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MolPure®核酸提取系列產(chǎn)品，更多選擇，更高質(zhì)量
核酸是由許多核苷酸聚合成的生物大分子化合物，為生命的基本物質(zhì)之一。核酸廣泛存在于所有動(dòng)植物細(xì)胞、微生物內(nèi)，并且常與蛋白質(zhì)結(jié)合形成核蛋白。核酸提取是分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)中基礎(chǔ)的實(shí)驗(yàn)之一，幾乎所有的分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)上游都需要用到核酸提取。
核酸提取方法
核酸提取包含裂解和純化兩大步驟，裂解是使樣品中的核酸游離在裂解體系中的過(guò)程。通過(guò)使蛋白質(zhì)變性，破壞膜結(jié)構(gòu)及解開(kāi)與核酸相連接的蛋白質(zhì)，從而實(shí)現(xiàn)核酸游離在裂解體系中。裂解體系中還可能加入蛋白酶，利用蛋白酶將蛋白質(zhì)消化成小的片段，促進(jìn)核酸與蛋白質(zhì)的分開(kāi)，同時(shí)，也便于后面的純化操作以及獲得更純的核酸。
表1. 核酸提取常見(jiàn)裂解方式
裂解方法 | 原理 | 應(yīng)用 | 適用樣本 |
CTAB法 | 一種陽(yáng)離子去污劑，可溶解細(xì)胞膜，并與核酸形成復(fù)合物。該復(fù)合物在高鹽溶液中可溶，通過(guò)有機(jī)溶劑抽提，去除蛋白、多糖、酚類(lèi)等雜質(zhì)后加入乙醇沉淀即可使核酸分離出來(lái)。 | DNA、RNA提取 | 植物組織、真菌等 |
SDS法 | 一種陰離子去污劑，可促使細(xì)胞裂解，使染色體離析、蛋白質(zhì)變性，釋放出核酸。 | DNA提取、質(zhì)粒提取 | 適用于大部分實(shí)驗(yàn)材料，如血液、細(xì)胞、動(dòng)物組織、細(xì)菌、酵母等 |
胍鹽法 | 胍鹽是蛋白強(qiáng)變性劑，采用高濃度的胍鹽裂解細(xì)胞，促使核蛋白體解離，同時(shí)使細(xì)胞內(nèi)核酸酶失活，避免釋放出的核酸被降解。 | DNA、RNA提取 | 適用于各類(lèi)動(dòng)物組織、培養(yǎng)細(xì)胞、次生代謝物較少的植物組織 |
純化則是使核酸與裂解體系中的其它成分，如蛋白質(zhì)、鹽及其它雜質(zhì)*分離的過(guò)程。常見(jiàn)的純化方式有：有機(jī)溶劑抽提、硅膠質(zhì)吸附（柱式法）、磁珠吸附3種。第—種方法是利用有機(jī)溶劑對(duì)裂解體系進(jìn)行反復(fù)抽提以去除蛋白等雜質(zhì)；再用醇將核酸沉淀下來(lái)，實(shí)現(xiàn)核酸與鹽的分離。第二種和第三種方法都是利用某些固相介質(zhì)，在某些特定的條件下，選擇性地吸附核酸，而不吸附蛋白質(zhì)及鹽的特點(diǎn)，實(shí)現(xiàn)核酸與蛋白質(zhì)及鹽的分離。
核酸提取的原則
- 保證核酸一級(jí)結(jié)構(gòu)的完整性
- 排除其它核酸分子的污染（如提取DNA時(shí)排除RNA的干擾）
- 核酸樣品中不應(yīng)存在對(duì)酶有抑制作用的有機(jī)溶劑和高濃度的金屬離子
- 盡可能降低蛋白質(zhì)、多糖和脂類(lèi)等大分子物質(zhì)污染
MolPure®系列試劑盒，理想的核酸提取產(chǎn)品！
MolPure®柱式核酸提取系列試劑盒采用MolPure® DNA/RNA Column和新型的溶液體系，適用于從各種反應(yīng)體系樣品、多種動(dòng)植物樣本、菌體等復(fù)雜樣本中高效提取和純化高純度、高質(zhì)量的核酸。大部分試劑盒提取過(guò)程不需要用到有毒的酚、lv仿等有機(jī)物抽提，也不需要用到耗時(shí)的異丙醇或乙醇沉淀，操作簡(jiǎn)便，具有高效、快速、環(huán)保等特點(diǎn)。升級(jí)版的離心柱能高效結(jié)合核酸，不吸附蛋白質(zhì)、多糖、脂類(lèi)及其它非核酸類(lèi)物質(zhì)，提取的核酸純度高，可直接用于各種分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)。
