12381凱杰Qiagen無內*素宏量質粒提取試劑盒5T

12381 凱杰Qiagen無內*素宏量質粒提取試劑盒5T EndoFree Plasmid Mega Kit ，產品介紹：
產品品牌：Qiagen
產品貨號：12381
產品名稱：無內*素宏量質粒提取試劑盒
英文名稱：EndoFree Plasmid Mega Kit
產品規(guī)格：5T

凱杰Qiagen12381無內*素宏量質粒提取試劑盒EndoFree Plasmid Mega Kit 5T

凱杰QIAGEN作為創(chuàng)新市場和技術的領dao者，憑借強大的樣本制備和分析技術，實現(xiàn)各種生物樣本內容物的高品質純化、分析。我們致力于幫助客戶在生命科學研究、應用檢測、制藥、和分子診斷領域獲得成功和突破性進展。由此讓生活的改善成為可能。我們秉承市場、客戶、病患至上的理念，不斷推進多領域的創(chuàng)新和發(fā)展，充分發(fā)揮我們的樣本制備和分析技術專長

我們北京諾博萊德科技有限公司作為QIAGEN公司的特約經(jīng)銷商為客戶提供，正規(guī)進口，貨期穩(wěn)定，折扣好的服務標準。

12381 凱杰Qiagen無內*素宏量質粒提取試劑盒5T EndoFree Plasmid Mega Kit ，產品介紹：
產品品牌：Qiagen
產品貨號：12381
產品名稱：無內*素宏量質粒提取試劑盒
英文名稱：EndoFree Plasmid Mega Kit
產品規(guī)格：5T

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12381 凱杰Qiagen無內*素宏量質粒提取試劑盒5T EndoFree Plasmid Mega Kit ，產品說明：

特征

• 達到小于 0.1 EU/μg DNA

• 綜合內*素去除

• 高拷貝質粒 DNA 的高產量

• LyseBlue      可實現(xiàn)*佳裂解和*大 DNA 產量

產品詳情

無內切質粒試劑盒提供基于陰離子交換的快速無內毒素質粒 DNA 純化。QIA過濾器濾芯可通過過濾快速清除裂解物。純化的DNA純度超過2 x CsCl梯度離心獲得的純度，適用于高級轉染級應用。EndoFree質粒緩沖液組合可用于制備10 mega或5 giga轉染級質粒或cosmid DNA制劑。

Performance

EndoFree質粒試劑盒將高效的內毒素去除步驟集成到質粒純化程序中——無需額外的提取或親和柱來去除脂多糖。細菌裂解物通過QIAfilterMega-Giga或Maxi濾芯過濾進行清除，質粒DNA在含有陰離子交換樹脂的重力流QIAGEN尖duan上純化。從培養(yǎng)物中純化 DNA 可獲得高達 10 mg （giga）、2.5 mg（兆）和 500 μg（*大）的純化 DNA（培養(yǎng)體積取決于質?？截悢?shù)、插入片段大小、宿主菌株和培養(yǎng)基）。純化的DNA不含內*素（<0.1 EU/μg DNA）。

對于低拷貝質粒和cosmid的純化，由于所需的培養(yǎng)體積大且QIAfilter超千兆質粒試劑盒的容量有限，因此EndoFree質粒Mega試劑盒是比EndoFree Giga質粒試劑盒更好的選擇。

無內切質粒試劑盒可去除裂解步驟中釋放的細菌內*素，并影響DNA轉染到原代細胞和敏感培養(yǎng)細胞中。從EndoFree質粒試劑盒獲得的無內*素DNA非常適合在轉染中獲得可重復且可靠的結果。QIAGEN超純無內*素DNA也適用于基因治療研究和其他敏感應用。

