)影響其使用效力。
【注】凍干粉也可溶于其他不含鈣鎂離子的平衡鹽緩沖液如PBS。
細(xì)胞的消化可以直接用溶液,但通常使用的是-EDTA溶液,因?yàn)镋DTA是一種II價(jià)金屬離子螯合劑,能夠螯合鈣鎂離子,減少細(xì)胞間的粘附性,從而增強(qiáng)的活性。
2. -EDTA溶液的配制(0.25%(w/v)):
無(wú)Ca2+、Mg2+及酚紅的 | To 500 mL |
1.25 g | |
EDTA | 0.10 g |
3. 貼壁細(xì)胞的消化
方法一
1)移除培養(yǎng)板中的培養(yǎng)液,用不含Ca2+、Mg2+的緩沖液清洗單層貼壁細(xì)胞,直至清除殘余血清,吸除鹽溶液。
2)向上述貼壁細(xì)胞中加入適量-EDTA溶液,至覆蓋細(xì)胞即可。
3)傾斜培養(yǎng)板,吸取-EDTA溶液,反復(fù)吹洗細(xì)胞數(shù)次,注意消化時(shí)間不可過(guò)長(zhǎng)。
【注】消化時(shí)間跟細(xì)胞類(lèi)型、細(xì)胞密度、所用血清濃度、活性、以及消化前細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)間有關(guān)。
4)將細(xì)胞于室溫孵育直至細(xì)胞分離,期間可將細(xì)胞培養(yǎng)板置于顯微鏡下觀察,避免細(xì)胞過(guò)度消化,從而避免對(duì)細(xì)胞造成的損傷。
5)加入10 mL細(xì)胞培養(yǎng)液,輕輕反復(fù)吹吸從而將細(xì)胞從培養(yǎng)板底盡可能吹離,吹洗時(shí)盡量避免氣泡的產(chǎn)生。
6)進(jìn)行下一步操作或?qū)⒓?xì)胞凍存。
【注】操作時(shí)務(wù)必小心謹(jǐn)慎,同時(shí)時(shí)刻注意避免交叉污染發(fā)生的可能性。
方法二
以25 cm2 T-Flask為例,
1)無(wú)菌條件下吸除培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)液。
2)加入3 mL冰的-EDTA溶液(配方同上)。
3)孵育30 s(或更長(zhǎng),如果需要)。置于低倍鏡觀察,如果有部分細(xì)胞開(kāi)始變圓脫離培養(yǎng)瓶壁,此時(shí)可吸除溶液,繼續(xù)孵育至細(xì)胞脫落。
4)加入10 mL新鮮MEM培養(yǎng)液,可用槍快速的將培養(yǎng)液加入,有助于使細(xì)胞脫落;然后使用相同的槍頭,輕輕地多次吹洗細(xì)胞并混勻后,吸取其中5 mL于一個(gè)新的培養(yǎng)瓶中。
5)置培養(yǎng)條件下孵育。
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