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太實(shí)用了！轉(zhuǎn)染試劑常見問題大全，你想要的答案這里都有
Hieff Trans™ Liposomal Transfection Reagent 脂質(zhì)體核酸轉(zhuǎn)染試劑
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血清的存在會影響脂質(zhì)體的形成，建議配制核酸轉(zhuǎn)染試劑復(fù)合物時(shí)采用無血清培養(yǎng)基（一般推薦MEM 培養(yǎng)基）。
轉(zhuǎn)染試劑能否凍存？
不能。本試劑一定要4 ℃保存，要注意避免反復(fù)多次長時(shí)間開蓋，長時(shí)間開蓋會導(dǎo)致脂質(zhì)體氧化而影響轉(zhuǎn)染效率。
使用Hieff Trans™脂質(zhì)體核酸轉(zhuǎn)染試劑需要注意什么？
1）細(xì)胞鋪板密度較高，以90%-95%為佳；
2）使用高純度的DNA有助于獲得較高的轉(zhuǎn)染效率；
3）制備轉(zhuǎn)染復(fù)合物時(shí)要求用無血清培養(yǎng)基稀釋DNA和轉(zhuǎn)染試劑；
4）轉(zhuǎn)染的時(shí)候培養(yǎng)基中不能添加抗生素；
5）試劑應(yīng)該在4度保存，要注意避免多次反復(fù)長時(shí)間開蓋；
6）初次使用應(yīng)優(yōu)化DNA濃度和陽離子脂質(zhì)體試劑量以得到最大的轉(zhuǎn)染效率。DNA 和轉(zhuǎn)染試劑的比例，通常推薦是1:2-1:3。
不需要。脂質(zhì)體復(fù)合物可以穩(wěn)定存在6個(gè)小時(shí)。如果在進(jìn)行轉(zhuǎn)染前沒有進(jìn)行細(xì)胞換液，為了保證細(xì)胞正常生長所需的營養(yǎng)，需要在4～6小時(shí)后換用新的培養(yǎng)基。但如果轉(zhuǎn)染之前已進(jìn)行過換液則在脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染后不需要進(jìn)行再次換液。
若想提高轉(zhuǎn)染效率，應(yīng)該注意什么？
1）轉(zhuǎn)染時(shí)細(xì)胞的密度，90%-95%。
2）轉(zhuǎn)染時(shí)，核酸和脂質(zhì)體稀釋液要用MEM無血清培養(yǎng)基。
3）轉(zhuǎn)染后4-6h可選擇換液。
可否進(jìn)行DNA和siRNA的共轉(zhuǎn)染？效果如何？
DNA和siRNA的共轉(zhuǎn)染時(shí)候，siRNA轉(zhuǎn)染效率差。
轉(zhuǎn)染試劑可否進(jìn)行慢病毒包裝的轉(zhuǎn)染呢？
慢病毒包裝是可以的，但是在進(jìn)行慢病毒包裝的效率不一定和轉(zhuǎn)染的效率有關(guān)，同時(shí)還跟包裝質(zhì)粒的選擇和質(zhì)粒間的比例有關(guān)系。
懸浮細(xì)胞轉(zhuǎn)染是否可以用Hieff Trans™脂質(zhì)體核酸轉(zhuǎn)染試劑？
Hieff Trans™脂質(zhì)體核酸轉(zhuǎn)染試劑可以用于懸浮細(xì)胞轉(zhuǎn)染，具體操作可見Protocol。另外，我們還推出了專門用于懸浮細(xì)胞的轉(zhuǎn)染試劑（Cat No. 40805, 懸浮細(xì)胞專用脂質(zhì)體核酸轉(zhuǎn)染試劑）。
Hieff Trans™ siRNA/miRNA體外轉(zhuǎn)染試劑
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DNA轉(zhuǎn)染和siRNA轉(zhuǎn)染有什么不同？
1）siRNA由于只有二十幾個(gè)堿基對，相比DNA幾千上萬對堿基，小了許多。
2）用于轉(zhuǎn)染DNA的轉(zhuǎn)染試劑和方法并不適用于轉(zhuǎn)染siRNA。
