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如何使用潮霉素B篩選穩(wěn)轉(zhuǎn)株-----潮霉素B的應(yīng)用
潮霉素B的作用原理
潮霉素B（Hygromycin B）是一種氨基糖苷類抗生素，由吸水鏈霉菌（Streptomyces hygroscopicus）代謝產(chǎn)生，通過破壞易位和促進(jìn)80S核糖體的錯(cuò)讀而抑制蛋白合成，從而殺死原核（如細(xì)菌）、真核（如酵母菌，真菌）和高等哺乳動(dòng)物真核細(xì)胞。
目前常用于篩選和維持培養(yǎng)含潮霉素抗性基因的原核或真核細(xì)胞。
潮霉素B的應(yīng)用
● 篩選和維持培養(yǎng)穩(wěn)定轉(zhuǎn)染Hph+載體的原核或真核細(xì)胞（植物細(xì)胞和哺乳動(dòng)物細(xì)胞）
大腸桿菌(Escherichia coli.)來源的潮霉素抗性基因（hyg或hph），編碼潮霉素B磷酸轉(zhuǎn)移酶，將潮霉素B轉(zhuǎn)化成不具有生物活性的磷酸化產(chǎn)物，從而起到解毒作用。針對(duì)這一原理，潮霉素B是一種非常有用的選擇性標(biāo)記，用來篩選和維持培養(yǎng)成功轉(zhuǎn)染潮霉素抗性基因的原核或者真核細(xì)胞。
● 由于作用模式的差異，潮霉素B常與遺傳霉素G418，博來霉素和殺稻瘟菌素s聯(lián)合使用，篩選穩(wěn)定轉(zhuǎn)染兩個(gè)不同載體的細(xì)胞株
它的作用模式與G418 (Cat#60220ES)、博來霉素(Cat#60257ES)和殺稻瘟菌素s (Cat#60218ES)不同，所以非常適合在雙選實(shí)驗(yàn)中與另一種選擇性抗生素聯(lián)合使用。
● 抗病毒劑，由于潮霉素B選擇性滲透進(jìn)入病毒感染增強(qiáng)通透性的細(xì)胞，而且具有抑制翻譯的功效
● 作為驅(qū)蟲藥加入動(dòng)物飼料中，飼養(yǎng)動(dòng)物
● 潮霉素B用來篩選穩(wěn)轉(zhuǎn)株的工作濃度需要根據(jù)細(xì)胞類型，培養(yǎng)基，生長(zhǎng)條件和細(xì)胞代謝率而變化，推薦使用濃度為50-1000 μg/mL。對(duì)于第一次使用的實(shí)驗(yàn)體系建議通過建立殺滅曲線(kill curve)，即劑量反應(yīng)性曲線，來確定最佳篩選濃度。一般而言，哺乳動(dòng)物細(xì)胞50-500 μg/mL；細(xì)菌/植物細(xì)胞20-200 μg/mL；真菌200-1000 μg/mL。
潮霉素B的實(shí)驗(yàn)步驟
● 鋪板：細(xì)胞培養(yǎng)至80-90%融合時(shí)，棄掉培養(yǎng)基，用1-2 mL PBS洗滌細(xì)胞兩次，加入1mL Trypsin-EDTA溶液，充分洗滌細(xì)胞后，加入適量的胰蛋白酶消化液，將培養(yǎng)皿于37oC放置數(shù)分鐘使其在鏡下大部分變圓即可終止消化，鋪板密度約30%左右于5% CO2 37oC 過夜培養(yǎng)。
● 根據(jù)細(xì)胞類型，設(shè)定合適的濃度梯度。如哺乳動(dòng)物細(xì)胞，可設(shè)定50、100、250、500、750、1000 μg/mL。根據(jù)儲(chǔ)存液的濃度進(jìn)行對(duì)應(yīng)的稀釋操作。
● 維持Hygromycin B 濃度，隔天換液，鏡下觀察。7 天后，選擇能將未轉(zhuǎn)化的細(xì)胞*殺死的低Hygromycin B 濃度，為穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞篩選用的工作濃度。
化學(xué)性質(zhì)
潮霉素B是類白色至微黃褐色粉末，有特殊氣味，為弱堿，易溶于水、甲醇、乙醇等，易與許多有機(jī)酸和無機(jī)酸生成鹽。
保存方法
溶液直接存放在2℃～8℃，可存放6個(gè)月以上。
注意事項(xiàng)
● 攜帶hph基因轉(zhuǎn)染的細(xì)胞對(duì)潮霉素有抗性，轉(zhuǎn)染細(xì)胞穩(wěn)定或暫時(shí)表達(dá)該基因。
● 潮霉素B的抗性基因（hyg或hph）除了來自E. Coli.之外，還發(fā)現(xiàn)于其他的菌株，包括Streptomyces hygroscopicus和Klebsiella pneumoniae。
產(chǎn)品推薦
翌圣生物的潮霉素B提供兩種狀態(tài)的產(chǎn)品，粉末(1 g/10 g)和溶液(50 mg/mL)，貨號(hào)分別為60225ES、60224ES。
產(chǎn)品名稱 | 產(chǎn)品編號(hào) | 規(guī)格 | 價(jià)格（元） | *（元） |
Hygromycin B (50 mg/mL) 潮霉素B（50 mg/mL） | 60224ES03 | 1 g (20 mL) | 849.00 | 536.00 |
Hygromycin B (50 mg/mL) 潮霉素B（50 mg/mL） | 60224ES10 | 10×1 g (20 mL) | 7396.00 | 4696.00 |
產(chǎn)品名稱 | 產(chǎn)品編號(hào) | 規(guī)格 | 價(jià)格（元） | *（元） |
Hygromycin B 潮霉素B | 60225ES03 | 1 g | 719.00 | 419.00 |
Hygromycin B 潮霉素B | 60225ES10 | 10 g | 6599.00 | 3999.00 |
客戶使用該產(chǎn)品發(fā)表的科研文獻(xiàn)（不*統(tǒng)計(jì)：部分）
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