修飾蛋白質(zhì)組學

實驗介紹

蛋白翻譯后修飾（post-translation modifications,PTM）是指對翻譯后的蛋白質(zhì)進行共價加工的過程，通過在一個或多個氨基酸殘基加上修飾基團，可以改變蛋白質(zhì)的理化性質(zhì)，進而影響蛋白質(zhì)的空間構(gòu)象和活性狀態(tài)，亞細胞定位，折疊機器穩(wěn)定性及蛋白互作。蛋白質(zhì)發(fā)生翻譯后修飾時其分子質(zhì)量會發(fā)生相應(yīng)的改變，通過質(zhì)譜能夠精確測定蛋白質(zhì)的分子質(zhì)量，但是含量低且動態(tài)范圍大，需要針對不同修飾類型采用相應(yīng)富集方法。常見的蛋白翻譯后修飾主要有磷酸化、乙?；?、糖基化和泛素化等。

實驗流程

分類：

蛋白翻譯后修飾位點鑒定：IP獲得目的蛋白，SDS-PAGE分離純化目的蛋白，在經(jīng)過LC-MS/MS質(zhì)譜，數(shù)據(jù)庫檢索得到蛋白上的修飾位點。

磷酸化蛋白質(zhì)組鑒定：采用主流的TiO2/IMAC富集方法，特異性高，富集效率好。

琥珀?；鞍踪|(zhì)組鑒定：通過高分辨率、高掃描速度的質(zhì)譜，對富集的琥珀?；亩芜M行大規(guī)模鑒定。

巴豆?；鞍踪|(zhì)組鑒定：采用化學性質(zhì)穩(wěn)定巴豆?；瘶渲?/span>IP的方法，鑒定樣品中發(fā)生巴豆?；牡鞍踪|(zhì)以及相應(yīng)的巴豆?；稽c。

糖基化蛋白質(zhì)組鑒定：采用主流凝集素親和法富集N-糖基化肽段，旨在揭示蛋白質(zhì)的調(diào)節(jié)功能。

乙酰化蛋白質(zhì)組鑒定：可用于藥物作用靶點、疾病標志物篩選、植物脅迫/抗逆、作用機制等方面的研究。

優(yōu)勢：

（1）高特異性的修飾抗體

（2）高分辨率、高靈敏度質(zhì)譜儀

（3）鑒定通量高

（4）可與代謝組學等進行多組學聯(lián)合分析