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一文Get原代細胞培養(yǎng)秘笈
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概述
▲ 圖1.原代組織細胞培養(yǎng)（源于網(wǎng)絡(luò)）
特性 | 原代細胞 | 細胞系 |
增殖能力 | 較弱 | 強 |
繁殖代數(shù) | 一般只能傳10代以內(nèi) | 無限增殖，50代左右 |
遺傳物質(zhì)完整性 | 遺傳物質(zhì)未改變 | 遺傳物質(zhì)發(fā)生改變 |
生物特性 | 臨床樣本 | 偏離臨床樣本 |
培養(yǎng)容易程度 | 比較復雜 | 簡單，易操作 |
在原代細胞培養(yǎng)的過程中，支原體污染發(fā)生的頻率很高，但常常為人所忽視，原因在于支原體污染的培養(yǎng)液可能不發(fā)生混濁的現(xiàn)象，這就導致了很難被肉眼所觀察到。
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原代細胞培養(yǎng)如何取材
▍ 皮膚和黏膜
主要取皮片，面積一般2-4cm2
? 無菌環(huán)境；
? 熟悉所需組織的類型和部位；
? 要避開破潰、壞死、液化部分，以防污染、盡量去除混雜的結(jié)締組織。
▍ 血液細胞
? 取材時應(yīng)注意抗凝。
▍ 骨髓、羊水、胸/腹水細胞
▍ 動物組織取材-鼠胚組織
? 將其浸泡在含75%酒精的燒杯中，5分鐘后取出動物；
? 在消毒過得木板上可用無菌的圖釘固定四肢，切開皮膚；
? 用無菌操作法解剖取胚。
▍ 動物組織取材-幼鼠胚腎/肺
? 腹部朝上固定在木板上，先切開游離毛皮并拉開至兩側(cè)；
? 采用無菌法打開胸腔取肺，或從背部打開腹腔取腎。
▍ 雞、鴨、鳥類胚胎組織
? 將胚蛋至于蛋架上，先將溫水清洗蛋殼，再用75%酒精棉球擦干，經(jīng)碘酒、75%酒精消毒后，在無菌條件下采用無菌法用剪刀或鑷子打開氣室，沿氣室邊緣去除蛋殼；
? 用眼科鑷子撕去殼膜，暴露出雞胚；
? 用彎頭鑷挑起胚頭，取出胚胎，放入無菌平皿中，解剖取材。
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常見問題
Q1：細胞量太少，長不起來怎么辦？
有幾種辦法，如對沒消化完的組織塊反復消化，盡量多收集一些細胞；并且盡量傳代到小皿里，如6孔板都可以。若是細胞仍太少，應(yīng)耐心等待，盡量不要傳代，只換液。
Q2：皮膚組織作為正常組織，與腫瘤組織分離主要區(qū)別在哪里？
首先，皮膚組織需要用中性分離酶dispaseII將表皮分離出來；其次，在消化時，用的是胰酶，而非膠原酶，并且胰酶的濃度用的是0.05%，而不是0.25%。
Q3：細胞難以貼壁怎么辦？
為了盡快促進細胞貼壁，可以提前1h將0.5%的明膠鋪于培養(yǎng)板。另外，如果細胞被污染了肯定不貼壁，建議做支原體檢測，結(jié)果如果是陽性，立即加入支原體去除試劑，挽救您的細胞，咱們小翌可以為你的細胞提供護航！
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精品推薦
▍ Yeasen 40612 只要一步法即可檢測支原體的存在
▲ 圖2.一步法支原體檢測操作流程
▲ 圖3.Yeasen MycAwayTM 支原體去除效果的展示
▍ 支原體去除試劑的特點
? 穩(wěn)定性強：-20℃試劑能較長時間保存并保持高效用；
? 操作簡單：只需將產(chǎn)品添加至支原體污染的培養(yǎng)基中孵育即可；
? 起效快：最快3天即可見效；
▲ 圖4.支原體去除試劑細胞毒性檢測圖示
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產(chǎn)品信息
類別 | 產(chǎn)品 | 貨號 | 規(guī)格 |
支原體檢測 | GMyc-PCR Mycoplasma Test Kit GMyc-PCR支原體檢測試劑盒 | 40601ES10/20 | 10/20 assays |
MycAway™ Plus-Color One-Step Mycoplasma Detection Kit 一步法快速支原體檢測試劑盒 | 40612ES25/60 | 25/100T | |
支原體 | MycAway™ Spray (Ready-to-use) 支原體噴霧劑（即用型） | 40605ES02/03 | 1 / 2×500 mL |
MycAway™ Treatment (1000×)-Mycoplasma Elimination Reagent MycAway™ 支原體去除試劑（1000×） | 40607ES03/08 | 1/ 5×1mL | |
支原體 | MycAway™ Prophylactic (2000×)-Mycoplasma Prevention MycAway™ 支原體預(yù)防試劑（2000×） | 40608ES03/08 | 1/5×1 mL |
MycGuard™-1 Solution (100×), for Disinfecting Water Bath of CO2 Incubator 細胞培養(yǎng)箱水盤1號消毒衛(wèi)士 | 40609ES60 | 100 mL | |
MycGuard™-2 Solution (500×), for Disinfecting Ordinary Water Bath 水浴鍋2號消毒衛(wèi)士 | 40610ES60 | 100 mL |
