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特性	原代細(xì)胞	細(xì)胞系
增殖能力	較弱	強(qiáng)
繁殖代數(shù)	一般只能傳10代以內(nèi)	無(wú)限增殖，50代左右
遺傳物質(zhì)完整性	遺傳物質(zhì)未改變	遺傳物質(zhì)發(fā)生改變
生物特性	臨床樣本	偏離臨床樣本
培養(yǎng)容易程度	比較復(fù)雜	簡(jiǎn)單，易操作

原代細(xì)胞培養(yǎng)：由于原代細(xì)胞生長(zhǎng)緩慢，繁殖一定的代數(shù)停止生長(zhǎng)（一般10代以內(nèi)）。所以一般認(rèn)為：培養(yǎng)的原代的第1和傳代到第10代以內(nèi)的細(xì)胞統(tǒng)稱為原代細(xì)胞培養(yǎng)。

在原代細(xì)胞培養(yǎng)的過(guò)程中，支原體污染發(fā)生的頻率很高，但常常為人所忽視，原因在于支原體污染的培養(yǎng)液可能不發(fā)生混濁的現(xiàn)象，這就導(dǎo)致了很難被肉眼所觀察到。

原代細(xì)胞培養(yǎng)如何取材

▍ 皮膚和黏膜

主要取皮片，面積一般2-4cm²

▍ 內(nèi)臟和實(shí)體瘤

? 無(wú)菌環(huán)境；

? 熟悉所需組織的類型和部位；

? 要避開(kāi)破潰、壞死、液化部分，以防污染、盡量去除混雜的結(jié)締組織。

▍ 血液細(xì)胞

? 一般多抽取靜脈外周血、或從淋巴組織中分離細(xì)胞；

? 取材時(shí)應(yīng)注意抗凝。

▍ 骨髓、羊水、胸/腹水細(xì)胞

嚴(yán)格無(wú)菌、注意抗凝、還要盡快分離培養(yǎng)、離心后，用無(wú)鈣、鎂PBS洗兩次，再用培養(yǎng)液洗一次后即可培養(yǎng)，不宜低溫存放。

▍ 動(dòng)物組織取材-鼠胚組織

? 用引頸或氣管窒息致死法處死孕期合適的動(dòng)物；

? 將其浸泡在含75%酒精的燒杯中，5分鐘后取出動(dòng)物；

? 在消毒過(guò)得木板上可用無(wú)菌的圖釘固定四肢，切開(kāi)皮膚；

? 用無(wú)菌操作法解剖取胚。

▍ 動(dòng)物組織取材-幼鼠胚腎/肺

? 幼鼠采用上述方法處死消毒后；

? 腹部朝上固定在木板上，先切開(kāi)游離毛皮并拉開(kāi)至兩側(cè)；

? 采用無(wú)菌法打開(kāi)胸腔取肺，或從背部打開(kāi)腹腔取腎。

▍ 雞、鴨、鳥(niǎo)類胚胎組織

? 取孵化至適當(dāng)胚齡（9-12天）的胚蛋，用照蛋燈在暗處燈檢，若有豐富血管、胚體有運(yùn)動(dòng)的胚蛋、說(shuō)明胚體發(fā)育良好，并用有色筆劃出氣室和胚體位置；

? 將胚蛋至于蛋架上，先將溫水清洗蛋殼，再用75%酒精棉球擦干，經(jīng)碘酒、75%酒精消毒后，在無(wú)菌條件下采用無(wú)菌法用剪刀或鑷子打開(kāi)氣室，沿氣室邊緣去除蛋殼；

? 用眼科鑷子撕去殼膜，暴露出雞胚；

? 用彎頭鑷挑起胚頭，取出胚胎，放入無(wú)菌平皿中，解剖取材。

常見(jiàn)問(wèn)題

Q1：細(xì)胞量太少，長(zhǎng)不起來(lái)怎么辦？

有幾種辦法，如對(duì)沒(méi)消化完的組織塊反復(fù)消化，盡量多收集一些細(xì)胞；并且盡量傳代到小皿里，如6孔板都可以。若是細(xì)胞仍太少，應(yīng)耐心等待，盡量不要傳代，只換液。

Q2：皮膚組織作為正常組織，與腫瘤組織分離主要區(qū)別在哪里？

首先，皮膚組織需要用中性分離酶dispaseII將表皮分離出來(lái)；其次，在消化時(shí)，用的是胰酶，而非膠原酶，并且胰酶的濃度用的是0.05%，而不是0.25%。

Q3：細(xì)胞難以貼壁怎么辦？

為了盡快促進(jìn)細(xì)胞貼壁，可以提前1h將0.5%的明膠鋪于培養(yǎng)板。另外，如果細(xì)胞被污染了肯定不貼壁，建議做支原體檢測(cè)，結(jié)果如果是陽(yáng)性，立即加入支原體去除試劑，挽救您的細(xì)胞，咱們小翌可以為你的細(xì)胞提供護(hù)航！

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▲ 圖2.一步法支原體檢測(cè)操作流程

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去除前

去除后

▲ 圖3.Yeasen MycAway^TM 支原體去除效果的展示

▍ 支原體去除試劑的特點(diǎn)

? 毒性低：對(duì)細(xì)胞毒性小，不影響后續(xù)細(xì)胞實(shí)驗(yàn)，如細(xì)胞活力檢測(cè)和細(xì)胞轉(zhuǎn)染等；

? 穩(wěn)定性強(qiáng)：-20℃試劑能較長(zhǎng)時(shí)間保存并保持高效用；

? 操作簡(jiǎn)單：只需將產(chǎn)品添加至支原體污染的培養(yǎng)基中孵育即可；

? 起效快：最快3天即可見(jiàn)效；

? 去除范圍廣：能去除實(shí)驗(yàn)室絕大多數(shù)支原體類型。

▲ 圖4.支原體去除試劑細(xì)胞毒性檢測(cè)圖示

產(chǎn)品信息

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