修飾蛋白質(zhì)組學(xué)

實(shí)驗(yàn)介紹

蛋白翻譯后修飾（post-translation modifications,PTM）是指對(duì)翻譯后的蛋白質(zhì)進(jìn)行共價(jià)加工的過(guò)程，通過(guò)在一個(gè)或多個(gè)氨基酸殘基加上修飾基團(tuán)，可以改變蛋白質(zhì)的理化性質(zhì)，進(jìn)而影響蛋白質(zhì)的空間構(gòu)象和活性狀態(tài)，亞細(xì)胞定位，折疊機(jī)器穩(wěn)定性及蛋白互作。蛋白質(zhì)發(fā)生翻譯后修飾時(shí)其分子質(zhì)量會(huì)發(fā)生相應(yīng)的改變，通過(guò)質(zhì)譜能夠精確測(cè)定蛋白質(zhì)的分子質(zhì)量，但是含量低且動(dòng)態(tài)范圍大，需要針對(duì)不同修飾類(lèi)型采用相應(yīng)富集方法。常見(jiàn)的蛋白翻譯后修飾主要有磷酸化、乙?；?、糖基化和泛素化等。

實(shí)驗(yàn)流程

分類(lèi)：

蛋白翻譯后修飾位點(diǎn)鑒定：IP獲得目的蛋白，SDS-PAGE分離純化目的蛋白，在經(jīng)過(guò)LC-MS/MS質(zhì)譜，數(shù)據(jù)庫(kù)檢索得到蛋白上的修飾位點(diǎn)。

磷酸化蛋白質(zhì)組鑒定：采用主流的TiO2/IMAC富集方法，特異性高，富集效率好。

琥珀酰化蛋白質(zhì)組鑒定：通過(guò)高分辨率、高掃描速度的質(zhì)譜，對(duì)富集的琥珀酰化肽段進(jìn)行大規(guī)模鑒定。

巴豆?；鞍踪|(zhì)組鑒定：采用化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定巴豆?；瘶?shù)脂IP的方法，鑒定樣品中發(fā)生巴豆?；牡鞍踪|(zhì)以及相應(yīng)的巴豆?；稽c(diǎn)。

糖基化蛋白質(zhì)組鑒定：采用主流凝集素親和法富集N-糖基化肽段，旨在揭示蛋白質(zhì)的調(diào)節(jié)功能。

乙?；鞍踪|(zhì)組鑒定：可用于藥物作用靶點(diǎn)、疾病標(biāo)志物篩選、植物脅迫/抗逆、作用機(jī)制等方面的研究。

優(yōu)勢(shì)：

（1）高特異性的修飾抗體

（2）高分辨率、高靈敏度質(zhì)譜儀

（3）鑒定通量高

（4）可與代謝組學(xué)等進(jìn)行多組學(xué)聯(lián)合分析