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內(nèi)參抗體你選對了嗎?
各位小伙伴，您是否在蛋白免疫印記時，面對各種內(nèi)參抗體而不知所措呢，內(nèi)參蛋白是生物體內(nèi)管家基因編碼的，在多組織中穩(wěn)定表達，用于驗證免疫學(xué)實驗中是否正常進行和一種半定量檢測蛋白表達的標(biāo)準(zhǔn)對照，那么如何正確的選擇內(nèi)參抗體呢！可以從以下幾點去參考。
一、樣本種屬來源
1. 哺乳動物組織或著細胞來源的樣本，一般選擇β-actin、α-tubulin、GAPDH、Lamin- B、Histone H3、Na+/K+-ATPase。
2. 植物來源樣本，一般選擇plant actin、Rubisco等。
3. 其他研究較稀少的樣本，通過查詢相關(guān)文獻或數(shù)據(jù)庫，選擇合適的蛋白作為內(nèi)參推薦ICG網(wǎng)站
二、目的蛋白分子量
保證目的蛋白分子量與內(nèi)參相差大于5KDa以上，防止檢測時干擾，例如，目的蛋白為40KDa，不宜選擇β-actin（42KDa）作內(nèi)參，可考慮GAPDH (36KDa) 或者β-tubulin(55KDa)作為內(nèi)參。
三、內(nèi)參蛋白表達部位
因此，提取蛋白的部位不同，選擇的內(nèi)參蛋白也不同。比如有時胞質(zhì)、胞核分開提取而不提取總蛋白時，就要選擇相應(yīng)部位表達的內(nèi)參蛋白。如 H3在細胞核中高效穩(wěn)定表達，理論上在細胞質(zhì)不表達，那么對于胞質(zhì)提取的蛋白，就不能選用H3作為內(nèi)參蛋白，而應(yīng)該選擇細胞質(zhì)中表達的β-actin 、GAPDH α-Tubulin等作為內(nèi)參蛋白。（內(nèi)參評價推薦軟件geNorm、NormFinder）
亞細胞定位 | 內(nèi)參 | 分子量KDa | 注意事項 |
胞漿、全細胞 | β-actin |
42 | 不適用于細胞核提取物，因為β-actin是染色質(zhì)重塑復(fù)合物中的組分;可能不適合于研究對象之間年齡差異大的情況 |
α-Tubulin | 55 | 可能不適合于研究對象之間年齡差異大的情況，微管蛋白的表達隨著抗菌和抗有絲分裂抗性藥物而改變，因此在加入抗癌和抗真菌藥物時 | |
β-Tubulin | 55 | ||
GAPDH |
36 | 組織細胞缺氧會引起GAPDH表達上調(diào)，因此不適用于與氧有關(guān)的研究，糖尿病等因素會導(dǎo)致 GAPDH的表達量增高 | |
Vinculin | 117 | 大分子量蛋白可參考 | |
線粒體 | COXIV 系列 | 15-17 | 該系列蛋白主要集中于15-17KDa,如果目標(biāo)蛋白分子量接近，可考慮其他內(nèi)參 |
HSP60 | 60 | ||
細胞核 | VDAC1/2 | 31-37 | 該系列蛋白主要集中于31-37KDa |
Lamin B1 | 66 | 不是適用于胚胎干細胞，凋亡實驗中不適合做內(nèi)參 | |
PCNA | 36 | 非增值細胞不適用 | |
TBP | 33-43 | TBP在人類中是37-43KDa,在小鼠和大鼠中是33-36KDa，不適合凋亡實驗 | |
YY1 | 65-70 | ||
Histone H3 | 17 | 多數(shù)蛋白分子量在17KDa左右，如果目標(biāo)蛋白分子量接近，可考慮其他內(nèi)參 | |
全血、血清、血漿 | Transferrin | 77 | 表達狀況受某些疾病狀態(tài)和治療的影響，比如視黃酸 |
Albumin | 66 | 含量*，注意降低WB實驗上樣 |
標(biāo)簽抗體搭配使用效果更佳
在研究蛋白相關(guān)相互作用等實驗中比如pull down, 通過分子生物學(xué)手段，表位標(biāo)簽可融合至目的蛋白的 N或C 末端，常用的表位標(biāo)簽有 His、HA、Myc和GST 等。這些表位標(biāo)簽通常不會影響目的蛋白的生物活性和細胞內(nèi)定位。表位標(biāo)簽的出現(xiàn)，為科學(xué)研究和工業(yè)生產(chǎn)提供了方便。
表位標(biāo)簽 | 標(biāo)簽序列 | 分子量 | 標(biāo)簽抗體 |
HA 標(biāo)簽 | YPYDVPDYA | 1.1 KD | HA 標(biāo)簽抗體 |
Myc 標(biāo)簽 | EQKLISEEDL | 1.2 KD | Myc 標(biāo)簽抗體 |
