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干貨 | 翌圣核酸提取寶典,建議先收藏!

2023-7-10  閱讀(260)

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干貨 | 翌圣核酸提取寶典,建議先收藏!

 
 
核酸作為一切分子生物學(xué)研究的基礎(chǔ),而且提取的核酸質(zhì)量高低也是決定下游實(shí)驗(yàn)成敗的關(guān)鍵因素之一。磁珠法提取和硅膠膜離心柱法提取是的兩種提取方法。那么,這兩種提取方法各有什么特點(diǎn)?提取流程與原理又是什么呢?核酸提取過(guò)程中的常見(jiàn)問(wèn)題有哪些呢?
 
 

 

 

硅膠膜離心柱法核酸提取原理

 

硅膠膜表面的硅醇基團(tuán)呈弱酸性,其水化后帶負(fù)電。當(dāng)溶液中存在一定濃度的陽(yáng)離子后,形成的陽(yáng)離子橋能夠中和DNA和硅醇基團(tuán)之間的表面負(fù)電荷,從而使DNA牢固地吸附在硅膠膜表面。反之,處于低鹽水溶液狀態(tài)下時(shí),由于硅膠膜的硅醇基團(tuán)與DNA磷酸基團(tuán)之間的靜電排斥,硅膠膜釋放DNA。
 
流程

 
特點(diǎn)
  • 實(shí)驗(yàn)流程操作簡(jiǎn)單;
  • 價(jià)格低廉;
  • 提取濃度濃度高,純度高。

 

 

磁珠法核酸提取原理

運(yùn)用納米技術(shù),對(duì)超順磁性納米顆粒的表面進(jìn)行表面修飾制備成超順磁性氧化硅納米磁珠。核酸結(jié)合到磁珠上主要依靠靜電作用、疏水作用和氫鍵作用。在鹽離子和外加磁場(chǎng)的作用下,能從樣本中分離出核酸,并洗去非特異性吸附的雜質(zhì),得到純化后的核酸。

 

 
流程

 
特點(diǎn)
  • 能夠?qū)崿F(xiàn)自動(dòng)化、大批量的實(shí)驗(yàn)操作;
  • 操作簡(jiǎn)單,用時(shí)短,如核酸提取10分鐘內(nèi)可以完成;
  • 安全無(wú)毒,符合環(huán)保理念。

 

 

核酸提取常見(jiàn)的問(wèn)題及解決方案

 

問(wèn)題一: A260 / A280異常是什么原因呢?
 
 

A260 / A280比值應(yīng)大于1.8(DNA)或者2.0(RNA)。

  • DNA提取中RNA 污染會(huì)增高260/280比值;

  • RNA提取中RNA降解會(huì)增高260/280比值;

  • 蛋白的污染會(huì)降低A260 / A280比值。

 

問(wèn)題二:A260/A230異常是什么原因呢?
 
 
  • 較純凈的核酸A260/A230的比值一般在1.8-2.2之間;

  • 酚、胍鹽、蛋白的污染會(huì)降低A260/A230的比值;

  • 當(dāng)樣本核酸濃度太低時(shí),A260/A230結(jié)果不準(zhǔn)確,會(huì)導(dǎo)致比值偏低;

  • 當(dāng)樣本濃度低于50ng/µl,A260/ A280、A260/ A230比值波動(dòng)非常大,應(yīng)謹(jǐn)慎對(duì)待!

 

問(wèn)題三:提取的基因組DNA生物活性差,為什么?
 
 
  • 提取的基因組DNA中鹽分濃度過(guò)高,請(qǐng)嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)操作;

  • 提取的基因組DNA中含有乙醇。離心的速度和時(shí)間應(yīng)該嚴(yán)格遵循說(shuō)明書(shū)要求進(jìn)行。

 

問(wèn)題四、質(zhì)粒提取時(shí)出現(xiàn)細(xì)菌基因組的污染是怎么回事呢?
 
 
  • 菌體裂解和中和過(guò)程中,劇烈混合造成基因組DNA斷裂所致。請(qǐng)溫和地進(jìn)行菌體的裂解和中和;

  • 每一步嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)的操作時(shí)間;

  • 細(xì)菌的質(zhì)量差,中有許多斷裂或降解而游離的基因組DNA,請(qǐng)使用生長(zhǎng)良好的新鮮細(xì)菌。

 

問(wèn)題五:磁珠法提取時(shí),洗脫液中有磁珠有殘留怎么辦?
 
 
  • 篩選、選擇匹配的磁珠;
  • 調(diào)節(jié)設(shè)備,增強(qiáng)外磁場(chǎng);
  • 放慢磁介入速度并延長(zhǎng)磁吸時(shí)間。

 

問(wèn)題六:洗滌洗脫時(shí)磁珠有結(jié)塊怎么辦?
 
 
  • 縮短干燥時(shí)間;

  • 增強(qiáng)混勻震蕩強(qiáng)度。

 

問(wèn)題七:增加磁珠量是否可以提高核酸得率?
 
 

NO!通常情況下,磁珠法試劑盒給出的參考磁珠用量都是略微過(guò)量的。

  • 過(guò)多的磁珠將無(wú)法均勻分散于液體中;

  • 過(guò)量的磁珠會(huì)吸附更多的雜質(zhì);

  • 過(guò)多的磁珠會(huì)吸附蛋白酶、溶菌酶等功能成分,導(dǎo)致整個(gè)提取效率降低。

 

問(wèn)題八:一種磁珠是否適配所有的核酸提取體系?
 
 

NO!于不同磁珠適合的體系和用量是不同的,往往需要調(diào)整后才能獲得更好的提取效果。

  • 有的磁珠適合偏酸性系列的試劑體系,有的適合偏堿性系列的試劑體系;

  • 有的磁珠磁響應(yīng)性好但是沉降速度快,更適合磁棒式自動(dòng)提取儀;

  • 有的磁珠沉降速度慢但是磁響應(yīng)時(shí)間長(zhǎng),更適合移液式自動(dòng)提取儀。

 

翌圣核酸提取TOP產(chǎn)品,活動(dòng)等你來(lái)!

 

類別產(chǎn)品編號(hào)產(chǎn)品名稱產(chǎn)品應(yīng)用
柱式RNA提取19221ESMolPure® Cell/Tissue Total RNA Kit  細(xì)胞/組織總RNA提取
19211ESMolPure® TRIeasy Plus Total RNA Kit   總RNA提取
19231ESMolPure® Cell RNA Kit培養(yǎng)細(xì)胞RNA提取
磁珠法RNA提取18600ESMolPure® Magnetic Tissue/Cell Total RNA Kit組織/細(xì)胞RNA提取
柱式DNA提取18700ESMolPure® Cell/Tissue DNA Kit細(xì)胞/組織DNA提取
18815ESMolPure® Soil DNA Kit土壤DNA提取
18820ESMolPure® Stool DNA Kit糞便DNA提取
磁珠法DNA提取18371ESMolPure® Magnetic FFPE DNA Kit FFPE DNA提取
18382ESMolPure® Magnetic Circulating Cell-Free DNA Kit v2血漿游離DNA提取
18504ESMolPure® Magnetic M4P1 Blood DNA Kit 血液gDNA提取
質(zhì)粒提取19036ESMolPure® Endo-free Plasmid Maxi Kit無(wú)內(nèi)毒素質(zhì)粒大量提取
PCR產(chǎn)物回收19101ESMolPure® Gel Extraction Kit瓊脂糖凝膠回收


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