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支原體污染整體解決方案
------支原體檢測、預(yù)防、去除，一步到位！
支原體
支原體（Mycoplasma）又稱霉形體，是目前發(fā)現(xiàn)的最小的原核生物，直徑大小0.1~0.3μm，能通過濾膜且呈高度多形性，有球形、桿形、絲狀、分支狀等多種形態(tài)。實驗室和生物制品工廠在細(xì)胞培養(yǎng)過程中易受到支原體污染，據(jù)文獻報道：支原體污染在儲存細(xì)胞系中發(fā)生率約為 15%-35%，在生物制藥行業(yè)中約為0.44%-6.70% [1]。
圖1：支原體的形態(tài)
支原體污染的影響
細(xì)菌和真菌污染相對較容易檢測、預(yù)防和去除，但支原體造成的污染卻很難察覺，即使生長密度高達(dá) 107-109CFU/ml，也很難有污染跡象（比如溶液渾濁、pH變化等）。支原體污染后能導(dǎo)致細(xì)胞產(chǎn)生多種變化（見圖2）。
圖2：受支原體污染后細(xì)胞出現(xiàn)的相關(guān)狀態(tài)的改變
支原體污染解決方案——Yeasen三位一體幫您解決細(xì)胞支原體污染問題
翌圣生物（YEASEN）經(jīng)過匠心開發(fā)并多次的實驗驗證，推出了清除支原體的試劑，包括：支原體檢測系列、支原體清除（培養(yǎng)箱、水浴鍋、超凈臺和細(xì)胞房）和支原體預(yù)防相關(guān)等。
圖3：yeasen支原體污染整體解決方案
一步法恒溫支原體檢測：
Yeasen一步法恒溫支原體檢測試劑采用等溫擴增技術(shù)，無需特殊儀器，1h就可以通過顏色判定檢測結(jié)果。檢測靈敏度是普通恒溫檢測的1000倍并添加了防污染組分，杜絕假陽性現(xiàn)象的發(fā)生。
圖4：一步法支原體檢測操作流程
PCR法支原體檢測：
Yeasen巢式PCR支原體檢測不同于普通的PCR檢測方法，將原有的1對引物提高至3對引物，針對支原體16s和23s保守區(qū)進行巢式PCR擴增，實現(xiàn)了準(zhǔn)確度和靈敏度的雙重突破。
圖5: PCR法擴增含不同濃度支原體樣品獲得的凝膠電泳圖
qPCR法支原體檢測：
Yeasen的qPCR支原體檢測試劑盒（探針法）是基于EP藥典推薦NAT法推出超簡便快捷檢測方法，克服了普通PCR靈敏度低和培養(yǎng)法耗時久的問題，將結(jié)果精準(zhǔn)度和使用便捷度有了質(zhì)的提升！3h內(nèi)可快速、簡便檢測支原體存無，優(yōu)于培養(yǎng)法的28天耗時檢測過程。
圖6: qPCR法測試流程
產(chǎn)品數(shù)據(jù)
靈敏度和擴增效率測試
10 CFU/mL口腔支原體標(biāo)準(zhǔn)品檢出結(jié)果
10 CFU/mL肺炎支原體標(biāo)準(zhǔn)品檢出結(jié)果
10 CFU/mL豬鼻支原體標(biāo)準(zhǔn)品檢出結(jié)果 
10 CFU/mL精氨酸支原體標(biāo)準(zhǔn)品檢出結(jié)果
試劑盒擴增效率：101-108 copies/uL
擴增效率≥96%，標(biāo)準(zhǔn)曲線R2≥0.996
不同檢測方法對比
產(chǎn)品名稱 | 所需設(shè)備 | 檢測支原體種類 | 所需時間 | 檢測靈敏度 | 結(jié)果觀察 |
LAMP等溫擴增法 | PCR儀或水浴鍋 | 27種 | 1h | 103 | 肉眼觀察 |
巢式PCR法 | PCR儀和電泳儀 | 13種 | 3h | 10個拷貝 | 凝膠觀察 |
qPCR法 | PCR儀和定量PCR儀 | 105種 | 3h | 單拷貝 | Ct值判定 |
翌圣MycAwayTM 支原體去除試劑（1000×）是一種混合制劑，可通過抑制支原體生長所必須的相關(guān)蛋白合成來達(dá)到支原體清除效果且對細(xì)胞無傷害，挽救您的細(xì)胞，減少因支原體污染帶來的損失。