DYKDDDDK | DYKDDDDK | 1 KD | DYKDDDDK (FLAG® 表位標(biāo)簽) 抗體 |
GST Tag | - | 26 KD | GST 標(biāo)簽抗體 |
GFP Tag | - | 26.9 KD | GFP 標(biāo)簽抗體 |
V5 標(biāo)簽 | GKPIPNPLLGLDST | 1.4 KD | V5 標(biāo)簽抗體 |
S-tag | KETAAAKFERQHMDS | 1.8 KD | S 標(biāo)簽抗體 |
E-tag | GAPVPYPDPLEPR | 1.4 KD | E 標(biāo)簽抗體 |
類型 | 產(chǎn)品名稱 | 分子量 | 產(chǎn)品編號 |
內(nèi)參抗體 | β-actin, Mouse mAb 小鼠抗β-actin單克隆抗體 | 42 kDa | 30101ES |
β-actin, Rabbit pAb 兔抗β-actin多克隆抗體 | 42 kDa | 30102ES | |
GAPDH (Clone:1A6), Mouse mAb 小鼠抗GAPDH 單克隆抗體 | 36 kDa | 30201ES | |
GAPDH, Rabbit pAb 兔抗GAPDH多克隆抗體 | 36 kDa | 30202ES | |
α-Tubulin, Mouse mAb 小鼠抗α-Tubulin單克隆抗體 | 50-55 kDa | 30304ES | |
β-Tubulin, Mouse mAb 小鼠抗β-Tubulin單克隆抗體 | 50-55 kDa | 30301ES | |
β-Tubulin, Rabbit pAb 兔抗β-Tubulin多克隆抗體 | 50-55 kDa | 30302ES |
類型 | 產(chǎn)品名稱 | 產(chǎn)品編號 |
標(biāo)簽抗體 | His-tag, Mouse mAb 小鼠抗His-tag單克隆抗體 | 30401ES |
His-tag, Rabbit pAb兔抗His-tag多克隆抗體 | 30402ES | |
Flag-Tag (DYKDDDDK), Rabbit pAb 兔抗Flag-Tag多克隆抗體（DYKDDDDK） | 30501ES | |
小鼠抗Flag-Tag單克隆抗體（DYKDDDDK） Flag-Tag (DYKDDDDK), Mouse mAb | 30503ES | |
Myc-tag, Mouse mAb小鼠抗Myc-tag單克隆抗體 | 30601ES | |
HA-Tag, Mouse mAb小鼠抗HA-Tag單克隆抗體 | 30701ES | |
HA-Tag, Rabbit pAb兔抗HA-Tag多克隆抗體 | 30702ES | |
V5-Tag, Mouse mAb小鼠抗V5-Tag單克隆抗體 | 30801ES | |
GST-tag, Mouse mAb 小鼠抗GST-tag單克隆抗體 | 30901ES | |
GST-tag, Rabbit pAb 兔抗GST-tag多克隆抗體 | 30902ES | |
GFP-tag, Mouse mAb 小鼠抗GFP-tag單克隆抗體 | 31001ES | |
GFP-tag, Rabbit pAb 兔抗GFP-tag多克隆抗體 | 31002ES | |
RFP-tag, Mouse mAb 小鼠抗RFP-tag單克隆抗體 | 31101ES | |
MBP-tag, Rabbit pAb 兔抗MBP-tag多克隆抗體 | 31201ES |
類型 | 名稱 | 貨號 |
親和純化凝膠 | Anti-DYKDDDDK (Flag) Affinity Gel（Anti-Flag親和純化凝膠） | 20585ES |
Anti-HA Affinity Gel （Anti-HA親和純化凝膠） | 20586ES | |
Anti-Myc Affinity Gel（Anti-Myc親和純化凝膠） | 20587ES | |
Anti-V5 Affinity Gel（Anti-V5標(biāo)簽親和純化凝膠） | 20588ES | |
Anti-His Affinity Gel（Anti-His標(biāo)簽親和純化凝膠） | 20589ES |
文獻引用：
[1]Zheng G, Jiang C, Li Y, et al. TMEM43-S358L mutation enhances NF-κB-TGFβ signal cascade in arrhythmogenic right ventricular dysplasia/cardiomyopathy[J]. Protein & cell, 2018: 1-16.
