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識破支原體污染，拯救你的細胞
支原體（mycoplasma）是一種沒有細胞壁的小原核細胞。在細胞培養(yǎng)過程中，支原體污染率達到60%以上，當細胞（特別是傳代細胞）被支原體污染后，細胞內的DNA、RNA及蛋白表達發(fā)生改變，污染嚴重時細胞生長緩慢，細胞形態(tài)發(fā)生改變，并出現(xiàn)細胞病變。因而細胞培養(yǎng)過程中，防止支原體污染是一個世界性的難題。
圖1支原體污染細胞后，細胞形態(tài)發(fā)生改變（來源：該圖片來源于網絡）
支原體污染細胞后很難察覺，同時若細胞培養(yǎng)過程受到了支原體污染，*清除支原體也是非常困難的。因此在細胞培養(yǎng)過程中，定期進行支原體檢測，在源頭上清除支原體污染，并做好支原體預防工作顯得尤為重要。翊圣生物為了全///方位的呵護您的細胞免受支原體的污染，除提供支原體檢測試劑盒以外，還包括支原體清除試劑和對正常細胞提供支原體預防試劑，以防支原體污染。
1.支原體檢測
目前檢測支原體的方法有很多，主要包括：熒光染色法、酶標法、低張?zhí)幚淼匾录t染色法、PCR法等。目前YEASEN提供了兩款檢測試劑盒，包括一步法支原體檢測試劑盒和PCR法支原體檢測試劑盒，兩者均是通過PCR擴增檢測支原體的存在。兩者實驗原理存在差異，但產品性能各有千秋。
一步法支原體檢測試劑盒
一步法快速支原體檢測試劑盒是利用Yeasen*的等溫擴增技術，同時加入了UDG酶，在極///大程度上抑制假陽性反應。主要原理是若細胞培養(yǎng)物被支列原體污染，支原體DNA的保守序會被大量、快速地擴增，使反應液由藍紫色變成天藍色，結果肉眼可辨，無需電泳。
圖2一步法支原體檢測試劑盒靈敏度測試（注：藍色為陽性，紫色為陰性）
PCR法支原體檢測試劑盒
PCR法支原體檢測試劑盒，將一步法的1對引物提高至3對引物，所用引物為根據支原體16S-23S rRNA序列保守區(qū)域設計通過巢式PCR擴增，只特異性擴增支原體DNA，檢出靈敏度與特異性均較高，可以檢測低至單個拷貝的支原體。
圖3 PCR法支原體檢測試劑盒靈敏度測試（注：NTC為陰性，其余為陽性）
一步法和PCR法性能對比
一步法和PCR法檢測試劑盒，各有千秋，客戶可以根據自己需求，選擇合適的試劑盒即可。
圖4 一步法和PCR法產品性能對比
2.支原體清除
若是檢測到細胞受到支原體的污染，需要及時清理來挽救來之不易的細胞。目前YEASEN提供的MycAway™ 支原體去除試劑（1000×），是一種混合抗生素制劑，含有三種對支原體具有抑菌作用的組分，分別是喹諾酮類、四環(huán)素衍生物類和大環(huán)內酯類抗生素?？赏ㄟ^抑制支原體的DNA和蛋白合成，達到清除支原體的效果，且對細胞毒性低，不影響細胞生長狀態(tài)。
圖5清除劑清除效果對比圖
支原體去除產品特點：
毒性低：對細胞毒性小，不影響后續(xù)細胞實驗，如細胞活力檢測和細胞轉染等；
操作簡單：只需將產品添加至支原體污染的培養(yǎng)基中孵育即可；
起效快、周期短：///快3天即可見效，一個周期（大約7天）即可清除干凈；
去除范圍廣：幾乎能去除所有類型的支原體。
3.支原體預防
支原體污染是比較難處理，因此預防就顯的尤為重要。主要包括以下幾個方面：細胞預防（直接加入細胞培養(yǎng)基中）、超凈臺預防（噴霧）、水浴鍋預防和細胞培養(yǎng)箱水盤預防（直接按比例加入）等。
圖6不同支原體預防試劑對比
總之，支原體帶來的負面影響不容忽視。在細胞培養(yǎng)過程中，我們要定期檢測支原體，預防細胞被污染，是細胞培養(yǎng)過程中*的操作步驟。
4.支原體試劑相關FAQ
1.如何檢測新鮮的培養(yǎng)基和血清是否有支原體污染？
答：把新鮮的培養(yǎng)基或是血清取一定量放在24孔板，于CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)4d以上（樣品），吸取一定的液體進行檢測。如果樣品的顏色變成天藍色或者出現(xiàn)PCR擴增條帶，則證明含有支原體污染。。
2.一步法檢測支原體試劑盒中加入的UDG酶，會影響實驗結果嗎？比如抑制等溫擴增反應，或者導致實驗結果假陽性等等。
答：加入的UDG酶在室溫下才起作用，而且UDG酶對溫度敏感、易于滅活，當進行63°C等溫擴增時，UDG酶因為溫度過高就會失活，不影響實驗結果。
3.支原體清除劑使用周期？
答：一般是1周，如果碰到比較難除盡的，可以適當延長時間至2周。或者按照1:500進行稀釋，但是對細胞的毒性會有所增加，具體要看細胞的耐受性。
4.支原體噴霧對于已經污染的組培苗，可以直接噴濕除菌？
答：不可以，只能用于細胞樣品。
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| 名稱 | 貨號 | 規(guī)格 | 價格（元） |
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MycAwayTM Plus-Color One-Step Mycoplasma Detection Kit 一步法快速支原體檢測試劑盒 | 40612ES25 | 25T | 1653.00 | |
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去除 | MycAwayTM Treatment (1000×) - Mycoplasma Elimination Reagent MycAwayTM 支原體去除試劑（1000×） | 40607ES03* | 1 mL | 467.00 |
40607ES08* | 5×1 mL | 1357.00 | ||
預防 | MycAwayTM Spray (Ready-to-use) 支原體噴霧劑（即用型） | 40605ES02 | 500 mL | 237.00 |
40605ES03 | 2×500 mL | 407.00 | ||
40605ES08 | 10×500 mL | 1617.00 | ||
MycAwayTM Prophylactic (2000×) - Mycoplasma Prevention Reagent MycAwayTM 支原體預防試劑（2000×） | 40608ES03* | 1 mL | 387.00 | |
40608ES08* | 5×1 mL | 1257.00 |
HB200819
