血液中細菌內(nèi)毒素常用測定方法

1968年自Levin和Bang發(fā)現(xiàn)并建立鱟試驗方法以來，就逐漸得到臨床及藥檢部門的重視和研究。尤其是在臨床檢驗方面的應用更是飛速發(fā)展。在鱟試驗法建立的初期，Levin就使用該法用于測定病人血漿中的內(nèi)毒素，之后其應用范圍也越來越廣。隨著科學技術的不斷進步發(fā)展，鱟試驗方法的研究也逐漸完善，從最初的定性凝膠法逐漸向靈敏度更高的微量定量方面發(fā)展，因此使血液中內(nèi)毒素測定變得更加快速、準確，更加適用于臨床各種內(nèi)毒素感染癥狀的診斷。

目前，在日本國內(nèi)，以合成基質法為中心的血漿中的內(nèi)毒素含量測定研究進行得比較深入，而且也是近年來文獻報道最多的，據(jù)說在此領域日本的研究工作一直處于世界前列。加之測定儀器以及專用TAL試劑不斷完善，使測定方法方面也越來越方便簡單。同時用于血漿內(nèi)毒素測定試劑在日本已形成商品化，并獲得厚生省批準。

我國在70年代開始就已經(jīng)使用TAL試劑檢測病人血漿中的內(nèi)毒素研究，但由于檢測方法及TAL試劑的開發(fā)緩慢，目前在臨床上的應用還很少，同國外間差距還很大。下面就血漿中內(nèi)毒素測定等方面內(nèi)容作一簡要介紹，同時希望國內(nèi)能在這一領域的研究和應用盡快趕上國際發(fā)展水平，以提高我們內(nèi)毒素研究和檢測水準。

國外常用測定方法

作為機體中細菌內(nèi)毒素測定，除了腎上腺素皮膚試驗外，還主要有發(fā)育雞卵試驗，Pertusis treated mouse test platelet agglutination rat Lethalitytest等的bioassay方法，然而這些方法普通檢出靈敏度低，特異性差，實用性不大。自鱟試驗法建立以來，由于檢出靈敏度高，特異性強，簡便實用，是目前普遍采 用的一種分析手段。作為血液，由于成分組成比較復雜，同時含有許多干擾鱟試驗反應的物質（如各種蛋白酶抑制劑，內(nèi)毒素結合蛋白等），因此分離這些干擾物質即血液前處理工作是極為重要的。目前除去血液中的干擾因子（inhibiter） 的前處理方法主要有：血清稀釋法，pH變動法，氯仿提取法、PCA法等。而用于檢測人體中內(nèi)毒素測定法主要為鱟試驗法中的凝膠法，比濁比色法、免疫測定等方法。其測定原理如下所示:  

隨著分析手段的不斷進步，目前定性的凝膠法已很少使用，相比微量定量的動態(tài)濁度法（kinetic turbimetric Assay）終點比色法以及動態(tài)比色法的使用率逐年上升。尤其在日本臨床普遍采用動態(tài)比色法的分析手段，而且已逐漸發(fā)展到全血的微量定量。