IF（6.228）
[2] Wang T, Wang J, Wang J, et al. HAP1 is an in vivo UBE3A target that augments autophagy in a mouse model of Angelman syndrome[J]. Neurobiology of disease, 2019, 132: 104585. 30101 IF 5.36
[3] Peng RR, Wang LL, Gao WY, et al. The 5.8S pre-rRNA maturation factor, M-phase phosphoprotein 6, is a female fertility factor required for oocyte quality and meiosis. Cell Prolif. 2020;53(3):e12769.
GAPDH IF: 5.753
[4] Tan K S, Zhang Y, Liu L, et al. Molecular cloning and characterization of an atypical butyrylcholinesterase-like protein in zebrafish[J]. Comparative Biochemistry and Physiology Part B: Biochemistry and Molecular Biology, 2021: 110590. Flag-Tag (DYKDDDDK), mouse 30503ES20
[5] Zhuang W, Yan Z. The S2–S3 Loop of Kv7. 4 Channels Is Essential for Calmodulin Regulation of Channel Activation[J]. Frontiers in Physiology, 2020, 11. 30601ES20
[6] Wang Y, Hou Y, Qiu J, et al. Abscisic acid promotes jasmonic acid biosynthesis via a ‘SAPK10 ‐bZIP72‐AOC’pathway to synergistically inhibit seed germination in rice (Oryza sativa)[J]. The New Phytologist, 2020, 228(4): 1336. GST\HIS\GFP coip
[7] S Chen, et al. Novel Role for Tranilast in Regulating NLRP 3 Ubiquitination, Vascular Inflammation, and Atherosclerosis JAHA. June 16, 2020 Vol 9, Issue 12 αTUBULIN
[8] Wu L, Gao A, Lei Y, Li J, Mai K, Ye J. SHP1 tyrosine phosphatase gets involved in host defense against Streptococcus agalactiae infection and BCR signaling pathway in Nile tilapia (Oreochromis niloticus). Fish Shellfish Immunol. 2020;99:562-571. β-actin
[9] Wu F, Xu K, Xu K, et al. Dl-3n-butylphthalide improves traumatic brain injury recovery via inhibiting autophagy-induced blood-brain barrier disruption and cell apoptosis. J Cell Mol Med. 2020;24(2):1220-1232.GAPDH
[10] Liu X , Sun T , Ge Q , et al. Construction of Novel Bispecific Single-Domain Antibodies (BiSdAbs) with Potent Antiangiogenic Activities[J]. 2020. GAPDH rabbit antibody
