自1982年第一款重組蛋白藥物進入市場(第一款人胰島素¹實現(xiàn)商業(yè)化)以來，生物制藥領域見證了蛋白質(zhì)治療藥物數(shù)量的持續(xù)擴大。例如，單克隆抗體(mAb)、生長因子、激素是目前用于治療癌癥、HIV、多發(fā)性硬化癥等多種疾病的生物治療藥物²。這些生物治療藥物的復雜生產(chǎn)工藝涉及精確的蛋白質(zhì)定量，以確保最終配方的療效和質(zhì)量。此外，蛋白質(zhì)還是研究酶活性、基因表達調(diào)控、信號通路和疾病機理的各種生物分子檢測的關(guān)鍵成分。所有執(zhí)行這些檢測的實驗室均會進行蛋白質(zhì)定量分析，以揭示復雜的生物分子機制。

根據(jù)所需的精度、動態(tài)定量范圍、與潛在污染物(洗滌劑、還原劑和溶劑)的相容性以及蛋白質(zhì)間的差異，目前有多種方法可用于蛋白質(zhì)定量。這些方法包括直接蛋白質(zhì)紫外吸收測量法(A₂₈₀)、銅基測定法(BCA和Lowry方法)、蛋白質(zhì)-染料復合物吸收(Bradford)、熒光基測定和更復雜的測定，如ELISA或Western-Blot測定。

在本研究中，選擇熒光法是基于其優(yōu)異的靈敏度、特異性以及特別適合于復雜生物樣品中低豐度蛋白質(zhì)的檢測。使用珀金埃爾默F(xiàn)L 6500™熒光光譜儀監(jiān)測NanoOrange^®熒光團與BSA非共價相互作用時觀察到的熒光增強，并構(gòu)建了標準曲線。

• PE熒光分光光度計

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