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熔解曲線出現(xiàn)雙峰/多峰時,除了重新設(shè)計(jì)引物、排查污染源,怎么能讓雜峰出現(xiàn)的概率小一點(diǎn)?
低表達(dá)的基因檢測時,除了提高RNA投入量、減少cDNA的稀釋倍數(shù),怎么能讓Ct值更小一些?
Don’t Worry! 小翌來幫你(? •_•)?
Hieff UNICON® Advanced qPCR SYBR Master Mix
產(chǎn)品特點(diǎn)
特異性高:抗體法熱啟動&Buffer優(yōu)化,減少二聚體生成;
靈敏度高:可有效檢測低拷貝數(shù)模板;
高熒光值:熒光信號值更高,曲線線型更好,信噪比更高;
精密度好:可精準(zhǔn)區(qū)分2倍模板差異,復(fù)孔間差距??;
多平臺適用:適用于多種qPCR儀器,無需調(diào)整ROX濃度。
產(chǎn)品性能
特異性高
圖.以人源cDNA為模板,擴(kuò)增56組不同GC含量的基因片段(部分曲線如上方展示),結(jié)果顯示,11185ES的特異性優(yōu)于其他品牌,數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)顯示11185ES在這些樣本中非特異性概率約為5.4%,其他品牌在同種樣本中的非特異性概率約為53.6%。
靈敏度高
圖.分別在不同類型儀器上以101-107拷貝的IL23R質(zhì)粒為模板,擴(kuò)增IL23R基因。結(jié)果顯示在不同濃度模板下,11185ES的靈敏度更加優(yōu)秀,Ct值更小,同時熒光平臺期更高,曲線線型更好,信噪比更高。
精準(zhǔn)區(qū)分2倍模板差異
圖.分別以稀釋10倍、20倍、40倍、80倍、160倍、320倍、640倍的人源cDNA為模板,擴(kuò)增人GAPDH基因。測試結(jié)果顯示11185ES能有效區(qū)分2倍模板濃度差異。
*備注:模板濃度差5倍,Ct值則相差2.322,22.322=5
圖.分別以人源cDNA原液稀釋了20倍、100倍和200倍的cDNA為模板,擴(kuò)增60%GC含量的基因片段。數(shù)據(jù)顯示11185ES針對不同濃度模板的分辨率優(yōu)于其他品牌,且熒光值更高,曲線線型更好,信噪比更高。
穩(wěn)定性好
圖. 將試劑分別置于-20℃冰箱、干冰中(-78℃)反復(fù)凍融,以人源cDNA為模板,上機(jī)檢測不同類型的基因。結(jié)果顯示長時間放在-20℃冰箱中的試劑和反復(fù)凍融的試劑之間性能變化不大。
圖. 將試劑置于37℃環(huán)境中7天,以人源cDNA為模板,進(jìn)行上機(jī)檢測。結(jié)果顯示試劑穩(wěn)定性好,在37℃下放置7天,相較于良好保存的試劑,擴(kuò)增效率相差0.3%左右,性能變化不大。
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中國科學(xué)院
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