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（單/多）定點(diǎn)突變隨心變
—想變哪里變哪里
定點(diǎn)突變技術(shù)是利用PCR等技術(shù)定向改變基因的特定堿基序列，是研究基因功能和蛋白功能的一種非常有用的手段。通過該技術(shù)，可迅速，高效提高DNA所表達(dá)的目的蛋白的性狀及表征，從而來闡明目的基因的調(diào)控機(jī)理，以及下游實(shí)驗(yàn)中的蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)與功能的關(guān)系。
翌圣生物推出的全新定點(diǎn)突變試劑盒基于Hieff Clone® 快速克隆技術(shù)的定點(diǎn)突變系統(tǒng)，目標(biāo)質(zhì)粒擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)DpnI消化、Hieff Clone®重組環(huán)化后直接進(jìn)行轉(zhuǎn)化即可完成定點(diǎn)突變。高效快速的實(shí)現(xiàn)直接對目標(biāo)質(zhì)粒中的靶位點(diǎn)進(jìn)行單點(diǎn)突變，多點(diǎn)突變，以及插入或缺失等。
產(chǎn)品優(yōu)勢
? 應(yīng)用范圍廣：可進(jìn)行單點(diǎn)，多點(diǎn)突變
? 擴(kuò)增性能*：超高保真酶可擴(kuò)增長度小于20kb的任何質(zhì)粒
? 高效DpnI酶：可充分有效降解未突變的質(zhì)粒模板
操作流程
? 引物設(shè)計(jì)與目標(biāo)質(zhì)粒擴(kuò)增
反向PCR引物中需引入同源臂和突變位點(diǎn)。
? DpnI 消化質(zhì)粒模板
質(zhì)粒模板來源于大腸桿菌，為dam甲基化修飾，對DpnI敏感而被切碎。反向PCR合成的帶突變位點(diǎn)的線性化質(zhì)粒因沒有甲基化而不被切開。
? 重組反應(yīng)
同源臂在重組酶的作用下進(jìn)行重組。
圖1. 進(jìn)行單堿基（或多堿基）定點(diǎn)突變實(shí)驗(yàn)流程
部分發(fā)表文獻(xiàn)
[1]. Jiang, Y., et al., Plants transfer lipids to sustain colonization by mutualistic mycorrhizal and parasitic fungi[J]. Science, 2017.（IF37.205）
[2]. Liu C X, Li X, Nan F, et al. Structure and degradation of circular RNAs regulate PKR activation in innate immunity[J]. Cell, 2019.（IF31.398）
[3]. Xing, Y.H., et al., SLERT Regulates DDX21 Rings Associated with Pol I Transcription[J]. Cell, 2017. 169(4): p. 664-678.e16. （IF31.398）
[4]. Wang Y, Hu SB, et al. Genome-wide screening of NEAT1 regulators reveals cross-regulation between paraspeckles and mitochondria[J]. Nat Cell Biol. 2018 Oct;20(10):1145-1158.（IF 20.46）
[5]. Li X., et al., Coordinated circRNA Biogenesis and Function with NF90/NF110 in Viral Infection[J]. Mol Cell. 2017 Jul 20;67(2):214-227.e7.（IF14.548）
[6]. Yao R W, Xu G, Wang Y, et al. Nascent Pre-rRNA Sorting via Phase Separation Drives the Assembly of Dense Fibrillar Components in the Human Nucleolus[J]. Molecular cell, 2019.（IF14.548）
FAQ
Q1. 請問單點(diǎn)突變/多點(diǎn)突變是否都是每個(gè)位點(diǎn)設(shè)計(jì)一對引物？是否都包括堿基/氨基酸突變，堿基插入和缺失？堿基插入/缺失的最大長度是多少?是否可以進(jìn)行連續(xù)氨基酸的突變，氨基酸的數(shù)量限制是多少？
