目錄:北京索萊寶科技有限公司>>生化檢測試劑盒-常量法>>三羧酸循環(huán)系列>> BC5950-50T/48S異檸檬酸含量檢測試劑盒 三羧酸
CAS | 詳詢 | 純度 | 詳詢 |
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分子量 | 詳詢 | 分子式 | 詳詢 |
供貨周期 | 現貨 | 規(guī)格 | 50T/48S |
貨號 | BC5950 | 應用領域 | 環(huán)保,化工,生物產業(yè),農業(yè),綜合 |
主要用途 | 異檸檬酸含量檢測 |
異檸檬酸含量檢測試劑盒說明書
紫外分光光度法
貨號:BC5950
規(guī)格:50T/48S
產品組成:使用前請認真核對試劑體積與瓶內體積是否一致,有疑問請及時聯(lián)系索萊寶工作人員。
試劑名稱 | 規(guī)格 | 保存條件 |
提取液一 | 液體60 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
提取液二 | 液體10 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
試劑一 | 液體60 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
試劑二 | 液體750 μL×1支 | 2-8℃保存 |
試劑三 | 2-8℃保存 | |
粉劑一 | 粉劑×1瓶 | 2-8℃保存 |
標準品 | 粉劑×1支 | 2-8℃保存 |
溶液的配制:
1、 試劑二工作液:臨用前先離心,根據樣本量按試劑二:蒸餾水=10μL:90μL(共100μL,約1T)的比例配制后使用,現配現用。
2、 試劑三:臨用前加入4 mL蒸餾水充分溶解,未用完的試劑-20℃分裝保存4周,避免反復凍融。
3、 標準品:臨用前加入1 mL蒸餾水充分溶解成20μmol/mL異檸檬酸標準品。
4、 工作液:臨用前根據樣本量按試劑一:試劑二工作液:試劑三=750μL:100μL:50μL(共900μL,約1T)配成工作液后使用,現配現用。
產品說明:
異檸檬酸(Isocitric Acid)是檸檬酸的異構體,在許多水果和蔬菜以及由這些原料制成的食品中發(fā)現了大量的異檸檬酸鹽。生物能夠利用的是D型異檸檬酸,是三羧酸循環(huán)中的一個成分。異檸檬酸在異檸檬酸脫氫酶(ICDH,EC1.1.1.41)的作用下變成a-酮戊二酸,同時NAD(P)還原為NAD(P)H,據此可以計算異檸檬酸含量。
注意:實驗之前建議選擇2-3個預期差異大的樣本做預實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內建議稀釋或者增加樣本量進行檢測。
需自備的儀器和用品:
紫外分光光度計、1mL石英比色皿、天平、低溫離心機、水浴鍋/恒溫培養(yǎng)箱、研缽/勻漿器/細胞超聲破碎儀、冰和蒸餾水。
操作步驟:具體的操作步驟請見“產品資料"文件
注意事項:
1.最好兩個人同時做此實驗,一個人比色,一個人計時,以保證實驗結果的準確性。
2.若樣本ΔA<0.005,可適當增大樣本量后測定;若樣本ΔA>1.2或A測定>1.5,可用蒸餾水稀釋上清液后測定,
注意同步修改計算公式中的稀釋倍數。
3.提取液一中含有蛋白質沉淀劑,因此上清液不能用于蛋白濃度測定,如需測定蛋白濃度,需另取組織。
實驗實例:
1、 取0.1139g蘋果加入提取液進行冰浴勻漿,取上清后按照測定步驟操作,用1mL石英比色皿測得ΔA測定=(A2測定-A1測定)-(A2空白-A1空白)=(0.241-0.125)-(0.066-0.059)=0.109,帶入標曲y=0.1414x-0.0466,R2=0.9991,計算x=1.100,按樣本質量計算異檸檬酸含量得:
異檸檬酸含量(μmol/g 質量)=1.1875×x÷W×F=11.468 μmol/g 質量。
2、 取0.1033g橙子葉加入提取液進行冰浴勻漿,取上清用蒸餾水稀釋2倍后按照測定步驟操作,用1mL石英比色皿測得ΔA測定=(A2測定-A1測定)-(A2空白-A1空白)=(1.001-0.923)-(0.066-0.059)=0.071,帶入標曲y=0.1414x-0.0466,R2=0.9991,計算x=0.832,按樣本質量計算異檸檬酸含量得:
異檸檬酸含量(μmol/g 質量)=1.1875×x÷W×F=19.129 μmol/g 質量。
3、 取500μL橙汁飲料取上清后按照測定步驟操作,用1mL石英比色皿測得ΔA測定=(A2測定-A1測定)-(A2空白-A1空白)=(0.856-0.840)-(0.066-0.059)=0.009,帶入標曲y==0.1414x-0.0466,R2=0.9991,計算x=0.393,按液體體積量計算異檸檬酸含量得:
異檸檬酸含量(μmol/mL)=x×F=0.393 μmol/mL。
參考文獻:
[1] Kvasni Ka, Franti Ek, et al. "Determination of Isocitric Acid in Citrus Juice—A Comparison of HPLC, Enzyme Set and Capillary Isotachophoresis Methods." Journal of Food Composition & Analysis 15.6(2002):685-691.
[2] Kong, Min Jung, et al. "Mitochondrial NADP+-dependent isocitrate dehydrogenase deficiency increases cisplatin-induced oxidative damage in the kidney tubule cells." Cell Death & Disease 9.5(2018):488.
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