產(chǎn)品類(lèi)型
產(chǎn)品性能
1.MolPure Cell/Tissue DNA Kit 細(xì)胞/組織DNA提取試劑盒 18700ES
產(chǎn)品特點(diǎn)
- 得率高：產(chǎn)量高達(dá)40 µg
- DNA純度高：無(wú)蛋白質(zhì)和RNA污染，可直接用于PCR、酶切和雜交等實(shí)驗(yàn)
- 快速簡(jiǎn)便：操作過(guò)程1 h完成
- 安全環(huán)保：無(wú)需使用酚lv仿等有機(jī)物抽提
圖1：小鼠組織DNA提取瓊脂糖膠圖，18700提取產(chǎn)量?jī)?yōu)于T公司同類(lèi)產(chǎn)品
2.MolPure Plant DNA Kit 植物DNA提取試劑盒 18800ES
產(chǎn)品特點(diǎn)
- 樣本范圍廣：適用于普通植物、低含量多糖多酚類(lèi)植物、細(xì)胞、真菌樣品
- DNA純度高：OD260/OD280比值可達(dá)1.7～1.9，可直接用于PCR、酶切和雜交等實(shí)驗(yàn)
- 得率高：產(chǎn)量高達(dá)30 μg
- 安全環(huán)保：無(wú)需使用酚lv仿等有機(jī)物抽提
圖2：擬南芥、楊樹(shù)葉片DNA提取瓊脂糖膠圖，18800提取產(chǎn)量?jī)?yōu)于T公司同類(lèi)產(chǎn)品
3.MolPure Gel Extraction Kit 瓊脂糖凝膠回收試劑盒 19101ES
產(chǎn)品特點(diǎn)
- 回收DNA長(zhǎng)度范圍廣：50 bp-15 kb
- 操作簡(jiǎn)便：15 min即可完成純化
- 回收率高：回收率>60%，高達(dá)90%
圖3：500 bp/1 kb PCR產(chǎn)物瓊脂糖凝膠回收膠圖，19101回收效率略?xún)?yōu)于T公司同類(lèi)產(chǎn)品。
4.MolPure Plasmid Mini Kit 質(zhì)粒小量提取試劑盒 19001ES
產(chǎn)品特點(diǎn)
- 質(zhì)粒提取得率高：升級(jí)版離心柱，可吸附30 μg質(zhì)粒DNA
- 質(zhì)粒純度高：可直接用于酶切、轉(zhuǎn)化、測(cè)序等實(shí)驗(yàn)
- 安全環(huán)保：無(wú)需使用酚lv仿等有機(jī)物抽提
圖4：PUC19、40 kb質(zhì)粒提取結(jié)果膠圖，19001提取質(zhì)量不亞于進(jìn)口品牌T公司同類(lèi)產(chǎn)品。
常見(jiàn)問(wèn)答
DNA提取常見(jiàn)問(wèn)題：
常見(jiàn)問(wèn)題 | 可能原因 | 解決方法 |
DNA產(chǎn)量低 | 處理材料過(guò)量或者裂解不* | 使用適量的起始材料，充分研磨或者勻漿 |
RNA殘留 | 樣品RNA含量太豐富 | 提高RNase A處理濃度 |
未提取到DNA | 漂洗液中忘記加無(wú)水乙醇 | 第—次實(shí)驗(yàn)時(shí)，在Wash Buffer*中加入量無(wú)水乙醇 |
離心柱堵塞 | 研磨裂解不充分，團(tuán)塊多；裂解物太粘稠；離心力太小 | 在裂解后添加一步離心以去除雜塊；減低起始材料量，不要處理過(guò)量；加大離心力 |
洗脫的DNA溶液帶顏色或者膜上有明顯的色素殘留 | 漂洗次數(shù)不夠 | 漂洗完成后，加500 μL乙醇再漂洗一遍。 |
起始材料太多過(guò)量 | 減少起始處理材料，不要過(guò)量 | |
洗脫下來(lái)的DNA產(chǎn)量低 | 離心柱殘留有較多乙醇或者底部不慎沾有乙醇 | 確保做了空柱離心步驟，否則殘留乙醇會(huì)影響洗脫效率 |
洗脫緩沖液量偏低 | 使用100-200 μL Elution Buffer洗脫 | |
