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考馬斯亮藍法測蛋白含量測定 試劑盒說明書
酶標法 100 管/96 樣
產(chǎn)品簡介 :
樣品可溶性蛋白質含量常常用于酶活性計算。此外,可溶性蛋白質含量也用于食品等質量分析。
在酸性溶液中,考馬斯亮藍 G-250 與蛋白質結合形成藍色復合物;該復合物在 595nm 處有大吸收峰,
其顏色的深淺與蛋白質的濃度成正比。該方法靈敏度高,適合微量蛋白質分析。
試驗中所需的儀器和試劑:
酶標儀、酶標板、移液器和蒸餾水。
產(chǎn)品內(nèi)容 :
試劑一:液體×1 瓶,4℃保存。
標準品:液體×1 瓶,4℃保存。
操洽步驟 :
一 、 樣品中可溶性蛋白質 提取 :
液體樣品:澄清無色液體樣品可以直接測定。
組織樣品:準確稱取約 0.1 g 樣品,加 1mL 提取液( 自備,根據(jù)需要可以是酶提取緩沖液或者蒸餾水或
者生理鹽水) ,冰浴勻漿,10000rpm,4℃離心 10min,取上清,即待測液。 (動物樣品常常需要稀釋)
二 、 吸光值測定 :
1. 酶標儀預熱 30 min 以上,調(diào)節(jié)波長到 595nm,蒸餾水調(diào)零。
2. 空白 孔: 取酶標板, 在空白孔中加入 20µL 蒸餾水, 180µL 試劑一, 混勻后室溫靜置 10min, 于 595nm
測定吸光度,20min 內(nèi)完成測定,記為 A 空白。
3. 標 準 孔: 取酶標板, 在空白孔中加入 20µL 標準液, 180µL 試劑一, 混勻后室溫靜置 10min, 于 595nm
測定吸光度,20min 內(nèi)完成測定,記為 A 標準。
4. 測定 孔: 取酶標板, 在空白孔中加入 20µL 待測液, 180µL 試劑一, 混勻后室溫靜置 10min, 于 595nm
測定吸光度,20min 內(nèi)完成測定,記為 A 測定。
蛋?質含量 計 算 :
C 待測(µg/m L)= C 標準×(A 測定-A 空白)÷(A 標準-A 空白)
=50×(A 測定-A 空白)÷(A 標準-A 空白)
C 標準:標準品蛋白質濃度,50µg/mL。
注意事項 :
1.加考馬斯亮藍后,在 10~20min 內(nèi)吸光值相對較穩(wěn)定,因此須在 10~20min 完成比色。
2.不宜用石英比色皿,可用玻璃或塑料比色皿,測完成后立即用 95%乙醇( 自備)沖洗。
3.測定前用 1~2 個樣做預實驗,確保蛋白濃度在 0~100µg/ml 范圍內(nèi),否則需要做相應稀釋。