IKCA1 (KCNN4) HEK293 細(xì)胞系

IKCA1（KCNN4）HEK293細(xì)胞系是表達(dá)人類(lèi)IKCA1的工程化HEK293細(xì)胞，也稱(chēng)為KCNN4（中等電導(dǎo)鈣激活鉀通道蛋白4），IK1，hKCa4和hSK4，Genbank登錄號(hào)NM_002250。該細(xì)胞系已通過(guò)使用膜電位敏感熒光染料（DiBAC4(3)）的細(xì)胞實(shí)驗(yàn)和西方印跡法對(duì)IKCA1表達(dá)進(jìn)行驗(yàn)證。

背景

IKCA1，也稱(chēng)為中等電導(dǎo)鈣激活鉀通道蛋白4，IK1，hKCa4和hSK4，是可能的異源四聚體電壓獨(dú)立鉀通道的一部分，該通道由細(xì)胞內(nèi)鈣激活。激活后會(huì)跟隨膜超極化，促進(jìn)鈣內(nèi)流。編碼的蛋白可能是T淋巴細(xì)胞中主要的鈣激活鉀通道的一部分，但它也存在于內(nèi)皮細(xì)胞和心臟成纖維細(xì)胞中。它們有助于血管平滑肌細(xì)胞增殖、遷移和心臟纖維化。在乳腺癌（BC）細(xì)胞中發(fā)現(xiàn)IKCA1高水平存在，耗竭后導(dǎo)致腫瘤形成減少。IKCA1可以被小分子調(diào)節(jié)，這些可能在BC和心血管疾病治療中提供z療機(jī)會(huì)。

作為BPS Bioscience在中國(guó)的區(qū)域總代理，艾美捷科技強(qiáng)烈推薦BPS Bioscience熱銷(xiāo)產(chǎn)品IKCA1 (KCNN4) HEK293 細(xì)胞系。產(chǎn)品僅用于科研，不可用于臨床診斷。

應(yīng)用

在研究和藥物發(fā)現(xiàn)過(guò)程中篩選和驗(yàn)證IKCA1的激動(dòng)劑和拮抗劑。

細(xì)胞解凍

1. 從液氮儲(chǔ)存中取出一個(gè)細(xì)胞小瓶。在準(zhǔn)備好解凍之前，保持在干冰上。

2. 準(zhǔn)備好解凍時(shí)，在37°C水浴中搖晃裝有冷凍細(xì)胞的小瓶大約60秒。細(xì)胞解凍后（可能比60秒稍快或稍慢），迅速將小瓶的全部?jī)?nèi)容轉(zhuǎn)移到一個(gè)空的50毫升錐形管中。

注意：在37°C水浴中放置細(xì)胞過(guò)久將導(dǎo)致活性迅速喪失。

3. 使用10毫升的血清學(xué)移液管，慢慢向含有細(xì)胞的錐形管中加入10毫升預(yù)熱的解凍培養(yǎng)基1。解凍培養(yǎng)基1應(yīng)滴加同時(shí)輕輕搖晃錐形管，以實(shí)現(xiàn)溫和混合并避免滲透沖擊。

4. 立即以300 x g的速度離心細(xì)胞5分鐘，去除培養(yǎng)基并將細(xì)胞在5毫升預(yù)熱的解凍培養(yǎng)基1中重懸。

5. 將重懸的細(xì)胞轉(zhuǎn)移到T25或T75培養(yǎng)瓶中，并在37°C、5% CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

6. 培養(yǎng)24小時(shí)后，檢查細(xì)胞附著和活性。更換培養(yǎng)基為新鮮的解凍培養(yǎng)基1，并繼續(xù)在37°C、5% CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，直到細(xì)胞準(zhǔn)備好分裂。

7. 細(xì)胞應(yīng)在w全融合前傳代。在s次傳代及后續(xù)傳代中，使用生長(zhǎng)培養(yǎng)基1B。

細(xì)胞傳代

1. 抽去培養(yǎng)基，用無(wú)Ca2+/Mg2+的磷酸鹽緩沖液（PBS）沖洗細(xì)胞，并用0.05% y酶/EDTA從培養(yǎng)容器中分離細(xì)胞。

