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外泌體是什么?外泌體(Exosome)研究正確打開方式

2022-6-1  閱讀(482)

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外泌體是什么?外泌體(Exosome)研究正確打開方式

外泌體曾經(jīng)被認為是細胞卸載廢物的一種方式,在過去的十年中,我們對外泌體的看法發(fā)生了巨大變化。我們已經(jīng)開始認識到,外泌體是從細胞中釋放出來的,通過其RNA,蛋白質(zhì),脂質(zhì)和DNA的載體充當信號載體和組織重塑者。參與癌癥,炎癥,免疫,中樞神經(jīng)系統(tǒng)功能,心臟細胞功能。

外泌體在這些基本生物過程中的作用,它們作為生物標志物,也可作為靶向遞送生物分子藥物載體(如治療)的工具研究。獲取和研究外泌體所需的一切,從分離和鑒定分析以及染色等?;趒PCR的外泌體miRNA分析還是RNA-Seq方法,我們都有高質(zhì)量的外泌體研究產(chǎn)品來支持您的科學研究并推進您的工作。

 

外泌體是什么

外泌體(Exosome)是由細胞內(nèi)多泡體與細胞膜合后,釋放到細胞外的一種直徑約30-150nm的膜性囊泡,區(qū)別于微囊泡(100-1000nm),凋亡小體(400-4000nm)。

目前學術界主流觀點認為外泌體的產(chǎn)生過程為:組物膜內(nèi)陷形成內(nèi)體(endosome)。再形成多囊泡體(mutivesicutar bodesMVB),最后分泌到細胞外成為外泌體。

 

性質(zhì)分類

外泌體Exosomes

微囊泡 Microvesicles

凋亡小體Apoptotic Bodies

直徑

30-150nm

100-1000nm

400-4000nm

密度(g/mL)

1.10-1.18

1.02-1.22

1.16-1.28

蛋白標記物

Alix、TSG101、HSC70、 CD63、CD81、CD9

Selectin、integrins、 CD40、MMP

Histones

來源

細胞內(nèi)的多泡小體與細胞膜融合后,其內(nèi)的小泡釋放到細胞外

細胞膜出芽形成

凋亡時細胞膜皺縮內(nèi)

陷,分割包裹胞質(zhì)形

成的泡狀小體

攜帶遺傳信息

mRNA、miRNA、DNA

mRNA、miRNA、DNA

mRNA、miRNA、DNA

功能

胞內(nèi)信息傳遞,胞外物質(zhì)交換

胞內(nèi)信息傳遞,胞間遺傳物質(zhì)運輸

調(diào)理病理學及生理發(fā)生過程


外泌體發(fā)現(xiàn)歷程

圖片1.png


外泌體的功能

細胞增值與凋亡調(diào)控,轉(zhuǎn)移與侵襲,血管生成,免疫應答,細胞分化,代謝調(diào)控,微生物組調(diào)控,病毒感染。

 

外泌體研究應用

1、載體藥物研究:外泌體可作為載體將包裹在內(nèi)的藥物運送到目標區(qū)域,做到靶向治療;

2、診斷研究:主要研究外泌體的種類、數(shù)目、大小和內(nèi)容物與疾病之間的關系;來預測疾 病的發(fā)生與進展(如阿爾茨海默?。?;

3、間充質(zhì)干細胞外泌體改造:間充質(zhì)干細胞來源外泌體與間充質(zhì)干細胞有著相似的功能, 間充質(zhì)干細胞來源外泌體更穩(wěn)定,更好保存,易于管理和控制,可以人為改變其內(nèi)容物 的種類和數(shù)量。

4、外泌體biomarker:外泌體內(nèi)容物分析轉(zhuǎn)錄組測序、芯片(mRNA,LncRNA,miRNA,cir  RNA)、蛋白質(zhì)組、代謝組分析。


外泌體結(jié)構(gòu)圖.jpg

 

外泌體提取方法

翌圣生物經(jīng)過研發(fā),開發(fā)出*的分離技術,可以快速從各種樣本中如血漿/血清,細胞培養(yǎng)上清,尿液,乳液,腹水,羊水,唾液等其他體液中獲得大量完整的外泌體,適用于下游共培養(yǎng),電鏡分析和高通量測序等實驗。

1652231275156806.png

 

外泌體的科研思路

對外泌體進行提取以后,通常對外泌體進行鑒定,方法為:NTA粒徑分析、電鏡掃描和Western Blot,WB中的常見指標有CD9, CD63, CD81、TSG101,后續(xù)科研思路比較廣泛,其中外泌體內(nèi)含RNA表達譜研究二代測序的研究是熱門的科學研究方向,下圖為常見的科研思路的整理圖:

