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國際期刊 ┃ 翌圣克隆試劑盒助力浙大團隊揭示病原菌宿主適應新機制
2023年9月2日，浙江大學樂敏課題組在National Science Review（IF=20.600）上發(fā)表研究論文“Genome degradation promotes Salmonella pathoadaptation by remodeling fimbriae-mediated proinflammatory response"，該論文使用翌圣一步法快速克隆試劑盒（Cat#10911）構建菌毛基因缺失株，以禽宿主專性病原——雞白痢沙門菌為模型，探究基因組退化促進病原菌宿主適應的機制，揭示了病原菌宿主適應新機制。
目前關于基因組退化在影響病原菌致病行為方面的確切作用知之甚少，潛在的分子細節(jié)還有待研究。為了探究潛在的進化驅動因素，研究人員利用跨越一個多世紀的大規(guī)模全球禽類傳染病——限制性雞白痢沙門氏菌（bvSP）為模型，通過大量的基因組測序和大數(shù)據(jù)分析，證實了雞白痢沙門菌在我國內普遍存在，特別是在華東地區(qū)影響較大。研究發(fā)現(xiàn)，我國雞白痢沙門菌耐藥情況十分嚴峻，雞白痢沙門菌分離株對多種抗菌藥表現(xiàn)出高度耐藥性，高達97.29%的分離株對喹諾酮類藥物高耐受。其中，抗微生物藥物的基因型ST92在中國雞群中越來越普遍。
本研究中，研究人員通過對全球458個bvSP基因組測序和大數(shù)據(jù)分析，構建了雞白痢沙門菌的系統(tǒng)發(fā)育樹，結果表明該菌株可分化為3個譜系，L1為祖先分支，L2和L3是逐步流行演化出的兩個分支，且最近出現(xiàn)的兩個譜系（L2/L3）的毒力增強。與中國一樣，世界范圍內主要優(yōu)勢型基因也為ST92。值得注意的是，最近分離的菌株攜帶更多的耐藥基因和質粒。
雞白痢沙門菌逐步增強毒性的進化（圖片來自原文）
研究人員通過雛雞與雞胚感染試驗和體外不利環(huán)境的模擬，發(fā)現(xiàn)雞白痢沙門菌在進化過程中毒力逐漸增強，但對外界環(huán)境的生存能力逐漸下降；通過泛基因組分析精確地指出該菌的進化伴隨著基因的缺失，即來自毒力譜系的菌毛退化。
集約化養(yǎng)殖和毒性克隆的出現(xiàn)（圖片來自原文）
為了進一步探究菌毛基因的缺失與菌株進化的關系，研究人員利用CRISPR/Cas9協(xié)同同源重組技術構建了多個菌毛基因缺失株，通過親本與突變株的差異比較發(fā)現(xiàn)，菌毛功能的丟失限制了糞口途徑的水平傳播，但增強了雞白痢沙門菌的毒力。研究結果表明，bvSP通過菌毛功能的缺失減緩了宿主的促炎反應以實現(xiàn)免疫逃逸，同時通過增強雞白痢沙門菌經卵途徑的垂直傳播，在我國集約化養(yǎng)殖模式的助推下形成高毒力且高傳播力的克隆。證明了的毛狀附屬物是如何改變致病性的行為。強調了在農業(yè)集約化過程中，宿主限制病原體的毒力和傳播是一種新的進化增強，為指導我國禽類流行病的控制和治療提供新的思路和科學依據(jù)。
（截圖來自原文）
產品定位 | 產品名稱 | 產品貨號 | 規(guī)格 |
單片段一步克隆 | Hieff Clone® Plus One Step Cloning Kit一步法快速克隆試劑盒 | 10911ES20 | 20T |
多片段一步克隆 | Hieff Clone® Universal One Step Cloning Kit | 10922ES20 | 20T |
翌圣一步法快速克隆試劑盒是一種利用同源重組的原理，進行無縫克隆的技術。該技術無需考慮酶切位點，將PCR產物定向克隆至任何載體的任何位點，可高效克隆50 bp-10 kb片段。操作過程簡單快速，只需50°C，20 min即可完成反應。勁爆的是，多個片段也可以同時克隆哦！
近期的研究表明，6 μL體系，低劑量10 kb載體（40 ng）、1 kb片段（10 ng）條件下，10911ES、10922ES與競品相比，依舊具有高性能，且陽性克隆率達100%，結果如圖1所示。
圖1.使用10911ES、10922ES和競品Q進行單片段連接，10911ES、10922ES陽性率100%
A.重組轉化平板圖；B.陽性克隆檢測電泳圖
單片段連接：5,033 bp+1,863 bp
圖2.使用10922ES和競品N*進行單片段連接，10922ES陽性率100%
A.競品N*轉化平板；B.競品N*陽性克隆檢測電泳圖；C.10922ES轉化平板；D.10922ES陽性克隆檢測電泳圖
4片段連接：2,853 bp+2,487 bp+227 bp+2,137 bp+331 bp
圖3.使用10922ES進行4片段連接
