——高效、迅捷、持久

 作用原理

兩親性磷脂分子在水中可以形成同心圓形式的磷脂雙分子層球體，磷脂雙分子層中間通過水相分隔。溶解在水溶液中的氯磷酸鹽在形成脂質(zhì)體的過程中被包裹進磷脂雙分子層之間的水相中（如圖1）。游離的氯磷酸鹽不能自由的通過脂質(zhì)體的磷脂雙分子層。隨著脂質(zhì)體被巨噬細胞吞噬，在巨噬細胞溶酶體磷酸酶的作用下，溶解在脂質(zhì)體水相中的氯磷酸鹽就可以被逐步釋放出來，并累積在細胞內(nèi)，當其達到一定濃度時，巨噬細胞將會受到不可逆轉(zhuǎn)的損傷，從而進入凋亡過程（如圖2）。從死亡的巨噬細胞中釋放出來的氯磷酸鹽在細胞外的半衰期極短（大約15 min），可以通過泌尿系統(tǒng)排除體外。

圖1：氯磷酸-脂質(zhì)體（Clodronate liposomes）復(fù)合物

圖2：巨噬細胞清除原理示意圖

 產(chǎn)品性質(zhì)

1mL脂質(zhì)體體懸液中所含的氯磷酸大約為5 mg。所用的磷酸鹽緩沖液為10 mM Na₂HPO₄，10 mM NaH₂PO₄，140 mM NaCl。

 體內(nèi)注射方案（僅供參考）

隔日尾靜脈注射200 μL clodronate liposome，根據(jù)實驗要求制定注射日程，通過免疫組化或流式檢測巨噬細胞去除效率。

尾靜脈注射方法流程：

（1）將小鼠放在倒扣的飯盒內(nèi)，從孔口拉出尾巴，小鼠的尾部有2條動脈和3條靜脈，2條動脈分別在尾部的背側(cè)面和腹側(cè)面，3條靜脈呈品字型分布，一般采用左右兩側(cè)的靜脈；

（2）將紗布浸泡于約70℃溫水中，拿出后包裹尾巴，以達到使尾部血管擴張及軟化表皮角質(zhì)的目的；

（3）行尾部靜脈注射時，以左手拇指和食指前后摁住鼠尾，留出約2 cm一段，使皮膚緊張，靜脈更為充盈，右手持1 mL針頭注射器，使針頭與靜脈平行(小于30°角)，從尾巴的下1/4處進針，開始注入藥物時應(yīng)緩慢，仔細觀察，如果無阻力，無白色皮丘出現(xiàn)，說明已刺入血管，可正式注入藥物。

（4）有的實驗需連日反復(fù)尾靜脈注射給藥，注射部位應(yīng)盡可能從尾端開始，按次序向尾根部移動，更換血管位置注射給藥。拔出針頭后，用棉球按住注射部位輕壓1-2 min，止血。

注：以上操作方法和劑量使用僅供參考，不同的實驗要求需自行設(shè)計實驗方案或是參考相關(guān)文獻。

 靜脈注射效果參考示意圖

圖3：靜脈注射效果圖

 效果展示

參考案例一：

圖4：左圖是正常小鼠肝臟免疫細胞中Kupffer細胞的比例，右圖是注射Clodronate Liposomes 48小時后Kupffer細胞的比例，可以看到Kupffer細胞基本被清除^[1]。

參考案例二：

圖5：上圖是小鼠LLC細胞肺癌成瘤實驗中正常腫瘤組織中的巨噬細胞（紅色熒光），下圖是氣管灌注Clodronate Liposomes腫瘤組織中的巨噬細胞（紅色熒光），可以看出腫瘤中的巨噬細胞基本被清除^[2]。

 FAQ

Q1:收到Clodronate liposomes后該如何操作？

A:收到氯磷酸脂質(zhì)體后，如果不能馬上使用，需要放置在4℃冰箱。禁止凍存！使用時作為原液使用，不能進行稀釋。脂質(zhì)體很容易發(fā)生沉淀，建議使用之前輕輕混勻，另外4℃的氯磷酸脂質(zhì)體不能馬上使用，需要恢復(fù)到室溫才能進行注射。

Q2:如何將脂質(zhì)體從小瓶中轉(zhuǎn)移出來？

A:從小瓶中轉(zhuǎn)移脂質(zhì)體的最佳方法是使用無菌針頭注射器。這樣小瓶中剩余的脂質(zhì)體懸浮液就可以保持密封和清潔。您也可以使用帶有無菌吸頭的移液器進行轉(zhuǎn)移，但潔凈的環(huán)境中進行，例如在BSC罩中。

