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核酸電泳是進(jìn)行核酸研究的重要手段，是分離、鑒定和純化核酸的主要方法。核酸電泳一般有瓊脂糖凝膠電泳和聚丙烯酰胺凝膠電泳。瓊脂糖凝膠電泳是以瓊脂糖作為支持介質(zhì)的一種電泳方法，常用于DNA切膠回收，DNA分離和用于佐證DNA是否重組、質(zhì)粒是否切開等等，因其分離范圍較廣，在實(shí)驗(yàn)室中應(yīng)用廣泛。
操作流程
圖1.核酸電泳操作流程
電泳緩沖液制備
電泳緩沖液是核酸凝膠電泳系統(tǒng)的一個(gè)重要組成，主要作用是維持合適的pH，使溶液兩極的pH保持基本不變。且具有一定的導(dǎo)電性，利于核酸分子從負(fù)極遷移到正極。其成分及其離子強(qiáng)度影響物質(zhì)的電泳遷移率，內(nèi)含的EDTA可螯合Mg2+等二價(jià)陽離子，防止電泳時(shí)激活DNA酶及Mg2+與核酸生成沉淀，保護(hù)樣本的理化性質(zhì)不變。
核酸電泳緩沖液分為TAE緩沖液、TEB緩沖液、TPE緩沖液，因?yàn)殡p鏈線狀DNA在TAE的遷移率較其他兩種緩沖液更快，因此實(shí)驗(yàn)室多使用TAE電泳緩沖液。
50×TAE Buffer配制單如下表所示：（使用時(shí)需稀釋50倍）
試劑 | 稱量值 | 方法 |
Tris（氨基丁三醇） | 242 g | 置于1 L燒杯中，加入約600 mL去離子水，充分?jǐn)嚢杈鶆颍?/span> |
Na2EDTA·2H2O | 37.2 g | |
CH3COOH（冰乙酸） | 57.1 mL | 充分溶解后，用NaOH調(diào)pH至8.3，加去離子水定容至1 L。 |
配制瓊脂糖凝膠
瓊脂糖是純化的線性半乳聚糖親水膠體，提取自瓊脂或者含瓊脂的海藻。瓊脂糖的基本參數(shù)包括：硫酸鹽含量、凝膠強(qiáng)度、膠凝點(diǎn)、電內(nèi)滲（EEO）等。合適的瓊脂糖是核酸電泳跑出好膠的重要前提，翌圣高質(zhì)量瓊脂糖（Cat#10208ES），膠孔清晰、膠體不易斷，具備純度高（硫酸鹽含量低）、凝膠強(qiáng)度大、膠凝點(diǎn)相對高（常溫條件下凝固快）、電內(nèi)滲低等特點(diǎn)，是實(shí)驗(yàn)室DNA/RNA凝膠電泳的 。
產(chǎn)品優(yōu)勢
嚴(yán)格控制瓊脂糖參數(shù)，保證凝膠質(zhì)量
電滲值低（EEO≤0.13)，條帶分離效果好，分得開、跑得快；
圖2.不同濃度凝膠電泳圖
注：0.75%瓊脂糖凝膠上樣：1kb ladder，1%瓊脂糖凝膠上樣：100 bp ladder、1kb ladder、2000 DNA Marker、5000 DNA Marker，2%瓊脂糖凝膠上樣：100 bp ladder、2000 DNA Marker、5000 DNA Marker；上樣量：Marker 原液 2 μl 稀釋 5 倍后上樣 10 μl；0.75%、1%、2％瓊脂糖凝膠電泳程序分別為：115V，45min；130V，40 min；130V，50 min。
瓊脂糖凝膠電泳必然離不開核酸染料的加持，核酸染料一般是芳香環(huán)化合物，這些化合物能夠與DNA中的核苷酸發(fā)生靜電作用，從而將核酸染料吸附到DNA分子表面。分子中含有的環(huán)結(jié)構(gòu)可以吸收紫外線或藍(lán)光，并發(fā)出熒光。翌圣核酸染料YeaRed/YeaGreen是油性大分子產(chǎn)品，不能穿透細(xì)胞膜進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)，不易揮發(fā)升華，人體不會(huì)吸入，經(jīng)過艾姆斯氏和相關(guān)測試表明這兩種染料無明顯誘變性，是集高靈敏、低毒性和超穩(wěn)定于一身 的熒光核酸凝膠染色試劑。
瓊脂糖凝膠配制對照表
Marker選擇
DNA Marker是分子量不同的DNA片段的組合，主要用途為DNA分子凝膠電泳時(shí)，與樣品共同加入凝膠中進(jìn)行電泳分離，通過樣品條帶與DNA Marker對應(yīng)條帶大小及亮度的對比，可以粗略估算樣品DNA分子量的大小以及在溶液中的濃度。
目前翌圣生物DNA Marker分子量大小范圍覆蓋了從50 bp到15 kb的DNA片段，符合絕大多數(shù)實(shí)驗(yàn)需求。Marker上樣量通常為5-10 μL，如果大分子條帶彎曲、拖尾且分不開，可以將Marker原液2 µL稀釋5倍加10 µL，條帶清晰不拖尾。
小翌助您跑出的電泳圖，每天都出好數(shù)據(jù)。
相關(guān)產(chǎn)品如下表所示，歡迎選購。
產(chǎn)品定位 | 產(chǎn)品名稱 | 產(chǎn)品貨號 | 規(guī)格 |
高質(zhì)量瓊脂糖 | Agarose瓊脂糖 | 10208ES60/76 | 100 g/500 g |
Low Melting Point Agarose 低熔點(diǎn)瓊脂糖 | 10214ES25/60 | 25 g/100 g | |
3:1 Agarose 3:1瓊脂糖 | 10220ES25/60 | 25 g/100 g | |
High Sieving Agarose 高分辨率瓊脂糖(PCR級) | 10221ES08/25 | 5 g/25 g | |
Agarose Tablets 瓊脂糖(片劑,0.5 g/片) | 10226ES70 | 1盒（200片） | |
核酸染料 | YeaRed Nucleic Acid Gel Stain(10,000× in Water) YeaRed核酸染料(10,000× 水溶液) | 10202ES76 | 500 μL |
YeaGreen Nucleic Acid Gel Stain (10,000×in Water) | 10204ES76 | 500 μL | |
DNA Marker | GoldBand DL2,000 DNA Marker | 10501ES60 | 100 T |
GoldBand DL600 DNA Marker | 10502ES60 | 100 T | |
GoldBand DL5,000 DNA Marker | 10504ES60 | 100 T | |
GoldBand 100 bp DNA ladder | 10507ES60 | 100 T |
