漢遜酵母DNA殘留檢測試劑盒—高效助推乙肝疫苗新發(fā)展

漢遜酵母細胞應用及其殘留DNA質控

漢遜酵母是一種單細胞真核微生物，一種用于重組乙型肝炎疫苗生產的表達系統(tǒng)。漢遜酵母優(yōu)勢不僅在于易培養(yǎng)、繁殖快、便于遺傳操作、能對外源產物進行翻譯后加工和修飾，代謝產物無毒性等，還具耐高溫，能直接糖化和發(fā)酵木糖生產乙醇等特性。正是這些優(yōu)勢特征使得漢遜酵母迅速發(fā)展成為生物藥領域中熱門的細胞工廠之一，其潛力巨大，將為今后基因工程產品的開發(fā)和拓展提供重要的研究平臺。

漢遜細胞作為宿主工程細胞，重組漢遜酵母表達的乙型肝炎病毒表面抗原（HbsAg）經純化，加佐劑（氫氧化鋁、氯化鈉、硫柳汞）吸附后可制成重組乙型肝炎疫苗；且重組漢遜酵母細胞還可表達HPV31L1蛋白且所產生的HPV31L1蛋白可用于制備預防性HPV疫苗。盡管在漢遜酵母制備重組乙型肝炎疫苗和預防性HPV疫苗的生產過程中已有殘留DNA的去除工藝，但疫苗產品中仍有可能殘留宿主DNA及其片段。所以漢遜酵母檢測項目是生物制品生產工藝中重要的質量檢測指標之一。

殘留DNA風險及法規(guī)監(jiān)管要求

國內外監(jiān)管機構對于疫苗中的DNA殘留量和殘留片段的大小分布等有強烈的關注。針對不同宿主細胞、給藥方式和頻率，一般允許的宿主殘留DNA含量在100 pg~10 ng/劑之間。對于殘留DNA的最大可承受量為10 ng/劑，對于DNA大小片段的要求則為小于一個功能基因的長度。國家藥監(jiān)局藥審中心在今年5月發(fā)布的《體內基因治療產品藥學研究與評價技術指導原則（試行）》中明確建議漢遜酵母殘留片段大小控制在200bp以內。

殘留DNA檢測方法

《中華人民共和國藥典》2020年版第三部規(guī)定，外源性DNA殘留檢測采用DNA探針雜交法、熒光染料法和定量PCR法。目前市場上對宿主細胞殘留DNA檢測，主要采用熒光探針qPCR方法，qPCR法具有的靈敏度、序列特異性和準確性，可為生物制藥工業(yè)在工藝研究和成品質量控制方面提供可靠的檢測手段，現也已成為各生物制品廠家檢測方法。

為控制疫苗生產質量，需要對疫苗生產全過程進行安全性質量控制。針對重組乙型肝炎疫苗和預防性HPV疫苗生產過程中的半成品、原液和成品等樣本，翌圣生物從市場需求出發(fā)，自主研發(fā)了漢遜酵母宿主細胞DNA殘留檢測試劑盒，主要用于人重組乙型肝炎疫苗和人乳頭狀瘤病毒(HPV)疫苗研發(fā)和生產工藝過程中樣本殘留宿主細胞DNA雜質檢測。其能專一快速的檢測抗體藥、重組蛋白疫苗等生物制品研發(fā)和生產過程的中間品、半成品和成品中 DNA 殘留量。還研發(fā)了與漢遜酵母殘留DNA檢測試劑盒配套使用的宿主細胞殘留 DNA 樣本前處理試劑盒，以及配套的自動化核酸提取儀器。

漢遜酵母殘留DNA檢測Kit產品性能

靈敏度高：檢測下限可低至3 fg/μL；
準確性高：DNA參考品與國家標準物質標曲基本無偏差，檢測值CV＜5%；
精密度高：重復性CV值＜10%，好于行業(yè)標準（15%），中間精密度＜15%；
專屬性強：不同細胞系間無交叉反應；
定量準確：配套專屬磁珠法樣本前處理試劑盒；
操作時間短：3小時內完成全部檢測流程；
穩(wěn)定性好：多次反復凍融擴增效率仍較高，-20℃可儲存2年。

產品信息

產品	名稱	貨號	規(guī)格
樣本前處理試劑盒	MolPure® Magnetic Residual DNA Sample Preparation Kit磁珠法殘留DNA樣本前處理試劑盒（瓶裝）	18461ES	25T/100T
樣本前處理試劑盒	MolPure® Mag32 Residual DNA Sample Preparation Kit FA磁珠法殘留DNA樣本前處理試劑盒FA（預封裝）	18462ES	2×16 T/6×16 T
核酸提取儀器	Auto-Pure 32A automated nucleic acid extraction system Auto-Pure 32A全自動核酸提取儀	80501ES01	32通量
殘留DNA檢測試劑盒	Hansenula polymorpha Host Cell DNA Residue Detection Kit 漢遜酵母宿主細胞DNA殘留檢測試劑盒	41317ES	50T/100T

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