A.10922ES轉化平板圖。B.線性化載體與插入片段電泳圖，M1為Yeasen DL5,000；泳道1為片段A（2,487 bp）；泳道2、3為片段C（2,137 bp）；泳道4為線性化載體（2,853 bp）；泳道5為片段B（227 bp）；泳道8為片段D（331 bp）。C.陽性克隆檢測電泳圖，M2為ATG 10 kb，PCR檢測大小為1,883 bp
單片段連接：8,130 bp+760 bp
圖4.使用10922ES進行單片段連接
A.10922ES轉化平板圖；B.線性化載體電泳圖，M1為Yeasen GoldBand 1 kb DNA ladder，泳道1、2、3為載體用EcoRI線性化；C.插入片段電泳圖，M2為Vazyme DL2,000 Plus DNA Marker，泳道1、2均為PCR產物；D.酶切檢測重組載體，M1為1 kb Marker，泳道1、2、3、4均為酶切鑒定陽性克隆，泳道1、2為陽性克隆
小翌助您克隆過關斬將，每天都出好數(shù)據(jù)。更多相關產品如下表所示，歡迎選購！
產品定位 | 產品名稱 | 產品貨號 | 規(guī)格 |
單片段一步克隆 | Hieff Clone® Plus One Step Cloning Kit一步法快速克隆試劑盒 | 10911ES20 | 20T |
多片段一步克隆 | Hieff Clone® Universal One Step Cloning Kit | 10922ES20 | 20T |
兼容TA/平末端克隆連接 | Hieff Clone® Universal Zero TOPO TA/Blunt Cloning Kit | 10906ES20 | 20T |
替代TA連接克隆 | Hieff Clone® Zero TOPO-TA Cloning Kit零背景TOPO-TA克隆試劑盒 | 10907ES20 | 20T |
替代TA連接克隆 | Hieff Clone® Zero TOPO-TA Simple Cloning Kit, MCS-Depleted零背景TOPO-TA克隆試劑盒（不含MCS多克隆酶切位點） | 10908ES20 | 20T |
替代平末端連接克隆 | Hieff Clone® Zero TOPO-Blunt Cloning Kit零背景TOPO-Blunt平末端克隆試劑盒 | 10909ES20 | 20T |
Hieff Clone® Zero TOPO-Blunt Simple Cloning Kit零背景TOPO-Blunt平末端克隆試劑盒（不含MCS多克隆酶切位點） | 10910ES20 | 20T | |
化學感受態(tài) | Chemically Competent Cell 化學感受態(tài)細胞 | 11801ES80 | 10×100μL |
DH5α Chemically Competent Cell DH5α化學感受態(tài)細胞 | 11802ES80 | 10×100μL | |
BL21 (DE3) Chemically Competent Cell BL21 (DE3)化學感受態(tài)細胞 | 11804ES80 | 10×100μL | |
常規(guī)PCR擴增 | 2×Hieff® PCR Master Mix (With Dye) | 10102ES03 | 1mL
|
快速PCR擴增 | 2×Hieff® Ultra-Rapid HotStart PCR Master Mix (with Dye) | 10157ES03 | 1mL
|
5s/kb，保真?？欤ê蠘尤玖希?/span> | 2× Hieff Canace® AdvanceFast PCR Master Mix (With Dye) | 10164ES03 | 1 mL |
高保真83×Taq，隨心擴 | 2×Hieff Canace® Plus PCR Master Mix (With Dye)高保真酶預混液 | 10154ES03 | 1 mL |
柱式法核酸提取 | MolPure® Plasmid Mini Kit質粒小量提取試劑盒 | 19001ES50 | 50T |
柱式法核酸提取 | MolPure® Endo-free Plasmid Mini Kit無內毒素質粒小量提取試劑盒 | 19021ES50 | 50T |
柱式法核酸提取 | MolPure® Endo-free Plasmid Maxi Kit無內毒素質粒大量提取試劑盒 | 19036ES10 | 10T |
柱式法核酸提取 | MolPure® Gel Extraction Kit瓊脂糖凝膠回收試劑盒 | 19101ES50 | 50T |
柱式法核酸提取 | MolPure® PCR Purification Kit PCR產物純化試劑盒 | 19106ES50 | 50T |