2. 一旦細(xì)胞分離，加入生長(zhǎng)培養(yǎng)基1B并轉(zhuǎn)移到試管中。

3. 以300 x g的速度離心細(xì)胞5分鐘，去除培養(yǎng)基并將細(xì)胞在生長(zhǎng)培養(yǎng)基1B中重懸。

4. 按照推薦的亞培養(yǎng)比例1:10至1:20，每周一次或兩次將細(xì)胞種入新的培養(yǎng)容器中。

細(xì)胞冷凍

1. 抽去培養(yǎng)基，用無(wú)Ca2+/Mg2+的PBS沖洗細(xì)胞，并用0.05% y酶/EDTA從培養(yǎng)容器中分離細(xì)胞。

2. 一旦細(xì)胞分離，加入生長(zhǎng)培養(yǎng)基1B并計(jì)數(shù)細(xì)胞。

3. 以300 x g的速度離心細(xì)胞5分鐘，去除培養(yǎng)基并將細(xì)胞在4°C冷凍培養(yǎng)基（BPS Bioscience #79796）中重懸，細(xì)胞濃度約為2 x 10^6個(gè)細(xì)胞/ml。

4. 將1 ml的細(xì)胞懸浮液分裝到每個(gè)冷凍小瓶中。將小瓶放入保溫容器中緩慢冷卻，并在-80°C下保存過(guò)夜。

5. 次日將小瓶轉(zhuǎn)移到液氮中長(zhǎng)期保存。

注意：建議在早期傳代時(shí)擴(kuò)增細(xì)胞并至少冷凍10個(gè)小瓶以備將來(lái)使用。

圖1. 離子霉素誘導(dǎo)的細(xì)胞內(nèi)鈣水平增加激活在IKCA1（KCNN4）HEK293細(xì)胞系中表達(dá)的IKCA1通道。

IKCA1（KCNN4）HEK293細(xì)胞和野生型HEK93細(xì)胞與DiBAC4(3)預(yù)孵化，然后用離子霉素（1 μM）處理。通過(guò)測(cè)量細(xì)胞熒光（λ激發(fā)485±10nm，λ發(fā)射528±10nm）監(jiān)測(cè)通道激活。結(jié)果表明，用離子霉素處理的IKCA1-HEK293細(xì)胞由于通道激活引起的超極化而表現(xiàn)出熒光減少。值表示為添加離子霉素后/添加離子霉素前的細(xì)胞熒光。

文獻(xiàn)參考：

Ghanshani S., et al., J Biol Chem. 275(47): 37137-37149.

Hoffman J.F., et al., 2003 PNAS 100 (12): 7366-7371.

de-Allie F.A., et al., 1996, Br J Pharmacol. 117(3):479-487.

Terstappen G.C., et al., 2003 Neurosci Lett. 346(1-2):85-88.

Gross D., et al., 2022 Cell Death and Disease 13:902.

BPS Bioscience是一家通過(guò)ISO 9001:2015認(rèn)證的生命科學(xué)領(lǐng)域的供應(yīng)商，公司一直致力于開(kāi)發(fā)藥物研發(fā)領(lǐng)域的重組蛋白酶、蛋白酶活性/抑制劑篩選試劑盒和慢病毒等工具。公司由Henry Zhu博士于2005年創(chuàng)立，從創(chuàng)立至今一直致力于提供藥物研發(fā)領(lǐng)域的創(chuàng)新解決方案，以推動(dòng)新的藥物發(fā)現(xiàn)。公司主要關(guān)注的領(lǐng)域包括免疫療法、表觀遺傳學(xué)、CRISPR、細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)等，主要提供激酶、磷酸二酯酶、磷酸酶、組蛋白去甲基化酶、組蛋白甲基化轉(zhuǎn)移酶、HDACs、聚ADP核糖聚合酶等。 

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