遇到支原體污染，如何挽救您無(wú)比珍貴的細(xì)胞？

------支原體檢測(cè)、預(yù)防、去除一步到位！

>>>導(dǎo)讀

實(shí)驗(yàn)室和細(xì)胞工廠在細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中，一直受到支原體污染的困惑，翊圣生物（YEASEN）的細(xì)胞房曾經(jīng)也受到過(guò)支原體的污染，我們選擇過(guò)很多進(jìn)口品牌的清除劑對(duì)支原體進(jìn)行滅殺，這些品牌很難做到整體清除。針對(duì)這個(gè)問(wèn)題，經(jīng)過(guò)我們多次的實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證，推出了整體清除支原體的方案。我們的產(chǎn)品有：支原體檢測(cè)、培養(yǎng)體系中支原體的清除、環(huán)境中支原體的清除（培養(yǎng)箱、水浴鍋、超凈臺(tái)和細(xì)胞房）、支原體預(yù)防相關(guān)。

>>>背景介紹

支原體污染對(duì)細(xì)胞培養(yǎng)造成多方面的不良影響，已經(jīng)成為在細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)的一個(gè)嚴(yán)重問(wèn)題，保守估計(jì)常規(guī)細(xì)胞培養(yǎng)中支原體污染率為15-35%，嚴(yán)重干擾實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可信度。因此，定期進(jìn)行支原體檢測(cè)和去除，確保無(wú)支原體存在細(xì)胞培養(yǎng)體系內(nèi)才能獲得準(zhǔn)確有效的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。

什么是支原體（Mycoplasma）
支原體又稱霉形體，直徑在0.1-0.3μm，是目前發(fā)現(xiàn)的小的///簡(jiǎn)單的原核生物，可以輕松地通過(guò)濾膜，混入培養(yǎng)系統(tǒng)中，呈高度多形性，有球形、桿形、絲狀、分支狀等多種形態(tài)。通常依附在細(xì)胞膜表面，支原體沒有剛性的細(xì)胞壁，因此普通的抗生素對(duì)它根本不起作用，實(shí)驗(yàn)室常見的種類有：口腔支原體、精氨酸支原體、豬鼻支原體、發(fā)酵支原體、人型支原體、唾液支原體、肺支原體和梨支原體等。

圖1：支原體的形態(tài)及特點(diǎn)

支原體污染的后果

細(xì)菌和真菌造成的污染相對(duì)比較容易檢測(cè)、預(yù)防和去除，然而支原體造成的污染很難察覺，即使生長(zhǎng)密度高達(dá) 10⁷-10⁹CFU/ml，也很難有污染跡象（渾濁、pH 變化等）。支原體污染后導(dǎo)致細(xì)胞生長(zhǎng)變慢，狀態(tài)變差，不會(huì)馬上使細(xì)胞致死，但會(huì)影響細(xì)胞內(nèi)的各種參數(shù)，如改變細(xì)胞膜抗原性，改變細(xì)胞新陳代謝，干擾核酸的合成，改變 DNA 轉(zhuǎn)染效率，導(dǎo)致染色體畸變等。

圖2：受支原體污染后細(xì)胞出現(xiàn)的相關(guān)狀態(tài)的改變

典型的支原體污染來(lái)源
①細(xì)胞之間交叉污染； ④培養(yǎng)基或其他試劑污染；
②工作環(huán)境或?qū)嶒?yàn)器材的污染； ⑤制備細(xì)胞的原始組織或器官的污染；
③實(shí)驗(yàn)者無(wú)菌操作不佳；

細(xì)胞培養(yǎng)遇到支原體污染，怎么辦

圖3：支原體污染整體解決方案

>>>Yeasen三位一體幫您解決細(xì)胞支原體污染問(wèn)題
一、支原體檢測(cè)

一步法恒溫支原體檢測(cè)：

Yeasen一步法恒溫支原體檢測(cè)試劑采用*的等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)，在顏色判別方面具有更強(qiáng)的辨識(shí)度，由紫紅色（陰性）向天藍(lán)色（陽(yáng)性）的變，更利于肉眼的判別。