3）siRNA轉(zhuǎn)染比DNA轉(zhuǎn)染對轉(zhuǎn)染試劑細(xì)胞毒性的要求嚴(yán)格。
轉(zhuǎn)染試劑轉(zhuǎn)染后需要換液嗎？
對于換液可以區(qū)分兩種情況：
1）轉(zhuǎn)染之前如果沒有換液應(yīng)在轉(zhuǎn)染6 小時(shí)左右后換液，以保證細(xì)胞生長所需營養(yǎng)。
2）如果轉(zhuǎn)染之前如果有換液，可以按照平時(shí)等到培養(yǎng)基出現(xiàn)營養(yǎng)不足時(shí)換液。
PEI轉(zhuǎn)染試劑轉(zhuǎn)siRNA和質(zhì)粒的效率如何？
不可凍存，因?yàn)檗D(zhuǎn)染試劑是一種PEI陽離子轉(zhuǎn)染試劑，低溫下凍存，會破壞PEI轉(zhuǎn)染試劑的活性，因此是4 度儲存，保持的轉(zhuǎn)染效能。
若想提高轉(zhuǎn)染效率，應(yīng)該怎么操作？
1）轉(zhuǎn)染時(shí)細(xì)胞的密度，90%-95%。
2）轉(zhuǎn)染時(shí)，siRNA和脂質(zhì)體稀釋液要用Opti-MEM 無血清培養(yǎng)基。
3）轉(zhuǎn)染后4-6h 可選擇換液。
Polyplus品牌轉(zhuǎn)染試劑
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與許多其他轉(zhuǎn)染試劑相反，在有血清的環(huán)境下，jetPRIME的效率更高。因此，轉(zhuǎn)染復(fù)合物可以直接加到含血清培養(yǎng)基的細(xì)胞中。
DNA/jetPRIME的比值是什么意思？
該比值指的是每微克DNA相對應(yīng)的jetPRIME微升數(shù)。例如，DNA/jetPRIME比值為1: 2意思是每微克DNA加2微升jetPRIME。
在jetPRIME轉(zhuǎn)染的過程中可以使用抗生素嗎？
jetPRIME的轉(zhuǎn)染效率不受抗生索的影響。jetPRIME的常規(guī)批次質(zhì)檢都是在含血清和抗生索的培養(yǎng)基中進(jìn)行的。
優(yōu)化的第1步是將DNA的量增加1.5倍。我們也推薦增加DNA/jetPRIME比值(每μg的DNA，2-3μl jetPRIME)。另一種方法是緩慢離心培養(yǎng)板(5 min at 210g)。
是否可以不在意細(xì)胞密度？
細(xì)胞密度和傳代次數(shù)將影響轉(zhuǎn)染效率。我們推薦細(xì)胞融合度在60%至80%。對于使用jetPRIME的轉(zhuǎn)染優(yōu)化條件，請參見jetPRIME轉(zhuǎn)染說明書中的Table1，根據(jù)不同培養(yǎng)板推薦的細(xì)胞數(shù)。此外，如果細(xì)胞已經(jīng)培養(yǎng)很長時(shí)間(超過20代)，我們建議從液氮中取1管新細(xì)胞，重新進(jìn)行培養(yǎng)。
對于所有細(xì)胞可以使用相同的條件嗎？
已優(yōu)化的jetPRIME操作步驟可用于多種細(xì)胞，例如A549, MCF7, U-2 OS, NIH-3T3, B16-F10, Caco-2等。但是，我們也提供了針對具體細(xì)胞的特異性操作步驟，以便獲得更高的轉(zhuǎn)染效率。這些具體條件可以參見Polyplus cell transfection database。
當(dāng)我想在一個(gè)實(shí)驗(yàn)中進(jìn)行多個(gè)質(zhì)粒的共轉(zhuǎn)染時(shí)，我該如何操作？
對于多個(gè)質(zhì)粒的共轉(zhuǎn)染，每孔DNA的總量不應(yīng)超過說明書中標(biāo)明的DNA量。每個(gè)質(zhì)粒的比例根據(jù)質(zhì)粒的大小、結(jié)構(gòu)和期望的每個(gè)質(zhì)粒的表達(dá)水平來應(yīng)用。在每孔中，每個(gè)質(zhì)粒至少應(yīng)占總DNA量的10%。
