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T5 Exonuclease是一種沿5'→3'方向降解DNA的核酸外切酶。它既能從DNA 5'末端起始消化，也可以從線性或環(huán)狀雙鏈DNA的缺口(gap)或缺刻(nick)處起始消化，但不會降解超螺旋雙鏈DNA?？蓱?yīng)用于無縫克?。ㄍ粗亟M克隆）、降解堿裂解提取質(zhì)粒中的變性DNA等。
圖1. T5 Exonuclease原理圖
切割：T5 Exonuclease從DNA片段的5'端切割一條鏈，產(chǎn)生DNA 3'突出末端。之后互補(bǔ)的DNA片段同源末端進(jìn)行退火配對結(jié)合，形成一個有間隙的環(huán)狀DNA；
填補(bǔ)：Phusion DNA高保真DNA聚合酶通過DNA合成填補(bǔ)間隙，產(chǎn)生一個只有缺刻的環(huán)狀DNA；
連接：Taq DNA連接酶通過形成磷酸二酯鍵修復(fù)缺刻，得到一個完整的雙鏈DNA，也就是完整的環(huán)狀質(zhì)粒。
圖2. 無縫克隆原理圖[1]
翌圣T5 Exonuclease(Cat#14538ES)由翌圣鎂孚泰生物ZymeEditor酶進(jìn)化平臺經(jīng)過重組表達(dá)獲得，無切口酶殘留，應(yīng)用于無縫克隆，陽性克隆率可達(dá)100%！
應(yīng)用到無縫克隆，陽性克隆100%
使用T5 Exonuclease進(jìn)行無縫克隆，分別連接2、3、4個片段，實驗結(jié)果表明，翌圣T5 Exonuclease運(yùn)用到無縫克隆中，陽性克隆率可達(dá)100%（12/12）。
圖3. 無縫克隆效果圖
無切口酶殘留
將30 U不同批次的T5 Exonuclease分別與相應(yīng)的底物DNA在37℃孵育4 h，瓊脂糖凝膠電泳檢測結(jié)果表明，翌圣T5 Exonuclease無切口酶殘留。
圖4. 切口酶檢測
應(yīng)用場景 | 產(chǎn)品名稱 | 產(chǎn)品貨號 |
Gibson組裝 | T5 Exonuclease | 14538ES |
Hieff Canace® Plus High-Fidelity DNA Polymerase 高保真DNA聚合酶 | 10153ES | |
Taq DNA連接酶 | 11051ES | |
無縫克隆 | Hieff Clone® Universal One Step Cloning Kit | 10922ES~10923ES |
質(zhì)粒抽提 | MolPure® Endo-free Plasmid Mini Kit 無內(nèi)毒素質(zhì)粒小量提取試劑盒 | 19021ES |