A1：單點(diǎn)突變/多點(diǎn)突變是每個(gè)位點(diǎn)設(shè)計(jì)一對引物；正反向引物可以包括堿基/氨基酸突變，堿基插入和缺失，也可以將這些放在一條引物上；堿基插入/缺失的最大長度沒有限制，可為任何長度；可以進(jìn)行連續(xù)氨基酸的突變，無特別數(shù)量限制。
Q2. 引物設(shè)計(jì)的原則是什么？有無引物設(shè)計(jì)軟件，若沒有，推薦幾個(gè)好用的引物設(shè)計(jì)軟件。
A2：引物設(shè)計(jì)基本原則是使擴(kuò)增產(chǎn)物末端有同源序列即可。無*設(shè)計(jì)軟件，推薦軟件Primer5，Vector NTI。
Q3. 本試劑盒可以進(jìn)行多點(diǎn)突變，能夠同時(shí)進(jìn)行幾個(gè)位點(diǎn)的突變? 突變效率如何?進(jìn)行單點(diǎn)突變的突變效率是多少？
A3：最高同時(shí)突變6個(gè)獨(dú)立位點(diǎn)（每個(gè)位點(diǎn)之間相距超過100bp）。突變效率非常高（單次反應(yīng)500多個(gè)克隆，陽性率超過95%）。
Q4. 該kit不含有感受態(tài)細(xì)胞，推薦的感受態(tài)細(xì)胞是哪些？
A4：Top十、DH5α、JM109等常規(guī)感受態(tài)。
訂購信息
應(yīng)用 | 產(chǎn)品名稱 | 產(chǎn)品貨號 | 規(guī)格 |
單堿基、不連續(xù)雙堿基 | Hieff MutTM Site-Directed Mutagenesis Kit 定點(diǎn)突變試劑盒 | 11003ES10 | 10 T |
三至五個(gè)不連續(xù)位點(diǎn) （相距超過50bp） | Hieff MutTM Site-Directed Mutagenesis Kit 定點(diǎn)突變試劑盒 | 11004ES10 | 10 T |
相關(guān)產(chǎn)品
產(chǎn)品名稱 | 產(chǎn)品貨號 | 規(guī)格 |
DH5α Chemically Competent Cell DH5α化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞 | 11802ES80 | 10×100 μL |
11802ES92 | 100×100 μL | |
TOP十 Chemically Competent Cell Top十化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞 | 11801ES80 | 10×100 μL |
11801ES92 | 100×100 μL | |
BL21 (DE3) Chemically Competent Cell BL21 (DE3)化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞 | 11804ES80 | 10×100 μL |
Ampicillin, Sodium Salt 氨芐青霉素鈉 | 60203ES10 | 10 g |
60203ES60 | 100 g | |
Chloramphenicol, USP Grade 氯霉素，USP級 | 60205ES08 | 5 g |
60205ES25 | 25 g | |
60205ES60 | 100 g | |
Kanamycin Sulfate 硫酸卡那霉素 | 60206ES10 | 10 g |
60206ES60 | 100 g | |
Hieff Canace® Gold High-Fidelity DNA Polymerase 高保真DNA聚合酶 | 10148ES10 | 10 U |
10148ES60 | 100 U | |
10148ES76 | 500 U | |
10148ES80 | 1000 U | |
2 × Hieff Canace® Gold PCR Master Mix 高保真酶預(yù)混液 | 10149ES01 | 100 μL |
10149ES03 | 1 mL | |
10149ES08 | 5×1 mL | |
2 × Hieff® Robust PCR Master Mix（With Dye) | 10106ES03 | 1 mL |
10106ES08 | 5×1 mL | |
2×Hieff® PCR Master Mix (With Dye) | 10102ES03* | 1 ml |
10102ES08* | 5×1 ml | |
YeaRed Nucleic Acid Gel Stain (10,000× in Water) YeaRed 核酸染料（10,000× 水溶液） | 10202ES76 | 500 μL |
Agarose瓊脂糖 | 10208ES60 | 100 g |
GoldBand 1kb DNA ladder | 10510ES60* | 100 T |
10510ES80* | 10*100 T |