Q3: Clodronate liposomes能否用于體外巨噬細胞清除？

A:產(chǎn)品可以用于體外巨噬細胞的清除，但是這種方法比較適合體內(nèi)實驗。主要是由于在體外培養(yǎng)過程中，從死亡細胞釋放的氯磷酸或者是從脂質(zhì)體中“滲漏"出來氯磷酸，會一直存在于培養(yǎng)基中，但是在體內(nèi)，氯磷酸的半衰期很短，很快就會被腎臟清除。雖然游離的氯磷酸不會進入細胞也不會進入脂質(zhì)體，但是一旦他們在培養(yǎng)基中積累就會慢慢地進入細胞中。

Q4:在靜脈注射Clodronate liposomes后動物很快就死亡了，是什么原因？

A:一方面有可能是動物注射了不均一的脂質(zhì)體懸液。建議在使用之前輕輕搖晃混勻。脂質(zhì)體在體外一段時間后會發(fā)生沉降。如果在很長一段時間內(nèi)需要一次注射多只動物，那么脂質(zhì)體便會在注射器中發(fā)生沉淀，形成不均一懸液，這樣一來，第一只注射的計量與最后一只注射的計量就會發(fā)生明顯的變化。另外一方面有可能是脂質(zhì)體剛從冰箱取出后，沒有恢復(fù)到室溫。

Q5:動物在注射Clodronate liposomes后幾天就死亡了？

A：這個可能是受到細菌的污染，體內(nèi)清除巨噬細胞后會增加例如病毒粒子，細菌或者酵母感染的幾率。

Q6:靜脈注射Clodronate liposomes后大鼠脾臟/肝臟中的ED1+細胞并沒有*消失？

A：大鼠中成熟的巨噬細胞呈現(xiàn)ED1和ED2雙陽性，但是有一些沒有吞噬功能的或者吞噬作用小的前體細胞也是ED1+，但是呈現(xiàn)ED2-。因此，所有ED2+的細胞都可以被*清除，但是ED1+的細胞卻只能被部分清除，清除的比率取決于前體/成熟巨噬細胞的比例。

Q7: Clodronate liposomes沒有達到期望的效果？

A：氯磷酸脂質(zhì)體都是大批量的生產(chǎn)，每批次都會對氯磷酸的濃度以及一些可能的污染物進行檢測，確保無誤后才會銷售給客戶。另外，脂質(zhì)體容易收到溫度的影響。正確的運輸和儲存方式是4~8℃，懸液既不能被凍存，也不能被加熱超過30℃。自收到貨物起，需要在3個月內(nèi)使用完，不然有可能會影響使用的效果。

Q8:在靜脈注射時，能不能增加注射的體積？

A：靜脈注射時需要依據(jù)動物的體重，不能超過0.1 mL/10 mg，但是進行腹腔注射可以適當?shù)脑黾幼⑸涞捏w積。皮下注射需要根據(jù)注射位點的容量進行決定。

Q9:使用脂質(zhì)體應(yīng)注意的一些事項？

A：通過具有飽和烴鏈的脂質(zhì)制備而來的脂質(zhì)體實際上非常堅固，但仍需要注意以下一些事項。

①不要與有機溶劑混合，如氯仿、甲醇、乙醇、DMSO等。

②不要添加表面活性劑，除非您必須要這樣做以裂解脂質(zhì)體。

③不要加熱、接近或高于脂質(zhì)主相轉(zhuǎn)變溫度，除非進行藥物加載，這需要在相變溫度以上進行孵育。

 產(chǎn)品訂購

【注】40338體內(nèi)巨噬細胞清除劑空白脂質(zhì)體對照是相對于40337體內(nèi)巨噬細胞清除劑而言的，僅在制備的過程中沒有添加氯磷酸的成分，是實驗過程中陰性對照。

 參考文獻

[1]: Guan Z, Ding Y, Liu Y, Zhang Y, Zhao J, Li C, Li Z, Meng S. Extracellular gp96 is a crucial mediator for driving immune hyperactivation and liver damage. Sci Rep. 2020 Jul 28;10(1):12596. doi: 10.1038/s41598-020-69517-7. PMID: 32724151; PMCID: PMC7387550.

[2]: Li R, Yang L, Jiang N, Wang F, Zhang P, Zhou R, Zhang J. Activated macrophages are crucial during acute PM2.5 exposure-induced angiogenesis in lung cancer. Oncol Lett. 2020 Jan;19(1):725-734. doi: 10.3892/ol.2019.11133. Epub 2019 Nov 21. PMID: 31897188; PMCID: PMC6924157.