1652231301690162.png

 

外泌體的鑒定

 

外泌體形成和釋放后,會形成自身*的標志性蛋白,利用Western blot對這些標志蛋白進行檢測,可以對外泌體進行鑒定。翌圣外泌體鑒定試劑盒針對外泌體標志蛋白CD63和TSG101開發(fā),適用于人、大鼠、小鼠外泌體的鑒定。

實驗方法:

SDS-PAGE膠:10%分離膠;

樣品上樣量:10μg;

一抗:Anti-CD63抗體,1:2000稀釋;Anti-TSG101抗體,1:1000稀釋;4℃孵育過夜;

二抗:Anti-mouse IgG,arigo ARG65350,1:10000稀釋,室溫孵育50min;

曝光時間:5s。

 

1652231344358258.png


外泌體高通量測序

 

外泌體參與多種生理或病理過程,如抗原呈遞、RNA轉(zhuǎn)運、組織修復、神經(jīng)退行性疾病、腫瘤轉(zhuǎn)移、代謝重建等。外泌體中含有細胞特異核酸和蛋白可以作為疾病的早期分子診斷標志物,通過對外泌體內(nèi)RNA的測序分析進行疾病鑒定和外泌體功能分析。翌圣生物建庫試劑盒,適合外泌體RNA高通量測序,低樣本高收獲。

優(yōu)質(zhì)的低樣本量RNA建庫質(zhì)量

1652231510392195.png

 

圖1:不同DV200 Human FFPE RNA的500ng投入量建庫,Hieff NGS® Ultima Dual-mode RNA Library Prep Kit for Illumina® 相比于競品N* ,文庫大小一致,1st cDNA 合成效率更高。

 

 

1652231721985574.jpg

圖2:Hieff NGS® Ultima Dual-mode RNA Library Prep Kit for Illumina®相比于競品N*,數(shù)據(jù)產(chǎn)出相關性高,數(shù)據(jù)均一性更好。



外泌體研究相關產(chǎn)品



產(chǎn)品分類

產(chǎn)品名稱

貨號

外泌體提取試劑盒

Hieff® Quick exosome isolation kit(for Cell Culture Media)細胞培養(yǎng)上清外泌體快速抽提試劑盒

41201ES

Hieff® Quick exosome isolation kit(for Serum/Plasma)血清/血漿外泌體快速抽提試劑盒

41202ES

Hieff® Quick exosome isolation kit(for Body Fluids)體液外泌體快速抽提試劑盒

41204ES

Hieff® Quick exosome isolation kit Plus (for Cell Culture Media) 細胞培養(yǎng)上清外泌體快速抽提試劑盒Plus

41205ES

Hieff® Quick exosome isolation kit Plus (for Serum/Plasma) 血清/血漿外泌體快速抽提試劑盒Plus

41206ES

Hieff® Quick exosome isolation kit Plus (for Urine) 尿液外泌體快速抽提試劑盒Plus

41207ES

Hieff® Quick exosome isolation kit Plus (for Body Fluids) 體液外泌體快速抽提試劑盒Plus

41208ES

Hieff® Quick exosome isolation kit Plus (for Milk) 乳液外泌體快速抽提試劑盒Plus

41209ES

外泌體鑒定試劑盒

Hieff® Exosome identification kit for Westernblot外泌體鑒定試劑盒

41203ES

外泌體專用血清培養(yǎng)基

Hieff® Serum-free medium (for exosome) 外泌體專用無血清培養(yǎng)基

41210ES

外泌體示蹤

DiI (DiIC18(3)) 細胞膜橙紅色熒光探針

40726ES

DiO (DiOC18(3)) 細胞膜綠色熒光探針

40725ES

DiR Iodide (DiIC18(7)) 細胞膜深紅色熒光探針

40757ES

DiD Perchlorate (DiIC18(5)) 細胞膜紅色熒光探針

40758ES

DiIC16(3) perchlorate 細胞膜橙紅色熒光探針

40772ES

Celltracker CM-DiI 活細胞示蹤劑CM-DiI (紅色)

40718ES

外泌體抑制劑

GW 4869 (hydrochloride hydrate)外泌體抑制劑

52321ES

RNA建庫試劑盒

Hieff NGS® Ultima Dual-Mode RNA Library Prep Kit for Illumina

12252ES

Hieff  NGS® Ultima Dual-Mode RNA Library Prep Kit for MGI®

13333ES

 


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