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近些年的體外診斷，接連遇到分子診斷和POCT即時診斷兩個重要風口，凍干形式的分子診斷試劑在全球受到了越來越多的應用。凍干關(guān)鍵原料的選擇和研制，影響體外診斷試劑各個項目的性能水平和應用價值，篩選到合適的原料是最重要的研發(fā)工作，也是診斷試劑成本構(gòu)成的最主要部分。
凍干試劑的研發(fā)包括原料與輔料的選擇、研發(fā)工藝與設(shè)備的選擇等，由于各個領(lǐng)域交叉相互干擾，研發(fā)周期可能會失控。以凍干原料篩選過程為例，凍干原料的篩選涉及原酶開發(fā)、原酶篩選、試劑開發(fā)、凍干打樣測試等環(huán)節(jié)。具體篩選過程如下圖所示：
圖1.凍干原料篩選過程
那如何能夠快速研發(fā)出分子診斷凍干試劑呢？
可以考慮市面上用標準引物探針測試過凍干前后性能均穩(wěn)定的試劑原料、凍干保護劑，參考凍干工藝，再搭配具體項目的引物探針進行測試，若測試通過則可以安排全體系凍干微芯打樣實驗，并測試性能，性能通過即可轉(zhuǎn)產(chǎn)放大，若測試不通過則可以與原料廠家進行定制化的優(yōu)化調(diào)試。
翌圣提供RT-qPCR mix可凍干原料
翌圣生物作為深耕于上游生命科學領(lǐng)域酶制劑的供應商，長期為IVD公司提供高品質(zhì)、高性價比的原料酶。且可為客戶提供定制優(yōu)化服務(wù)，盡可能縮短凍干試劑的研發(fā)周期。
Hifair® Lyo Multiplex One Step RT-qPCR Kit（Cat#11831）
該原料含有基因改造的雙封閉抗體封閉的Taq酶及深度優(yōu)化的多重反應緩沖體系，可極大地提高擴增靈敏度和特異性。由4×buffer、酶mix及凍干保護劑三個組分組成，便于液體版各組分體系微調(diào)。既可作為液體試劑直接使用，同時匹配凍干保護劑，可以直接用于凍干，進行凍干產(chǎn)品的開發(fā)。
部分性能展示
圖2. 使用Yeasen的RNA可凍干試劑（Cat#11831ES）分別進行原位凍干和凍干微芯，觀察凍干產(chǎn)品的凍干形態(tài)：凍干后凍干形態(tài)良好，原位凍干表面無塌陷，管內(nèi)無空隙；凍干球形態(tài)飽滿圓滑，大小均一。
圖3.使用Yeasen的RNA可凍干試劑（Cat#11831ES）凍干成凍干微芯后，在不同條件下（正常保存為T0時刻，50℃加速14天及25天）進行處理，同時擴增105 、104、103 copies/mL的新冠假病毒模板，結(jié)果顯示：凍干微芯熱加速前后Ct值、熒光值、球形等均無顯著變化，凍干產(chǎn)品穩(wěn)定性良好。
更快—超快速程序
圖4.使用Yeasen的RNA可凍干試劑（Catt#11831ES）凍干成凍干微芯后，進行熱加速處理，同時使用普通程序和超快速程序檢測IVA、IVB 及內(nèi)參模板，兩者Ct值、熒光值無顯著差異。由此可見：11831 ES凍干微芯T0時刻及熱加速后的產(chǎn)品，兼容常規(guī)程序和快速程序，性能穩(wěn)定。
可凍干產(chǎn)品推薦
產(chǎn)品類型 | 產(chǎn)品描述 | 產(chǎn)品名稱 | 貨號 |
qPCR | 可凍干預混液 | Hieff Unicon® Lyo-Ready I TaqMan Multiplex qPCR Mix | 11893ES |
RT-qPCR | 可凍干預混液 | Hifair® Lyo Multiplex One Step RT-qPCR Kit | 11831ES |
Hieff Unicon® V Lyo-nCoV Multiplex One Step RT-qPCR Kit (with MgCl2) | 13775ES | ||
Hifair® Lyo-nCoV Multiplex One Step RT-qPCR Kit | 13800ES | ||
凍干保護劑 | 凍干保護劑V2 | 13743ES | |
單酶原料 | Taq酶 | Hieff Unicon® Hotstart J-Taq DNA Polymerase, 6U/μL，Glycerol-free | 13705ES |
Hieff UNICON® HotStart E-Taq DNA Polymerase, Glycerol-free（5U/μL) | 14316ES | ||
逆轉(zhuǎn)錄酶 | 第五代耐熱逆轉(zhuǎn)錄酶（無甘油版） | 11301ES | |
UDG酶 | Uracil DNA Glycosylase (UDG), Heat-Labile (Glycerol-Free) | 10707ES | |
RNase抑制劑 | Murine RNase Inhibitor (200 U/μL, Glycerol-free) | 10703ES |