圖4：一步法支原體檢測(cè)操作流程

PCR法支原體檢測(cè)：

Yeasen PCR支原體檢測(cè)法不同于普通的一步法PCR檢測(cè)方法，將原先的1對(duì)引物提高至3對(duì)引物，針對(duì)支原體16s和23s保守區(qū)進(jìn)行巢式PCR擴(kuò)增，在改變產(chǎn)品非特異性的同時(shí)大大提升了產(chǎn)品的靈敏度，可以檢測(cè)低至單個(gè)拷貝的支原體。

圖5: PCR法擴(kuò)增含不同濃度支原體樣品獲得的凝膠電泳圖

表1：Yeasen一步法恒溫支原體檢測(cè)試劑所能檢測(cè)的支原體種類

【注】藍(lán)色部分為一步法恒溫檢測(cè)和PCR法支原體檢測(cè)所能檢測(cè)的相同支原體

二、MycAway^TM 支原體去除試劑（1000×）

MycAway^TM 支原體去除試劑（1000×）是一種混合制劑，可通過(guò)抑制 DNA 和支原體生長(zhǎng)所必須的相關(guān)蛋白合成來(lái)取得良好的支原體清除效果且對(duì)細(xì)胞無(wú)傷害，///大程度上挽救您的細(xì)胞，減少因支原體污染帶來(lái)的損失。

去除前                                                                  去除后

圖6：細(xì)胞去除效果的展示

支原體去除試劑的特點(diǎn)：

毒性低：對(duì)細(xì)胞毒性小，不影響后續(xù)細(xì)胞實(shí)驗(yàn)，如細(xì)胞活力檢測(cè)和細(xì)胞轉(zhuǎn)染等；

穩(wěn)定性強(qiáng)：-20℃試劑能較長(zhǎng)時(shí)間保存并保持高效用；

操作簡(jiǎn)單：只需將產(chǎn)品添加至支原體污染的培養(yǎng)基中孵育即可；

起效快：“*"、///快3天即可見效；

去除范圍廣：能去除實(shí)驗(yàn)室絕大多數(shù)支原體類型。

圖7：支原體去除試劑細(xì)胞毒性檢測(cè)圖示

三、支原體預(yù)防

>>>FAQ

Q:如何檢測(cè)新鮮的培養(yǎng)基是否有支原體污染？

A:把新鮮的培養(yǎng)基放在CO₂培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48小時(shí)（樣品），吸取一定的上清進(jìn)行檢測(cè)。如果樣品的顏色變成天藍(lán)色或者出現(xiàn)PCR擴(kuò)增條帶，則證明含有支原體污染。

Q:對(duì)于同一個(gè)樣品，為什么一步法恒溫試劑盒檢測(cè)結(jié)果為陽(yáng)性，而PCR檢測(cè)為陰性呢？

A:一步法恒溫檢測(cè)試劑盒檢測(cè)的支原體的種類是27種，而PCR檢測(cè)方法檢測(cè)的是常見的13種支原體。樣品中污染的支原體可能不包括在PCR法檢測(cè)的支原體種類內(nèi)。

Q:對(duì)于同一個(gè)樣品，為什么PCR結(jié)果為陽(yáng)性，而一步法恒溫檢測(cè)試劑盒結(jié)果為陰性？

A:PCR方法的靈敏度要高于一步法恒溫檢測(cè)法，可以檢測(cè)單個(gè)拷貝的支原體，而一步法需要10³個(gè)拷貝的支原體數(shù)目。

Q:巢式PCR法和一步法恒溫支原體檢測(cè)試劑盒到底哪個(gè)比較好呢？

A:客戶可以根據(jù)自己的實(shí)驗(yàn)需求選擇相應(yīng)的產(chǎn)品，也可以聯(lián)合使用兩者對(duì)支原體進(jìn)行鑒定。

訂購(gòu)信息

相關(guān)產(chǎn)品推薦