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細(xì)胞污染全攻略（含防、治妙招）
我擦……
細(xì)胞又污染了！
咋整，快崩潰了！！
Who can help me! ?。? 君莫急，小翊來(lái)幫您！
專治各種細(xì)胞疑難雜癥，
小翊送你完整攻略。
攻略一：了解細(xì)胞污染
古人云：知己知彼方可百戰(zhàn)百勝，因此了解細(xì)胞污染是非常重要的。常見(jiàn)的污染類型有細(xì)菌污染、真菌污染、支原體污染、原蟲(chóng)污染、黑膠蟲(chóng)污染、病毒污染以及非同種細(xì)胞污染。
1、細(xì)菌：細(xì)菌在普通倒置顯微鏡高倍鏡下大多可見(jiàn)，根據(jù)感染細(xì)菌種類不同，呈現(xiàn)不同的外形。其培養(yǎng)基一般會(huì)變渾濁、變黃較快，對(duì)細(xì)胞生狀態(tài)影響明顯。
圖1：細(xì)胞受到細(xì)菌污染圖
2、真菌：真菌污染在顯微鏡下可以看到絲狀物，有些真菌開(kāi)始很像死細(xì)胞碎片，呈珊瑚狀，隨時(shí)間轉(zhuǎn)移會(huì)長(zhǎng)出黑色絲狀物。真菌生長(zhǎng)的比較慢，一般培養(yǎng)基清亮，不變色，不如細(xì)菌易被發(fā)現(xiàn)，一旦發(fā)現(xiàn)有它的存在，細(xì)胞污染就比較嚴(yán)重了，也很難救活。
圖2：細(xì)胞受到真菌污染圖
3、支原體：細(xì)菌和真菌造成的污染相對(duì)容易發(fā)現(xiàn)，然而支原體造成的污染很難察覺(jué)，即使生長(zhǎng)密度高達(dá) 107-109CFU/ml，也很難有污染跡象（渾濁、pH變化等）。支原體污染后導(dǎo)致細(xì)胞生長(zhǎng)變慢，狀態(tài)變差，不會(huì)馬上使細(xì)胞致死，但會(huì)影響細(xì)胞內(nèi)的各種參數(shù)，如改變細(xì)胞新陳代謝，改變DNA轉(zhuǎn)染效率。支原體感染細(xì)胞以后，細(xì)胞病變不明顯，只是慢慢si去。
圖3：細(xì)胞受到支原體污染圖
4、黑膠蟲(chóng)*：一般低倍鏡下觀察呈黑色點(diǎn)狀，高倍鏡下可看見(jiàn)黑色物蠕動(dòng)，培養(yǎng)液不易變渾濁，在細(xì)胞增殖旺盛之后會(huì)減少或消失。有時(shí)也會(huì)出現(xiàn)觀測(cè)到的運(yùn)動(dòng)物明顯增多，細(xì)胞狀態(tài)變差，終死亡。（*對(duì)于黑膠蟲(chóng)沒(méi)有明確的定論，通常認(rèn)為黑色物是由于多種原因?qū)е录?xì)胞狀態(tài)變差、死亡細(xì)胞產(chǎn)生的碎片）
圖4：細(xì)胞受到黑膠蟲(chóng)污染圖
5、原蟲(chóng)*：該污染在顯微鏡下易觀察到，輕微活動(dòng)，細(xì)胞能生長(zhǎng)但繁殖速度明顯減慢，培養(yǎng)基產(chǎn)生渾濁，細(xì)胞狀態(tài)差，邊緣不清楚，細(xì)胞不透亮。其能與細(xì)胞共生并爭(zhēng)奪培養(yǎng)基營(yíng)養(yǎng)，當(dāng)?shù)竭_(dá)一定的數(shù)量時(shí)就會(huì)影響到細(xì)胞的生長(zhǎng)，導(dǎo)致細(xì)胞死亡。（*對(duì)于原蟲(chóng)污染傾向于是細(xì)菌類污染）
