檸檬酸（CA）含量檢測試劑盒說明書
可見分光光度法
注意：本產品試劑有所變動，請注意并嚴格按照該說明書操作。
貨號：BC2150
規(guī)格：50T/48S
產品組成：使用前請認真核對試劑體積與瓶內體積是否一致，有疑問請及時聯(lián)系索萊寶工作人員。

溶液的配制：

1. 試劑三：為易揮發(fā)試劑，用完后盡快密封，-20℃保存；

2. 試劑四：臨用前取1瓶加入3 mL試劑一，充分溶解，用不完的試劑2-8℃保存一周。

3. 標準品：2 μmol/mL檸檬酸標準液。

產品說明：
CA是生物體內常見的有機酸，是重要的食品風味物質。此外，CA是三羧酸循環(huán)第一步反應的產物。
酸性條件下，檸檬酸還原Cr⁶⁺生成Cr³⁺，在545nm處有特征吸收峰；通過測定545nm吸光值的增加，即可計算出樣本中檸檬酸含量。

技術指標：
低檢出限：0.02 μmol/mL
線性范圍：0.032-4 μmol/mL
注意：實驗之前建議選擇2-3個預期差異大的樣本做預實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內建議稀釋或者增加樣本量進行檢測。
需自備的儀器和用品：
可見分光光度計、低溫離心機、水浴鍋、可調式移液槍、1mL玻璃比色皿、研缽/勻漿器/細胞超聲破碎儀、冰和蒸餾水。
操作步驟：具體操作步驟詳見“產品資料"附件
注意事項：
1、樣本處理等過程均需要在冰上進行。
2、試劑五為易致癌物質，實驗過程中，需佩戴手套，避免試劑五濺到皮膚上。
3、檸檬酸試劑一不能用于蛋白含量測定，如需測定蛋白含量，需另取組織進行測定。
4、若反應30min后有明顯的黑色小顆粒，屬于正?，F(xiàn)象，需將樣本稀釋后再測。
5、如果樣本吸光值大于0.5，建議將樣本用試劑一稀釋后進行測定。
實驗實例：

1. 取0.1065g 竹子葉片加入1mL試劑一，冰上充分研磨，11000g，4℃離心10min，取上清液按照測定步驟操作，測并計算ΔA測定=A測定管-A空白管=0.281-0.130=0.151，ΔA標準=A標準管-A空白管=0.438-0.130=0.308，

按樣本質量計算得：
檸檬酸含量（μmol/g 質量）=2×ΔA測定÷ΔA標準÷W =9.21 μmol/g 質量。

1. 取0.1094g兔腎臟組織加入1mL試劑一，冰上充分研磨，11000g，4℃離心10min，取上清液按照測定步驟操作，測得計算ΔA測定=A測定管-A空白管=0.440-0.130=0.310，ΔA標準=A標準管-A空白管=0.438-0.130=0.308，按樣本質量計算得：

檸檬酸含量（μmol/g 質量）=2×ΔA測定÷ΔA標準÷W =18.40 μmol/g 質量。

1. 取0.1mL兔血清加試劑一0.9mL，充分混勻，11000g，4℃離心10min，取上清液按照測定步驟操作，測得計算ΔA測定=A測定管-A空白管=0.271-0.130=0.141，ΔA標準=A標準管-A空白管=0.438-0.130=0.308，按液體樣本的體積計算：

檸檬酸含量（μmol/mL）=20×ΔA測定÷ΔA標準=9.156 μmol/mL。
相關發(fā)表文獻：

1. Meixi Peng,Dan Yang,Yixuan Hou,et al. Intracellular citrate accumulation by oxidized ATM-mediated metabolism reprogramming via PFKP and CS enhances hypoxic breast cancer cell invasion and metastasis. Cell Death and Disease.March 2019;(IF5.959)

2. Luo M,Luo Y, Mao N,et al. Cancer-Associated Fibroblasts Accelerate Malignant Progression of Non-Small Cell Lung Cancer via Connexin 43-Formed Unidirectional Gap Junctional Intercellular Communication. Cellular Physiology and Biochemistry. November 2018;

3. Zhou Z, Duan Y, Zhou M. Carbendazim‐resistance associated β2‐tubulin substitutions increase deoxynivalenol biosynthesis by reducing the interaction between β2‐tubulin and IDH3 in Fusarium graminearum[J]. Environmental microbiology, 2019.

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