A260吸光值異常偏高 | 一些硅基質(zhì)膜成分一起洗脫下來(lái)，干擾了吸光值 | 將洗脫的基因組DNA溶液13,000 rpm離心1 min，小心取上清使用 |
DNA下游酶切不能切開(kāi)或者酶切不* | 離心柱殘留有較多乙醇或者底部不慎沾有乙醇抑制了酶切反應(yīng) | 確保做了空柱離心，然后空氣中晾幾分鐘，讓殘留乙醇揮發(fā) |
RNA提取常見(jiàn)問(wèn)題：
常見(jiàn)問(wèn)題 | 可能原因 | 解決方法 |
提取不到RNA或者RNA產(chǎn)量低 | 漂洗液中沒(méi)有添加正確體積的無(wú)水乙醇 | 按照說(shuō)明書(shū)在試劑盒使用前，添加正確體積的無(wú)水乙醇并混勻 |
樣本保存不當(dāng)或樣本保存時(shí)間過(guò)久 | 樣本保存于-80℃或凍存于液氮中，并避免反復(fù)凍融使用；盡量采用新鮮組織或培養(yǎng)的細(xì)胞進(jìn)行RNA提取操作 | |
樣本裂解不充分 | 在組織勻漿時(shí)，請(qǐng)保證組織充分勻漿，組織細(xì)胞都被充分裂解釋放RNA | |
樣本用量不合適 | 按說(shuō)明書(shū)建議量添加樣品用量及裂解液，樣品添加過(guò)多會(huì)導(dǎo)致RNA提取量降低 | |
洗脫液添加不正確 | 確認(rèn)RNase-free H2O添加到了MolPure® RNA Column中央位置 | |
洗脫體積不合適或洗脫不* | 洗脫液體積為100 μL為佳；若洗脫效果不理想，建議RNase-free H2O預(yù)熱后加入，延長(zhǎng)室溫放置時(shí)間 | |
吸附柱中有漂洗液洗滌后的乙醇?xì)埩?/span> | 如果洗滌后空柱離心1 min仍有乙醇?xì)埩?，可以將?/span>柱離心操作的時(shí)間增加至2 min，或?qū)?/span>MolPure® RNA Column室溫晾置5 min，以充分除去殘留乙醇 | |
獲得的RNA有降解 | 組織樣本沒(méi)有及時(shí)保存 | 組織樣本或者細(xì)胞在收集后若不及時(shí)使用，請(qǐng)立即低溫保存于-80℃或者液氮中；提取RNA請(qǐng)盡量使用新近采集的組織或細(xì)胞樣本 |
組織樣本反復(fù)凍融 | 組織樣本保存時(shí)，切成小塊保存，使用時(shí)取出其中一塊即可，避免樣本的反復(fù)凍融導(dǎo)致RNA的降解 | |
操作間有RNase引入或沒(méi)有佩戴一次性手套、口罩等 | RNA提取實(shí)驗(yàn)在單獨(dú)的RNA操作間進(jìn)行，并在實(shí)驗(yàn)前清理好實(shí)驗(yàn)桌，實(shí)驗(yàn)時(shí)佩戴一次性手套、口罩，zui大程度上避免RNase引入導(dǎo)致的RNA降解 | |
試劑在使用過(guò)程中被RNase污染 | 更換新的配套試劑進(jìn)行相關(guān)實(shí)驗(yàn) | |
RNA操作時(shí)所用的離心管、槍頭等有RNase污染 | 確認(rèn)RNA提取時(shí)所用到的離心管、槍頭、移液器等都是RNase-free級(jí)別 | |
獲得的RNA影響下游實(shí)驗(yàn) | 洗脫后的RNA有鹽離子殘留 | 確認(rèn)漂洗液中添加了正確體積的乙醇，并進(jìn)行2次柱洗滌；如果還有鹽離子殘留，在MolPure® RNA Column漂洗后，室溫放置5 min后再進(jìn)行離心操作，以zui大程度上去除鹽離子污染 |
洗脫后的RNA有乙醇?xì)埩?/span> | 確認(rèn)漂洗液洗滌后，有進(jìn)行空柱離心操作；若還有乙醇?xì)埩?，可以將?/span>柱離心時(shí)間增加至2 min，或者在空柱離心后室溫晾置5 min，以zui大程度上去除乙醇?xì)埩?/span> |
產(chǎn)品訂購(gòu)
產(chǎn)品名稱(chēng) | 貨號(hào) | 規(guī)格 | 價(jià)格（元） | *（元） |
