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關(guān)注！十月mRNA最新研究進(jìn)展
冠疫情的持續(xù)凸顯了疫苗的重要性，mRNA以*的保護(hù)率成為所有冠種類中熱度最高的C位選擇。mRNA疫苗的應(yīng)用場景不限于傳染病預(yù)防，在治療腫瘤、免疫疾病等領(lǐng)域都有令人期待的發(fā)展空間。mRNA的核心競爭力主要來源于序列設(shè)計(jì)和遞送系統(tǒng)，關(guān)于mRNA疫苗的最新研究技術(shù)，十月份又有不少新的進(jìn)展。
研究進(jìn)展
圖1. 論文截圖（源于網(wǎng)絡(luò)）
10月31日，哈佛大學(xué)威斯生物啟發(fā)工程研究所的研究員埃文·趙(Evan Zhao)和麻省理工學(xué)院(MIT)的博士后、威斯研究所的技術(shù)研究員安吉洛·毛(Angelo Mao)在Nature Biotechnology發(fā)表文獻(xiàn)[3]，研究人員找到了一種只在“讀取"細(xì)胞內(nèi)特定RNA序列后才能生產(chǎn)轉(zhuǎn)基因基因的方法，從而開發(fā)出一種可以微調(diào)基因療法的技術(shù)，應(yīng)用范圍從再生醫(yī)學(xué)到癌癥治療。
產(chǎn)業(yè)化進(jìn)展
mRNA疫苗開發(fā)流程包括病原體識別、測序、mRNA體外合成、修飾、純化等操作。mRNA疫苗的研究制備需要多種原料來保證疫苗的成功開發(fā)，翌圣生物作為國內(nèi)分子酶產(chǎn)業(yè)創(chuàng)新，通過*分子酶雙向技術(shù)平臺、大規(guī)模蛋白發(fā)酵純化技術(shù)平臺，目前已成功開發(fā)各類分子酶相關(guān)原料的產(chǎn)品。翌圣生物提供mRNA疫苗研究所需GMP級別原料并獲得廣大用戶的認(rèn)可。
mRNA體外轉(zhuǎn)錄
mRNA疫苗的生產(chǎn)主要是通過體外轉(zhuǎn)錄（IVT）其過程主要是以DNA為模板，加上對應(yīng)的底物和緩沖液通過體外轉(zhuǎn)錄得到。翌圣生物提供GMP級UCF.ME® T7 RNA Polymerase 和高性價(jià)比的Hifair® T7 High Yield RNA Synthesis Kit高產(chǎn)量體外合成試劑盒，包含一整套RNA合成所需試劑。
產(chǎn)品特點(diǎn)
• 高產(chǎn)量：2 h內(nèi)產(chǎn)生200-250 µg，單次放大反應(yīng)可產(chǎn)生毫克級RNA
• 高靈活性：可獲得無標(biāo)記、標(biāo)記以及加帽的RNA
• 通用性強(qiáng)：對于不同長度模板均表現(xiàn)出強(qiáng)大RNA合成能力
• 品質(zhì)穩(wěn)定：安捷倫2100測試純度高、批間差異小
測試數(shù)據(jù)
短片段：2-4h可有效轉(zhuǎn)錄
長片段：1-2h可有效轉(zhuǎn)錄
▲ 不同目的片段的轉(zhuǎn)錄產(chǎn)量
▲ 不同目的片段的轉(zhuǎn)錄品質(zhì)測定
Pyrophosphatase,Inorganic
UCF.ME® Pyrophosphatase, Inorganic GMP-grade是大腸桿菌重組來源，嚴(yán)格按照GMP工藝要求生產(chǎn)，無病原體殘留和宿主殘留，避免雜質(zhì)引起的不良反應(yīng)、過敏反應(yīng)，確保產(chǎn)品安全性。
未加入無機(jī)焦磷酸酶組
IPPA組
▲ 投入200ng模板量，RNA純化后稀釋20倍檢測產(chǎn)量，與空白相比，RNA產(chǎn)量可大幅度提高
mRNA加帽修飾
• GMP級:嚴(yán)格執(zhí)行ISO13485質(zhì)量管理規(guī)范，原料可追溯、可復(fù)制
• 無殘留:無核酸酶、切口酶殘留，內(nèi)毒素含量低
• 純度高:純度 ≥95%（SDS-PAGE）
• 酶活力高:微量即可加帽
從上至下依次為：裸露RNA、Cap0 RNA、Cap1 RNA
調(diào)整酶量以及SAM的使用量，加帽可達(dá)100%
mRNA殘留去除
• GMP級:嚴(yán)格執(zhí)行ISO13485質(zhì)量管理規(guī)范，原料可追溯、可復(fù)制
• 高純度:純度≥95%（SDS-PAGE）
• 無殘留:無RNase，內(nèi)毒素含量低
C為不加DNaseI 的對照組，進(jìn)行轉(zhuǎn)錄模板去除實(shí)驗(yàn)，Yeasen能很好的去除RNA中的DNA殘留
用于RNA建庫，與進(jìn)口品牌T相比，性能相當(dāng)
mRNA純化
•高效率:mRNA純化在45min內(nèi)完成
•高純度:Oligo(dT) 磁珠特異性吸附mRNA
•靈活:兼容手動和自動化操作平臺
•可靠:獲得的mRNA適用NGS、體外翻譯、RT-PCR和cDNA合成
▲ mRNA Isolation Kit純化不同RNA樣本中的mRNA 管家基因產(chǎn)量表征mRNA回收效果。rRNA相關(guān)基因產(chǎn)量表征rRNA去除效果
相關(guān)產(chǎn)品
產(chǎn)品名稱 | 貨號 | 規(guī)格 |
UCF.ME® mRNA Vaccinia Capping Enzyme GMP-grade | 10614ES84/92 | 2000/10000U |
UCF.ME® mRNA Cap 2'-O-Methyltransferase GMP-grade | 10612ES84/92 | 2000/10000U |
UCF.ME® T7 RNA Polymerase GMP-grade（1 KU/μl） | 10613ES92/97 | 10/50KU |
UCF.ME® Murine RNase inhibitor GMP-grade | 10621ES10/20 | 10/20 KU |
UCF.ME® Pyrophosphatase,Inorganic GMP-grade | 10620ES10/60 | 10/100U |
UCF.ME® DNase I , RNase-free ，GMP-grade | 10611ES76/84 | 500/2000U |
Hifair® T7 High Yield RNA Synthesis Kit | 10623ES50/60 | 50/100T |
S-adenosylmethionine (SAM) | 10619ES02 | 0.5ml |
GTP Solution(100mM) | 10132ES03 | 1ml |
NTP Set Solution(ATP, CTP, UTP, GTP, 100 mM each） | 10133ES03 | 1 Set (4 vial) |
參考文獻(xiàn)>>
[1] Lokugamage MP, Vanover D, Beyersdorf J, et al. Optimization of lipid nanoparticles for the delivery of nebulized therapeutic mRNA to the lungs. Nature biomedical engineering 2021;5(9):1059-1068.
