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新品上新|植物rRNA去除試劑盒,看得見(jiàn)的去除效率!
近,有小伙伴私信小翊,抱怨轉(zhuǎn)錄組建庫(kù),后得到的有效信息和耗費(fèi)的財(cái)力、物力、人力、時(shí)間相比,簡(jiǎn)直是九牛二毛。歸根到底,竟是rRNA惹的禍。
轉(zhuǎn)錄組(transcriptome)是指在某一特定生理?xiàng)l件下,細(xì)胞、組織或者生物體內(nèi)所有轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物的集合,即轉(zhuǎn)錄出來(lái)的所有RNA的總和,包括編碼RNA(mRNA)和非編碼RNA(tRNA、rRNA、miRNA、lncRNA、circRNA)等不同類型的RNA分子,其中,rRNA約占RNA總量的 80%以上,是多的一類RNA。
圖1:總RNA中各種RNA占比餅狀圖
rRNA作為總RNA中///豐富的成員,提供的轉(zhuǎn)錄本信息卻少之又少,且檢測(cè)過(guò)多會(huì)掩蓋其它基因的表達(dá)豐度,從而增加低豐度轉(zhuǎn)錄本的檢測(cè)難度。因此,通常在測(cè)序之前從總RNA樣品中去除rRNA,rRNA去除的效率也被視為///大化讀取到轉(zhuǎn)錄物的關(guān)鍵因素。
新品簡(jiǎn)介
翊圣生物新推出植物rRNA去除試劑盒Hieff NGS® MaxUp rRNA Depletion Kit (Plant)(#12254),滿足客戶rRNA去除的多元化需求,致力于將轉(zhuǎn)錄本信息讀取做到///大化。
圖2:植物rRNA去除試劑盒
Hieff NGS® MaxUp rRNA Depletion Kit (Plant)利用RNase H消化法去除植物來(lái)源總RNA中的核糖體RNA(包括細(xì)胞質(zhì)18S、25S rRNA,線粒體18S、26S rRNA,葉綠體16S、23S rRNA)以保留信使RNA(mRNA)和其它非編碼RNA。該試劑盒對(duì)于完整和部分降解的總RNA均具有良好的rRNA去除效果。經(jīng)rRNA去除所獲得的RNA樣本可用于高通量測(cè)序分析mRNA和非編碼RNA,可顯著提高測(cè)序結(jié)果中有效數(shù)據(jù)比例,也可用于cDNA合成或其它下游應(yīng)用。
產(chǎn)品特點(diǎn)
圖3:植物rRNA去除試劑盒特點(diǎn)
操作流程
圖4:植物rRNA去除操作流程
產(chǎn)品數(shù)據(jù)
1、不同起始量,rRNA的去除效率測(cè)試
不同Input量的擬南芥葉片RNA,使用12254進(jìn)行rRNA去除后銜接12251構(gòu)建鏈特異性文庫(kù),并進(jìn)行 Illumina 雙端測(cè)序(2 × 150 bp),分析下機(jī)數(shù)據(jù)中rRNA的占比。結(jié)果表明:測(cè)試的所有起始量均能有效去除rRNA。
圖5:不同投入量,rRNA去除效率圖
2、重復(fù)實(shí)驗(yàn)相關(guān)性測(cè)試
1μg擬南芥葉片RNA,使用12254進(jìn)行rRNA去除后銜接12251構(gòu)建鏈特異性文庫(kù),實(shí)驗(yàn)進(jìn)行3次重復(fù)。文庫(kù)分別進(jìn)行 Illumina 雙端測(cè)序(2 × 150 bp),分析下機(jī)數(shù)據(jù)不同轉(zhuǎn)錄本的表達(dá)量。結(jié)果表明:3次重復(fù)轉(zhuǎn)錄本表達(dá)相關(guān)性保持一致。
圖6:植物rRNA去除試劑重復(fù)實(shí)驗(yàn)相關(guān)性測(cè)試圖
3、不同投入量相關(guān)性測(cè)試
不同Input量的擬南芥葉片RNA,使用12254進(jìn)行rRNA去除后銜接12251構(gòu)建鏈特異性文庫(kù),并進(jìn)行 Illumina 雙端測(cè)序(2 × 150 bp),分析下機(jī)數(shù)據(jù)不同轉(zhuǎn)錄本的表達(dá)量。結(jié)果表明:測(cè)試的所有起始量轉(zhuǎn)錄本表達(dá)相關(guān)性保持一致。
圖7:植物rRNA去除試劑不同投入量相關(guān)性測(cè)試圖
4、多個(gè)物種的rRNA去除效率測(cè)試
不同物種來(lái)源的1 μg Total RNA,使用12254進(jìn)行rRNA去除后銜接12251構(gòu)建鏈特異性文庫(kù),同時(shí)構(gòu)建未去除的文庫(kù),并進(jìn)行 Illumina 雙端測(cè)序(2 × 150 bp),分析下機(jī)數(shù)據(jù)不同物種在去除前后rRNA的占比。結(jié)果表明:針對(duì)多種植物來(lái)源RNA,該試劑盒均能有效去除rRNA。
圖8:多物種rRNA去除效率測(cè)試圖
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