MolPure PCR Purification Kit PCR產(chǎn)物純化試劑盒 | 19106ES50/70 | 50/200T | 233/573 | 159/399 |
MolPure Gel Extraction Kit 瓊脂糖凝膠回收試劑盒 | 19101ES50/70 | 50/200T | 263/573 | 189/399 |
MolPure Plasmid Mini Kit 質(zhì)粒小量提取試劑盒 | 19001ES50/70 | 50/200T | 183/573 | 129/399 |
MolPure Endo-free Plasmid Maxi Kit 無(wú)內(nèi)毒素質(zhì)粒大量提取試劑盒 | 19036ES10 | 10T | 973 | 679 |
MolPure Cell/Tissue DNA Kit 細(xì)胞/組織DNA提取試劑盒 | 18700ES50/70 | 50/200T | 413/1483 | 289/1039 |
MolPure Plant DNA Kit 植物DNA提取試劑盒 | 18800ES08/20/50 | 5T/50/200T | 100/513/1653 | 70/359/1159 |
MolPure TRIeasy Plus Total RNA Kit 總RNA提取試劑盒(帶離心柱） | 19211ES60 | 100T | 1293 | 909 |
MolPure Cell/Tissue Total RNA Kit 細(xì)胞/組織總RNA提取試劑盒 | 19221ES08/50 | 5T/50T | 133/893 | 89/629 |
MolPure Plant RNA Kit 植物RNA提取試劑盒 | 19291ES08/50 | 5T/50T | 170/873 | 119/609 |
MolPure Cell/Tissue miRNA Kit 細(xì)胞/組織miRNA提取試劑盒 | 19331ES50 | 50T | 2353 | 1649 |
更多產(chǎn)品敬請(qǐng)期待，持續(xù)上新中~
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類(lèi)別 | 產(chǎn)品名稱(chēng) | 貨號(hào) | 規(guī)格 | 價(jià)格（元） |
PCR類(lèi) | 2×Hieff® PCR Master Mix (With Dye) | 10102ES03/08 | 1/5×1ml | 40/150 |
2×Hieff® Robust PCR Master Mix（With Dye) | 10106ES03/08 | 1/5×1ml | 65/265 | |
2×Hieff® HotStart PCR Genotyping Master Mix（With Dye) | 10108ES03/08 | 1/5×1ml | 75/345 | |
Hieff Canace® Gold High-Fidelity DNA Polymerase 高保真DNA聚合酶 | 10148ES60/76/80 | 100/500/1000U | 683/2383/4583 | |
2× Hieff Canace® Gold PCR Master Mix 高保真酶預(yù)混液 | 10149ES03/08 | 1/5×1ml | 553/1453 | |
克隆類(lèi) | Hieff CloneTM Zero TOPO-TA Cloning Kit 零背景TOPO-TA克隆試劑盒 | 10907ES20/50 | 20/50T | 625/1323 |
Hieff CloneTM Zero TOPO-Blunt Cloning Kit 零背景TOPO-Blunt平末端克隆試劑盒 | 10909ES20 | 20T | 625 | |
Hieff CloneTM Plus One Step Cloning Kit 一步法快速克隆試劑盒 | 10911ES25/62 | 25/5×25T | 655/2455 | |
