Qiagen凱杰試劑盒205410/205411/205413

Qiagen凱杰試劑盒205410/205411/205413

用于快速的cDNA合成和高度可重復(fù)性的兩步法RT-PCR

• gDNA Removal Mix可消除gDNA帶來(lái)的誤差

• 內(nèi)質(zhì)控可指示cDNA合成的質(zhì)量

• 高親和性逆轉(zhuǎn)錄酶可實(shí)現(xiàn)寬線性范圍的cDNA合成

*的QuantiNova Reverse Transcription Kit提供了含有基因組DNA去除方案和內(nèi)質(zhì)控的一種快速便捷的cDNA合成方法。gDNA Removal Mix可有效去除RNA樣本中的基因組DNA污染，同時(shí)內(nèi)質(zhì)控RNA可以監(jiān)測(cè)逆轉(zhuǎn)錄和擴(kuò)增反應(yīng)是否成功。QuantiNova Reverse Transcription Kit提供了快速高效逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)所需的一切。合成的cDNA適用于進(jìn)行real-time PCR, 可以對(duì)任何mRNA區(qū)域的靶向序列進(jìn)行可靠定量。

Performance

*的gDNA Removal Mix可迅速有效去除RNA樣本中的基因組DNA污染。去除基因組DNA污染對(duì)于獲得精確基因表達(dá)結(jié)果非常關(guān)鍵，并且在不能設(shè)計(jì)出RNA特異性的引物時(shí)，例如當(dāng)分析單外顯子基因時(shí)，也需要去除基因組DNA污染。使用gDNA Removal Buffer可以節(jié)省時(shí)間和成本，因?yàn)椴恍枰诜磻?yīng)中或反應(yīng)后單獨(dú)進(jìn)行DNase消化。

全新開(kāi)發(fā)的內(nèi)質(zhì)控是一種成分明確的轉(zhuǎn)錄本（RNA分子），可直接加入您的樣本并同時(shí)被逆轉(zhuǎn)錄為cDNA，可直接反應(yīng)儀器或相應(yīng)試劑是否正常，實(shí)驗(yàn)構(gòu)建的體系是否存在錯(cuò)誤，以及反應(yīng)體系中是否存在抑制劑。預(yù)期的C_q (C_T)范圍可以用來(lái)確認(rèn)逆轉(zhuǎn)錄和PCR擴(kuò)增的成功與否，以及實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可重復(fù)性。

QuantiNova Reverse Transcriptase的高RNA親和性確保您可從任何RNA模板獲得高產(chǎn)率cDNA。即便是難擴(kuò)增模板，如高GC含量或含有復(fù)雜二級(jí)結(jié)構(gòu)的模板，也可被成功進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)。Reverse Transcription Mix包含一種特別優(yōu)化的oligo-dT和隨機(jī)引物混合物，可以從包括5’區(qū)域在內(nèi)的RNA轉(zhuǎn)錄本的任何位置進(jìn)行cDNA合成。無(wú)論擴(kuò)增靶標(biāo)位于轉(zhuǎn)錄本的哪個(gè)位置，該試劑盒均能提供可供real-time PCR分析使用的高產(chǎn)量cDNA。同時(shí)對(duì)于低表達(dá)豐度的基因, 該試劑盒還可提供更高靈敏度的檢測(cè)能力。

QuantiNova Reverse Transcription Kit可在較寬的起始量范圍內(nèi)提供精確的結(jié)果，在標(biāo)準(zhǔn)的實(shí)驗(yàn)方案中起始RNA量可zui高達(dá)5 µg，在特殊要求的實(shí)驗(yàn)條件下該用量可以加倍。

Principle

QuantiNova Reverse Transcriptase具有高RNA親和性，可以在極寬的模板量范圍內(nèi)（10 pg– 5 μg）合成cDNA（見(jiàn)圖：5 µg–10 pg起始 RNA的精確定量）。無(wú)論擴(kuò)增靶標(biāo)位于轉(zhuǎn)錄本的哪個(gè)位置，該試劑盒可提供用于real-time PCR分析的高產(chǎn)量cDNA。即使難擴(kuò)增模板，比如高GC含量或含有復(fù)雜二級(jí)結(jié)構(gòu)的模板，也可被成功進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)。QuantiNova RT Buffer經(jīng)過(guò)優(yōu)化，可兼容real-time PCR緩沖液。

為獲得精確的real-time RT-PCR基因表達(dá)檢測(cè)結(jié)果，非常重要的一點(diǎn)是保證只有cDNA被擴(kuò)增和檢測(cè)到。gDNA Removal Mix可迅速有效的去除基因組DNA干擾(見(jiàn)圖：有效去除gDNA污染保證準(zhǔn)確定量轉(zhuǎn)錄本）。使用gDNA Removal Mix節(jié)省了時(shí)間和成本，因?yàn)椴恍枰诜磻?yīng)中或反應(yīng)后單獨(dú)進(jìn)行DNase消化。同時(shí)，也無(wú)需設(shè)計(jì)RNA特異性引物或探針。

檢測(cè)cDNA合成的差異度可以顯示實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可重復(fù)性。全新開(kāi)發(fā)的內(nèi)質(zhì)控是一種成分明確的轉(zhuǎn)錄本（RNA分子），可直接加入您的樣本并同時(shí)被逆轉(zhuǎn)錄為cDNA，可直接反應(yīng)儀器或相應(yīng)試劑是否正常，實(shí)驗(yàn)構(gòu)建的體系是否存在錯(cuò)誤，以及反應(yīng)體系中是否存在抑制劑。因?yàn)閮?nèi)質(zhì)控和真實(shí)轉(zhuǎn)錄本的性質(zhì)相似，所以它可以在接下來(lái)的qPCR實(shí)驗(yàn)中用來(lái)確認(rèn)逆轉(zhuǎn)錄和PCR擴(kuò)增的成功與否（見(jiàn)圖：內(nèi)質(zhì)控可靠檢測(cè)是否存在抑制劑）。

Procedure

使用QuantiNova Reverse Transcription Kit進(jìn)行基因組DNA去除和cDNA合成僅需20分鐘。該試劑盒包含進(jìn)行快速cDNA合成的所需的一切成分。

純化后的RNA和gDNA Removal Mix簡(jiǎn)單孵育即可除去基因組DNA污染。和其它方法不同的是，RNA樣本接下來(lái)可直接與Reverse Transcription Mix和Reverse Transcription Enzyme的預(yù)混液混合，進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)。使用QuantiNova Reverse Transcriptase，逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)可以在低溫下進(jìn)行，包括對(duì)于復(fù)雜的二級(jí)結(jié)構(gòu)模板。反應(yīng)在42°C的溫度條件下進(jìn)行保證了RNA的完整性，并隨后在85°C進(jìn)行酶滅活以終止反應(yīng)。不需要進(jìn)行額外的RNA變性或RNase H降解。

Applications

QuantiNova Reverse Transcription Kit可從任何起始材料（包括激光微切割樣本或組織活檢樣本）獲得高效及高靈敏度real-time RT-PCR結(jié)果。