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利用RNA體外合成（IVT）技術(shù)制備的mRNA疫苗在傳染病的防治上產(chǎn)生了巨大的影響，無(wú)論是其開(kāi)發(fā)生產(chǎn)周期以及疫苗的安全、高效性都明顯優(yōu)于傳統(tǒng)疫苗，因此具有極大的發(fā)展?jié)摿?/span>。
▲ 圖1.疫苗接種圖（攝圖網(wǎng)）
mRNA疫苗主要是體外合成RNA，是以DNA為模板通過(guò)體外轉(zhuǎn)錄得到，常用的是以線性化質(zhì)粒DNA或PCR擴(kuò)增產(chǎn)物為模板利用RNA聚合酶在體外轉(zhuǎn)錄合成再進(jìn)行修飾獲得。是利用含有T7啟動(dòng)子（TAATACGACTCACTATAGGG）或SP6啟動(dòng)子（ATTTAGGTGACACTATAG）序列的DNA為模板在含有T7或SP6 RNA聚合酶的條件下，以NTP為底物合成與模板DNA中一條鏈互補(bǔ)的mRNA，簡(jiǎn)單快速獲得大量的mRNA分子，通過(guò)在5’端加上帽子結(jié)構(gòu)和3’端加ployA尾加強(qiáng)mRNA的穩(wěn)定性。
▲ 圖2.體外轉(zhuǎn)錄（IVT）mRNA生產(chǎn)和裝配過(guò)程[1]
體外合成RNA應(yīng)用方向
體外合成RNA常見(jiàn)問(wèn)題和困惑
T7Kit測(cè)試數(shù)據(jù)
<不同長(zhǎng)度rna轉(zhuǎn)錄>
產(chǎn)品訂購(gòu)
產(chǎn)品名稱 | 貨號(hào) | 規(guī)格 |
Hifair®T7 High Yield RNA Synthesis Kit | 10623ES50/60 | 50/100 T |
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UCF.ME®DNase I ,RNase-free,GMP-grade | 10611ES76/84 | 500/2000 U |
UCF.ME®Murine RNase inhibitor GMP-grade | 10621ES10/20 | 10/20 KU |
UCF.ME®Pyrophosphatase,Inorganic GMP-grade | 10620ES10/60 | 10/100 U |
T7 RNA polymerase (1 KU/μL) | 10617ES92/97 | 10/50 KU |
T7 RNA polymerase (50 U/μL) | 10618ES90/96 | 5000/25000 U |
S-adenosylmethionine (SAM) | 10619ES02 | 0.5 mL |
GTP Solution(100mM) | 10132ES03 | 1 mL |
NTP Set Solution(ATP,CTP,UTP,GTP,100 mM each） | 10133ES03 | 1 Set (4 vial) |
參考文獻(xiàn)