圖5：細(xì)胞受到原蟲(chóng)污染圖
6、病毒：由于病毒過(guò)小導(dǎo)致培養(yǎng)過(guò)程中難以觀察。由于在獲得原代細(xì)胞過(guò)程中沒(méi)有*除去潛在的病毒，導(dǎo)致病毒污染。盡管病毒污染對(duì)細(xì)胞原代培養(yǎng)不會(huì)造成太大影響，但對(duì)下游工業(yè)生產(chǎn)如生產(chǎn)疫苗等造成安全隱患，因此需要盡量去除。
圖6：病毒入侵猴肝臟細(xì)胞層圖像（圖 源自悉尼大學(xué)）
7、非同種細(xì)胞污染 ：這個(gè)主要指不同種類細(xì)胞產(chǎn)生的交叉污染，由于細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中不同種類細(xì)胞株 所需器材和溶液沒(méi)有嚴(yán)格分開(kāi)，導(dǎo)致細(xì)胞交叉污染。據(jù)報(bào)道，世界上已有多種細(xì)胞都被HeLa細(xì)胞所污染，致使許多實(shí)驗(yàn)宣告無(wú)效，因此避免非同種細(xì)胞污染也需要引起實(shí)驗(yàn)者的重視。
圖7：細(xì)胞受到非同種細(xì)胞污染圖
攻略二：污染的去除
細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中難免會(huì)遇到細(xì)胞污染，怎么辦？？？
多數(shù)污染是較難*去除，如果污染的細(xì)胞非珍貴且有備用，宜舍棄;
找到污染源后并清除掉，可復(fù)蘇凍存細(xì)胞或重新購(gòu)置細(xì)胞培養(yǎng)；
若污染細(xì)胞很珍貴，一時(shí)難覓新，針對(duì)不同污染小翊給您如下建議。
攻略三：污染的預(yù)防
細(xì)胞污染是比較難處理，因此預(yù)防就顯的尤為重要。對(duì)于預(yù)防可從以下幾方面著手：
1、 使用抗生素：對(duì)細(xì)胞培養(yǎng)基使用雙抗（在細(xì)胞培養(yǎng)基中推薦青霉素的工作濃度為100U/ml，鏈霉素為0.1mg/ml。）
2、 支原體預(yù)防：可以使用支原體預(yù)防試劑預(yù)防支原體的污染產(chǎn)生。
3、培養(yǎng)器材、用品需消毒滅菌：細(xì)胞培養(yǎng)所用器材要清洗消毒，各種溶液滅菌處理。
4、實(shí)驗(yàn)操作者的無(wú)菌意識(shí)
①洗手消毒，穿隔離衣。工作開(kāi)始時(shí)要用酒精棉球擦手并對(duì)器皿進(jìn)行酒精擦拭；
②操作需在生物安全柜內(nèi)并佩戴口罩；
③盡量使用一次性無(wú)菌器材操作，對(duì)于多次使用的需實(shí)高壓滅菌處理。實(shí)驗(yàn)完畢用酒精擦拭操作臺(tái)面。
5、細(xì)胞交叉污染的預(yù)防
①一次對(duì)多種細(xì)胞培養(yǎng)操作時(shí)，所用器具要嚴(yán)格區(qū)分；
②在進(jìn)行換液或傳代操作時(shí)盡量避免液體濺出污染其他細(xì)胞；
③新購(gòu)細(xì)胞應(yīng)及時(shí)留種凍存，如遇污染可重新復(fù)蘇。
6、無(wú)菌室或細(xì)胞房的污染預(yù)防
①使用0.1%新潔爾滅對(duì)細(xì)胞房或無(wú)菌室進(jìn)行全面*擦洗;
②使用紫外燈長(zhǎng)時(shí)間（0.5-2h）照射；
③使用甲醛熏蒸法。