Hieff CloneTM Plus Multi One Step Cloning Kit 多片段一步法快速克隆試劑盒 | 10912ES10/50 | 10/5×10T | 457/1967 | |
反轉(zhuǎn)錄類(lèi) | Hifair® II 1st Strand cDNA Synthesis Kit (gDNA digester plus) | 11121ES60 | 100 T | 935 |
Hifair®II 1st Strand cDNA Synthesis SuperMix for qPCR(gDNA digester plus) | 11123ES60 | 100 T | 955 | |
Hifair® Ⅲ 1st Strand cDNA Synthesis SuperMix | 11137ES60 | 100 T | 1193 | |
Hifair® Ⅲ 1st Strand cDNA Synthesis SuperMix for qPCR (gDNA digester plus) | 11141ES60 | 100T | 1383 | |
qPCR類(lèi) | Hifair® qPCR SYBR® Green Master Mix (No Rox ) | 11201ES08 | 5 mL | 740 |
Hifair® qPCR SYBR® Green Master Mix (Low Rox Plus) | 11202ES08 | 5 mL | 740 | |
Hifair® qPCR SYBR® Green Master Mix (High Rox Plus) | 11203ES08 | 5 mL | 740 | |
Hieff UNICON® Power qPCR SYBR Green Master Mix ( 抗體法，No Rox) | 11195ES08 | 5 mL | 1653 | |
Hieff UNICON® Power qPCR SYBR Green Master Mix ( 抗體法，Low Rox) | 11196ES08 | 5 mL | 1653 | |
Hieff UNICON® Power qPCR SYBR Green Master Mix ( 抗體法，High Rox) | 11197ES08 | 5 mL | 1653 | |
Hieff UNICON® qPCR SYBR Green Master Mix ( 抗體法，No Rox) | 11198ES08 | 5 mL | 1466 | |
Hieff UNICON® qPCR SYBR Green Master Mix ( 抗體法，Low Rox) | 11199ES08 | 5 mL | 1466 | |
Hieff UNICON® qPCR SYBR Green Master Mix ( 抗體法，High Rox) | 11200ES08 | 5 mL | 1466 | |
核酸電泳 | YeaRed Nucleic Acid Gel Stain (10,000× in Water) YeaRed 核酸染料（10,000× 水溶液） | 10202ES76 | 500μl | 585 |
雙熒光素酶檢測(cè) | Dual Luciferase Reporter Gene Assay Kit 雙熒光素酶報(bào)告基因檢測(cè)試劑盒 | 11402ES60/80 | 100/1000T | 1265/9965 |
轉(zhuǎn)染試劑 | Hieff TransTM Liposomal Transfection Reagent 脂質(zhì)體核酸轉(zhuǎn)染試劑 | 40802ES02/03/08 | 0.5/1/5×1ml | 738/1308/4878 |
Calcium Phosphate Cell Transfection Kit 磷酸鈣法細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑 | 40803ES70 | 200T | 625 |
