目錄:北京索萊寶科技有限公司>>生化檢測試劑盒-常量法>>糖原系列>> BC2710-50T/48S總糖含量檢測試劑盒 糖原
CAS | 詳詢 | 純度 | 詳詢 |
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分子量 | 詳詢 | 分子式 | 詳詢 |
供貨周期 | 現貨 | 規(guī)格 | 50管/48樣 |
貨號 | BC2710 | 應用領域 | 醫(yī)療衛(wèi)生,環(huán)保,化工,生物產業(yè),農業(yè),石油,綜合 |
主要用途 | 總糖含量檢測 |
總糖含量檢測試劑盒說明書
可見分光光度法
貨號:BC2710
規(guī)格:50T/48S
產品組成:使用前請認真核對試劑體積與瓶內體積是否一致,有疑問請及時聯系索萊寶工作人員。
試劑名稱 | 規(guī)格 | 保存條件 |
試劑一 | 液體50 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
試劑二 | 液體50 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
試劑三 | 液體13 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
標準品 | 粉劑×1支 | 2-8℃保存 |
溶液的配制:
1.標準品:10 mg無水*萄糖。臨用前加1 mL蒸餾水溶解為10 mg/mL的葡萄糖標準品備用,2-8℃保存兩周。
產品說明:
糖類物質是構成植物體的重要成分之一,也是新陳代謝的主要原料和貯存物質??偺?/span>主要指具有還原性的葡萄糖,果糖,戊糖,乳糖和在測定條件下能水解為還原性的單糖的蔗糖,麥芽糖以及可能部分水解的淀粉。
總糖酸水解為還原糖,還原糖在堿性條件下與DNS試劑共熱后被還原成氨基化合物,在堿性溶液中呈紅棕色,還原糖的量與桔紅色物質顏色的深淺成正比關系,以此測定樣本中的總糖含量。
技術指標:
低檢出限:0.0444 mg/mL
線性范圍:0.1-1 mg/mL
注意:實驗之前建議選擇2-3個預期差異大的樣本做預實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內建議稀釋或者增加樣本量進行檢測。
需自備的儀器和用品:
可見分光光度計、臺式離心機、水浴鍋、可調式移液器、1mL玻璃比色皿、研缽/勻漿器、蒸餾水。
操作步驟:
一、樣本處理(可適當調整待測樣本量,具體比例可以參考文獻)
1、組織樣本的處理:稱取約0.1g樣本于10mLEP管中,加入1mL 試劑一,1.5mL蒸餾水,研磨勻漿,沸水浴30min,加入1mL試劑二,渦旋混勻,用蒸餾水定容至10mL,8000g,25℃離心10min,取上清液待測。(注意稀釋,見注意事項)。
2、血清(漿)、液體樣本的處理:取0.1mL血清(漿)于1mLEP管中,加入0.1mL 試劑一,0.15mL蒸餾水,勻漿,沸水浴30min,加入0.1mL試劑二,渦旋混勻,用蒸餾水定容至1mL,8000g,25℃離心10min,取上清液待測。(注意稀釋,見注意事項)。
二、測定步驟
1、分光光度計預熱30min以上,調節(jié)波長至540nm,蒸餾水調零。
2、標準品準備:將標準品用蒸餾水稀釋至1、0.8、0.5、0.2、0.1mg/mL,標準液稀釋可參考下表:
序號 | 稀釋前濃度(mg/mL) | 標準液體積(µL) | 蒸餾水體積(µL) | 稀釋后濃度(mg/mL) |
1 | 10 | 100 | 900 | 1 |
2 | 1 | 160 | 40 | 0.8 |
3 | 1 | 100 | 100 | 0.5 |
4 | 1 | 40 | 160 | 0.2 |
5 | 1 | 20 | 180 | 0.1 |
備注:實驗中每個標準管需150µL標準溶液。
3、加樣表:
試劑(μL) | 空白管 | 測定管 | 標準管 |
蒸餾水 | 150 | - | - |
樣本 | - | 150 | - |
標準品 | - | - | 150 |
試劑三 | 150 | 150 | 150 |
渦旋混勻,沸水浴10min(蓋緊,以防止水分散失),冷卻至室溫 | |||
蒸餾水 | 900 | 900 | 900 |
渦旋混勻,在540nm下測定吸光值,分別記為A空白管、A測定管、A標準管。計算ΔA測定=A測定管-A空白管、ΔA標準=A標準管-A空白管。標準曲線和空白管只需測1-2次。
三、總糖含量計算
1、標準曲線的繪制:
根據標準管的濃度(x,mg/mL)和吸光度ΔA標準(y,ΔA標準),建立標準曲線。根據標準曲線,將ΔA測定(y,ΔA測定)帶入公式計算樣本濃度(x,mg/mL)。
2、按樣本質量計算:總糖含量(mg/g 質量)=(x×V樣總)÷W×稀釋倍數=10×x÷W×稀釋倍數
3、按血清(漿)、液體體積計算:總糖含量(mg/mL)=(x×V提)÷V樣×稀釋倍數=10×x×稀釋倍數
V樣總:樣本體積總體積,10mL;W:樣本質量,g;V提:液體或血清樣本總體積,1mL;V樣:液體或血清體積,0.1mL。
注意事項:
1、此試劑盒對于纖維素的分解程度無法達到100%。
2、如果測定吸光值超過線性范圍吸光值,可以增加樣本量或者稀釋樣本后再進行測定。注意同步修改計算公式。
實驗實例:
1、 取0.1g兔子肝臟進行樣本處理,取上清,按照測定步驟操作,測得計算ΔA測定=A測定管-A空白管=0.965-0.019=0.946,標準曲線y=1.2984x-0.0284,則x=0.7505,按樣本質量計算含量得:
總糖含量(mg/g 質量)=10×x÷W=75.05 mg/g 質量。
2、 取0.1g迎春進行樣本處理,取上清,按照測定步驟操作,測得計算ΔA測定=A測定管-A空白管=0.961-0.019=0.942,標準曲線y=1.2984x-0.0284,則x=0.7474,按樣本質量計算含量得:
總糖含量(mg/g 質量)=10×x÷W=74.74 mg/g 質量。
3、 取小鼠血清進行處理,取上清,按照測定步驟操作,測得計算ΔA測定=A測定管-A空白管=0.459-0.019=0.440,標準曲線y=1.2984x-0.0284,則x=0.3608,按血清體積計算含量得:
總糖含量(mg/mL)=10×x=3.608 mg/mL。
相關系列產品:
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