• 檢測(cè)緩沖體系、溶液：可啟用全新批次的RNase-free試劑測(cè)試比對(duì)，也可檢測(cè)疑似污染溶液中的RNase。
• 檢測(cè)RNA樣品：RNase進(jìn)入RNA樣本可在多種情況下發(fā)生，如RNA分離時(shí)（少量RNase在RNA制備過程中引入），或日常取用時(shí)（會(huì)不可避免地需要重復(fù)開關(guān)樣品管并插入可能被污染的加樣槍頭）。
• 可用GAPDH、cyclophilin、或beta-actin等管家基因的探針，通過northern分析來評(píng)估poly(A) RNA樣品的完整性。
RNase的無處不在，使得實(shí)驗(yàn)過程中，難以保存RNA樣本的完整性。因此，可以從源頭入手，一方面要嚴(yán)格控制外源性RNase的污染，另一方面要最大限度地抑制內(nèi)源性的RNase。
常見的污染源及其控制方法：
外源性污染源：
體液、水與緩沖液等溶液，槍頭，離心管。
控制外源性RNase污染的方法：
操作人員全副武裝
在實(shí)驗(yàn)過程中戴手套可避免源自人手的RNase污染；觸摸皮膚、門把手及普通物體表面后更換手套；使用專業(yè)儀器與試劑
RNA操作專用的移液槍；使用RNase-free的槍頭和離心管；使用RNase-free的化合物與試劑；選擇實(shí)驗(yàn)操作環(huán)境
遠(yuǎn)離/遮蔽通風(fēng)孔或開放窗口，走動(dòng)較少的區(qū)域作為RNase-free區(qū)域；其他注意的點(diǎn)
在RNA提取和分析期間，不要進(jìn)行其他可能引起RNase 污染的實(shí)驗(yàn)。
內(nèi)源性污染源：
所有組織樣品均含有內(nèi)源性RNase。
抑制內(nèi)源性RNase活性的方法：
樣本保存
組織取樣后若不直接提取RNA，要及時(shí)用液氮迅速冷凍存于-80°C環(huán)境，并盡早進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，這樣可使RNA的降解達(dá)到最少。添加抑制劑
在細(xì)胞裂解液中加入RNase 抑制劑（RNase inhibitor），使破碎細(xì)胞與滅活RNase 同步進(jìn)行，最大限度地降低細(xì)胞破碎過程中所釋放的RNase 的活性。
RNase 抑制劑的類別較多，常用的RNase抑制劑有以下幾類：
RNasin能夠保護(hù)mRNA的完整，有利于提高轉(zhuǎn)錄及翻譯的效率，同時(shí)避免了使用有機(jī)化合物抑制劑可能帶來的影響。
RNasin是從人胎盤或大鼠肝中提取的一種特異的酸性糖蛋白。其分子量為51 kDa，等電點(diǎn)pH值為4.7。RNasin對(duì)RNase A、RNase B或RNase C抑制能力極強(qiáng)，可快速特異地與它們以非共價(jià)鍵結(jié)合形成1:1的復(fù)合物，從而抑制RNase的活性，防止RNA被其降解。但需注意，RNasin不能抑制RNase I、T1、T2、H、U1、U2和CL3的酶活性。
目前，RNasin主要用于cDNA合成，體外轉(zhuǎn)錄，體外翻譯，以及mRNA-protein復(fù)合物分離純化等過程中保護(hù)RNA不被降解；還可用于特定RNase活性的鑒定等。
翌圣生物提供高質(zhì)量鼠源RNase Inhibitor
翌圣生物科技（上海）股份有限公司（以下簡(jiǎn)稱“翌圣生物"）提供全面、高品質(zhì)、高性價(jià)比的分子酶原料。翌圣生物的鼠源RNase Inhibitor，可用于RT-PCR/RT-qPCR，解決體外轉(zhuǎn)錄中RNA降解問題，抑制RNA分離純化過程中RNase的活性。
產(chǎn)品特點(diǎn) ?
• 可以抑制RNase A、B和C
• 與 Taq 聚合酶、AMV 或 M-MLV反轉(zhuǎn)錄酶兼容
• 與人源RNase inhibitor相比，具有更高的抗氧化活性
• 適合于對(duì)高DTT敏感性實(shí)驗(yàn)(如RT-qPCR等)
活性定義 ?
抑制5 ng RNase A活性的50%所需要的酶量定義為1個(gè)活性單位(U)。RNase A活性通過水解Cyclic 2’,3’-CMP生成3’-CMP定量求得。
部分案例展示 ?
在相同實(shí)驗(yàn)條件下，以qPCR方法分別對(duì)翌圣和R*公司的鼠源RNase抑制劑（MRI）的抑制效果進(jìn)行檢測(cè)，其結(jié)果如下圖所示：
綜合以上結(jié)果，翌圣鼠源RNase抑制劑能有效抑制體系中的RNaseA，抑制效果優(yōu)于競(jìng)品。
翌圣生物持續(xù)致力于開發(fā)分子診斷酶原料，并為客戶提供相對(duì)應(yīng)的支持，努力為您的工作和公共衛(wèi)生事業(yè)做出貢獻(xiàn)。
原料類型 | 描述 | 產(chǎn)品名稱 | 貨號(hào) |
單酶原料 | 鼠源RNase抑制劑 | Murine RNase Inhibitor (40 U/µL) | 10603ES |
熱啟動(dòng)聚合酶 | Hieff UNICON® HotStart Direct Taq DNA Polymerase | 10717ES |
Taq酶單克隆抗體 | Hieff® anti-Taq DNA Polymerase Antibody | 31301ES |
Taq酶單克隆雙封閉抗體 | Hieff® Double-Block anti-Taq DNA Polymerase Antibody | 31303ES |
第五代耐熱逆轉(zhuǎn)錄酶 | Hifair® V Reverse Transcriptase | 11300ES |
熱敏UDG酶 | Uracil DNA Glycosylase (UDG), heat-labile | 10303ES |
Bst II DNA聚合酶 | Bst II DNA polymerase | 12908ES |
初級(jí)會(huì)員·13年