質粒制劑中的內*素水平*

EndoFree DNA可提高原代細胞的轉染效率*

*原代兔胃壁細胞轉染用按所示方法制備的pEGFP-N2（CLONTECH）。使用Effectene轉染試劑進行轉染。數(shù)據(jù)表示表達GFP的細胞百分比，通過對轉染后48小時的綠色熒光細胞數(shù)量進行評分來確定。每種純化方法的轉染效率代表來自6種以上不同DNA制備的9至2個重復培養(yǎng)皿的平均效率。（數(shù)據(jù)由美國佐治亞州奧古斯塔佐治亞醫(yī)學院分子醫(yī)學和遺傳學系 C. Chew 和 J. Parente 提供。

Principle

純化質粒DNA中的內毒素污染水平取決于所使用的純化方法。二氧化*漿液純化的DNA表現(xiàn)出ji高的內*素水平。QIAGEN、QIAfilter和HiSpeed質粒試劑盒以及2x CsCl超速離心可產生非常純的DNA，內*素水平相對較低。EndoFree 質粒試劑盒包括一個集成的內*素去除步驟，可產生含有 <0.1 EU/μg 質粒 DNA 的質粒 DNA。

QIAfilter試劑盒以QIAfilter、HiSpeed和EndoFree質粒試劑盒形式提供，是特殊的過濾裝置，旨在取代細*細胞堿性裂解后的離心。QIAfilter濾芯可wan全去除SDS沉淀物并清除細*裂解物，所需時間僅為離心所需時間的一小部分，從而將質粒純化時間縮短多達1小時。QIAfilter超級千兆濾芯在室內真空下運行，以*小的努力有效地清除大量細菌裂解物（請注意，瓶子不包括在套件中）。QIAfilter Maxi 濾芯具有注射器形式，通過將液體推入過濾器，可在幾秒鐘內清除裂解物。

QIAGEN-tips中du特的陰離子交換樹脂專為核酸純化而開發(fā)。其zhuo越的分離特性使DNA純度等于或優(yōu)于連續(xù)兩輪CsCl梯度離心獲得的DNA純度。預包裝的QIAGEN吸頭通過重力流運行，永bu干涸，*大限度地減少了質粒制備所需的手動操作時間。整個QIAGEN質粒純化系統(tǒng)避免使用ben酚、氯仿、溴化乙錠和氯化銫等有*物質，*大限度地減少對用戶和環(huán)境的危害。

內*素，也稱為脂多糖或LPS，是大腸桿菌等革蘭氏陰性細菌的細胞膜成分。內*素在質粒純化的裂解步驟中釋放，并顯著降低內*素敏感細胞系的轉染效率。此外，內毒素可以通過與DNA競爭“游離"轉染試劑來影響轉染實驗中質粒DNA的攝取。內毒素還會誘導巨噬細胞和B細胞等免疫細胞中免疫應答的非特異性激活，從而導致對轉染結果的誤解。這些反應包括誘導蛋白質和脂質的合成，如IL-1和前列腺素?？傮w而言，內*素是轉染實驗設置中不可控的變量，會影響結果和結果的可重復性，使其難以比較和解釋。在基因治療研究中，內毒素可以通過引起內毒性休克綜合征和補體級聯(lián)反應的激活來干擾。

Procedure

細菌細胞在堿性條件下裂解，并使用QIAfilter濾芯清除粗裂解物。在此階段，將內*素去除緩沖液添加到過濾后的裂解物中，在冰上孵育。然后將澄清的裂解物加載到陰離子交換尖duan，質粒DNA在適當?shù)牡望}和pH條件下選擇性結合。通過中鹽洗滌除去RNA、蛋白質、代謝物和其他低分子量雜質，并在高鹽緩沖液中洗脫超純質粒DNA。DNA通過異丙醇沉淀濃縮和脫鹽，并通過離心收集。

Applications

使用無內切質粒試劑盒純化的DNA適用于任何敏感應用，包括：

l  轉染，包括原代細胞、敏感細胞和懸浮細胞

l  基因治療研究

l  基因沉默

l  注射

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