圖6：細(xì)胞去除效果的展示
支原體去除試劑的特點：
毒性低：對細(xì)胞毒性小，不影響后續(xù)細(xì)胞實驗，如細(xì)胞活力檢測和細(xì)胞轉(zhuǎn)染等；
穩(wěn)定性強：-20℃試劑能較長時間保存并保持高效能；
操作簡單：只需將產(chǎn)品添加至支原體污染的培養(yǎng)基中孵育即可；
起效快：快3天即可見效；
去除范圍廣：能去除實驗室絕大多數(shù)支原體類型。
圖7：支原體去除試劑細(xì)胞毒性檢測圖示
提前做好支原體預(yù)防工作是降低支原體感染幾率的*的方法，yeasen開發(fā)的支原體預(yù)防系列產(chǎn)品，具有操作簡單、方便、穩(wěn)定性好等特點。
TIPS
1）源頭預(yù)防
對于新引進或者原代分離的細(xì)胞，需要進行支原體檢測，檢測結(jié)果為陰性才可進入無菌室培養(yǎng)
2）實驗操作流程規(guī)范
穿戴細(xì)胞房專用實驗服并及時處理廢棄物
3）污染物的處理
一旦發(fā)現(xiàn)已經(jīng)污染支原體的細(xì)胞，滅活后棄之并更換新的細(xì)胞，避免支原體大規(guī)模散播。
4）無菌室的維護
無菌室應(yīng)每周做一次消毒，用0.1%新潔爾滅擦拭操作臺及可能污染的死角，開啟無菌空氣過濾器及紫外燈殺菌半小時。每月做一次全面清潔工作，先用去污染劑洗刷地面，再用含1%新潔爾滅的清水清洗地面，最后再滅菌30min。
文獻引用
[1] Fratz-Berilla EJ, Angart P, Graham RJ, et al. Impacts on product quality attributes of monoclonal antibodies produced in CHO cell bioreactor cultures during intentional mycoplasma coNATmination events. Biotechnol Bioeng. 2020;117(9):2802-2815.
類別 | 產(chǎn)品 | 貨號 | 規(guī)格 |
檢測 | MycAway™ -Color One-Step Mycoplasma Detection Kit Hot MycAway™ 一步法快速支原體檢測試劑盒 | 40612ES25/60 | 25/100 T |
MycAway™ Mycoplasma Real-time qPCR Detection Kit Hot MycAway™ 支原體qPCR檢測試劑盒（探針法） | 40618ES25/60 | 25/100 T | |
GMyc-PCR Mycoplasma Test Kit GMyc-PCR支原體檢測試劑盒 | 40601ES10/20 | 10/20 assays | |
去除 | MycAway™ Spray (Ready-to-use) 支原體噴霧劑（即用型） | 40605ES02/03 | 1/2×500 mL |
MycAway™ Treatment (1000×)-Mycoplasma Elimination Reagent MycAway™ 支原體去除試劑（1000×） | 40607ES03/08 | 1/5×1 mL | |
預(yù)防 | MycAway™Prophylactic (2000×)-Mycoplasma Prevention Reagent MycAway™ 支原體預(yù)防試劑（2000×） | 40608ES03/08 | 1/5×1 mL |
MycGuard™ -1 Solution (100×) 細(xì)胞培養(yǎng)箱水盤1號消毒衛(wèi)士（支原體污染預(yù)防） | 40609ES60 | 100 mL | |
MycGuard™-2 Solution (500×) 水浴鍋2號消毒衛(wèi)士（支原體污染預(yù)防） | 40610ES60 | 100 mL |
