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一文Get螢光素酶報告基因檢測試劑盒選擇指南
自1990年螢光素酶生物傳感器技術(shù)誕生，時至今日，螢光素酶報告基因的檢測系統(tǒng)被廣泛應(yīng)用于細(xì)胞信號通路、siRNA/miRNA、免疫應(yīng)答、藥物篩選等研究。螢光素酶報告基因檢測系統(tǒng)中具有代表性的是螢火蟲螢光素酶報告基因和海腎螢光素酶報告基因，由于兩種酶底物和發(fā)光顏色的區(qū)別，且在動物體內(nèi)無內(nèi)源性表達(dá)，使其在單、雙報告實驗中得到廣泛應(yīng)用。
檢測原理
螢火蟲螢光素酶是一種胞內(nèi)蛋白，大小為61KDa。在氧氣、ATP和鎂離子同時存在的條件下，催化底物螢火蟲螢光素氧化，生成氧化螢光素，并發(fā)出黃綠色光，其*發(fā)光波長為560nm。
海腎螢光素酶也是一種胞內(nèi)蛋白，大小為36KDa。只需要氧氣就可以催化腔腸素，氧化生成高能產(chǎn)物coelenteramide，并發(fā)出藍(lán)光，其*發(fā)光波長為465nm。
檢測方法差異
對于螢光素酶的化學(xué)發(fā)光與檢測模式上存在以下差異：
• 化學(xué)發(fā)光根據(jù)發(fā)光的形式和種類分為閃光型（flash-type）和輝光型（glow-type）兩種類型；
• 在檢測方法上分為非均質(zhì)檢測與均質(zhì)檢測；
那么在螢光素酶檢測實驗中如何進(jìn)行報告基因檢測試劑的選擇呢？接下來讓我們一探究竟~
◎ 閃光型與輝光型差異
◎ 非均質(zhì)型與均質(zhì)型差異
• 非均質(zhì)型
優(yōu)勢：可留樣檢測（裂解液可保存用于后續(xù)檢測）；
劣勢：操作繁瑣。
• 均質(zhì)型
優(yōu)勢：操作簡單（裂解檢測僅需一步）；
劣勢：不可留樣檢測。
檢測方法選擇
好啦！以上說了這么多，相信大家已經(jīng)明確了自己的需求啦~
精品推薦
◎ 非均質(zhì)閃光型報告基因檢測（貨號：11401、11402）
• 產(chǎn)品特點
1. 裂解能力更強：能夠*裂解絕大部分種類細(xì)胞。
2. 信號更強：能夠精準(zhǔn)檢測弱啟動子的表達(dá)。
3. 靈敏度更高：可檢測低至10‐20摩爾螢光素酶分子。
4. 線性范圍更廣：線性檢測范圍超過酶濃度的8個數(shù)量級。
• 應(yīng)用方向
精準(zhǔn)測量轉(zhuǎn)錄調(diào)控，miRNA靶基因驗證，轉(zhuǎn)錄因子和啟動子研究等。
• 數(shù)據(jù)展示
圖1. Yeasen（貨號：11402）熒光強度與P品牌相當(dāng)，可替換進(jìn)口品牌。
◎ 均質(zhì)型輝光型報告基因檢測（貨號：11404、11405）
• 產(chǎn)品特點
1. 信號穩(wěn)定：半衰期長（達(dá)2h），非常適用于高通量檢測，再也不用擔(dān)心螢光信號淬滅的問題。
2. 操作簡便：只需要加樣-讀值，即可完成實驗，擠出更多時間發(fā)paper。
3. 準(zhǔn)確度高：我有海腎螢光素酶的底物——腔腸素，可校正孔間細(xì)胞數(shù)量、轉(zhuǎn)染效率的誤差。
4. 兼容性好：可用于多種常用細(xì)胞培養(yǎng)液，如RPMI 1640、DMEM 、MEM-α、F12、DMEM/F12等。
5. 無刺激性氣味：還你一個清新愉快的實驗室環(huán)境。
• 應(yīng)用方向
Fc effector檢測系統(tǒng)，免疫檢查點檢測系統(tǒng)( immune checkpoint assays)，細(xì)胞因子、生長因子檢測和抗體內(nèi)化研究的檢測系統(tǒng)等。
• 數(shù)據(jù)展示
圖2. Yeasen（貨號：11405）熒光強度和穩(wěn)定性與P進(jìn)口品牌相當(dāng)。
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