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目錄:北京索萊寶科技有限公司>>生化檢測試劑盒-常量法>>糖原系列>> BC3360-50T/48S焦磷酸化酶(UGP)檢測試劑盒 糖原

焦磷酸化酶(UGP)檢測試劑盒 糖原
  • 焦磷酸化酶(UGP)檢測試劑盒 糖原
參考價 面議
具體成交價以合同協(xié)議為準
參考價 面議
具體成交價以合同協(xié)議為準
  • 品牌 SOLARBIO/索萊寶
  • 型號 BC3360-50T/48S
  • 廠商性質(zhì) 生產(chǎn)商
  • 產(chǎn)品資料 查看pdf文檔
  • 所在地 北京市
屬性

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更新時間:2024-07-29 20:00:59瀏覽次數(shù):1173評價

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CAS 詳詢 純度 詳詢
分子量 詳詢 分子式 詳詢
供貨周期 現(xiàn)貨 規(guī)格 50T/48S
貨號 BC3360 應用領(lǐng)域 環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)業(yè),綜合
主要用途 焦磷酸化酶(UGP)檢測
儲存條件
-20℃
中文名稱
焦磷酸化酶(UGP)檢測試劑盒 糖原
有效期
6個月
單位

英文名稱
UDP-glucose pyrophosphosphprylase(UGP) Activity Assay Kit
檢測方法
紫外分光光度法 Spectrophotometer
規(guī)格
50T/48S

UDPG焦磷酸化酶(UGP)活性檢測試劑盒說明書

紫外分光光度法

注意:本產(chǎn)品試劑有所變動,請注意并嚴格按照該說明書操作。

貨號BC3360

規(guī)格50T/48S

產(chǎn)品組成:使用前請認真核對試劑體積與瓶內(nèi)體積是否一致,有疑問請及時聯(lián)系索萊寶工作人員。

試劑名稱

規(guī)格

保存條件

提取液

液體55 mL×1

2-8℃保存

試劑一

粉劑×1

-20℃保存

試劑二

粉劑×2

2-8℃保存

試劑三

粉劑×2

-20℃保存

試劑四

粉劑×2

-20℃保存

試劑五

液體5 mL×1

2-8℃保存

試劑六

液體15 mL×1

2-8℃保存

溶液的配制:

1. 試劑一:臨用前加30mL蒸餾水充分溶解;用不完的試劑分裝后-20℃保存4,禁止反復凍融。

2. 試劑二:臨用前12.5 mL蒸餾水充分溶解;用不完的試劑2-8℃保存2。

3. 試劑三:臨用前10.7 mL蒸餾水充分溶解;用不完的試劑分裝后-20℃保存4,禁止反復凍融。

4. 試劑四:臨用前11 mL蒸餾水充分溶解;用不完的試劑分裝后-20℃保存2,禁止反復凍融。

5. 工作液的配制:將試劑一:試劑二:試劑三:試劑四:試劑五:試劑六按體積比=6001002040100250混合,現(xiàn)用現(xiàn)配。

產(chǎn)品說明:

尿苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶(UDP-glucose pyrophosphosphprylase,UGP,EC 2.7.7.9)在自然界廣泛分布。在葡萄糖合成糖原前催化葡萄糖活化,將1-磷酸葡萄糖與UTP分子合成為UDP-葡萄糖(UDPG),UDPG是高等植物和動物中主要活化酶的形式,作為葡萄糖基供體參與糖原、蔗糖、纖維素等的合成代謝。

UGP可逆的催化生成1-磷酸葡萄糖,其在磷酸葡萄糖變位酶和6-磷酸葡萄糖脫氫酶作用下將NADP轉(zhuǎn)化為NADPH,UGP活性可以用340nm的吸光值的變化來反應。  

注意:實驗之前建議選擇2-3個預期差異大的樣本做預實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進行檢測。

需自備的儀器和用品

紫外分光光度計、臺式離心機、水浴鍋、1mL石英比色皿、可調(diào)式移液槍、研缽/勻漿器/細胞超聲破碎儀、冰和蒸餾水。

 

操作步驟:

一、樣本處理(可適當調(diào)整待測樣本量,具體比例可以參考文獻)

組織:按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)15~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL提取液)進行冰浴勻漿,然后10000g4℃,離心10min,取上清置于冰上待測。

細胞:按照細胞數(shù)量(104個):提取液體積(mL)為500~10001的比例(建議500萬細胞加入1mL提取液),冰浴超聲破碎細胞(功率300w,超聲3秒,間隔7秒,總時間3min);然后10000g,4℃,離心10min,取上清置于冰上待測。

血清等液體:直接檢測。

二、測定步驟

1、 紫外分光光度計預熱30min以上,調(diào)節(jié)波長至340nm,蒸餾水調(diào)零。

2、 操作表:

試劑名稱

空白管

測定管

樣本(µL


100

工作液(µL

900

900

蒸餾水(µL

100

-

1mL石英比色皿中分別加入上述試劑,充分混勻后于340nm處測定10s時的吸光值A1,迅速置于37水浴鍋或者培養(yǎng)箱反應5min,拿出迅速擦干測定310s時的吸光值A2,計算ΔA測定管= A2測定-A1測定,ΔA空白管=A2空白-A1空白,ΔA=ΔA測定管-ΔA空白管(空白管只需做1-2次)。

三、UGP酶活計算

1. 按照樣本蛋白濃度計算

酶活單位定義:每毫克組織蛋白每分鐘產(chǎn)生1nmolNADPH定義為一個酶活力單位。

UGPU/mg prot=[ΔA÷ε×d×V反總×109]÷(V×Cpr) ÷T=321.54×ΔA÷Cpr

2. 按照樣本質(zhì)量計算

酶活單位定義:每克組織每分鐘產(chǎn)生1nmol NADPH定義為一個酶活力單位。

UGPU/g 質(zhì)量)=[ΔA÷ε×d×V反總×109]÷(W ×V÷V樣總) ÷T=321.54×ΔA÷W

3. 按照細胞數(shù)量計算

酶活單位定義:每104個細胞每分鐘產(chǎn)生1nmolNADPH定義為一個酶活力單位。

UGPU/104 cell=[ΔA÷ε×d×V反總×109]÷(500×V÷V樣總) ÷T=0.643×ΔA

4. 按照液體體積計算

酶活單位定義:每毫升液體每分鐘產(chǎn)生1nmolNADPH定義為一個酶活力單位。

UGPU/mL=[ΔA÷ε×d×V反總×109]÷V÷T=321.54×ΔA

V反總:反應體系總體積,1×10-3L;εNADPH摩爾消光系數(shù),6.22×103L/mol/cm;d:比色皿光徑,1cm;V樣:加入樣本體積,0.1mL;V樣總:加入提取液體積,1mL;T:反應時間,5min;Cpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,mg/mL;W:樣本質(zhì)量,g ;500:細胞或細菌總數(shù),500萬;109:單位換算系數(shù),1mol=109nmol。

注意事項:

1. 空白管為檢測各試劑組分質(zhì)量的檢測孔,正常情況下,變化不超過0.01

2. ΔA大于0.6或者A2測定大于1.2,建議將樣本稀釋后再進行測定。當ΔA小于0.01時,可以延長反應時間(5min10min)來測定。

焦磷酸化酶(UGP)檢測試劑盒 糖原 焦磷酸化酶(UGP)檢測試劑盒 糖原

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