已知，生物技術(shù)藥物是指采用DNA重組技術(shù)或其他現(xiàn)代生物技術(shù)研制的蛋白質(zhì)或核酸類藥物。而蛋白質(zhì)藥物又包含多肽、單克隆抗體、基因工程抗體和重組疫苗等。因此，如何表達(dá)生產(chǎn)穩(wěn)定性高、純度好、質(zhì)量均一的蛋白質(zhì)是這些蛋白藥物的關(guān)鍵。蛋白表達(dá)系統(tǒng)的選擇對(duì)于研發(fā)和生產(chǎn)高效蛋白質(zhì)產(chǎn)品就變得尤為重要了，不同的表達(dá)系統(tǒng)提供了多種途徑，以滿足對(duì)于表達(dá)水平、折疊狀態(tài)、純度和可溶性等方面的不同需求。

目前常用的表達(dá)系統(tǒng)主要有：原核表達(dá)系統(tǒng)和真核表達(dá)系統(tǒng)兩大類，而原核表達(dá)系統(tǒng)中較常用的是大腸桿菌表達(dá)系統(tǒng)和枯草芽孢桿菌表達(dá)系統(tǒng)，真核表達(dá)系統(tǒng)中較常用的是酵母表達(dá)系統(tǒng)（eg.釀酒酵母和畢赤酵母）、哺乳動(dòng)物細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)（eg.CHO細(xì)胞、HEK293細(xì)胞等）和昆蟲/桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng)。其中，昆蟲/桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng)被認(rèn)為是具潛力的表達(dá)系統(tǒng)。

用桿狀病毒做載體，可高效表達(dá)外源基因。由于其可以對(duì)真核蛋白進(jìn)行翻譯后加工等過程而被廣泛地用于真核基因的體外表達(dá)。到目前為止，已有近千種異源蛋白在此系統(tǒng)中得到高效表達(dá)。這個(gè)表達(dá)體系的主要特點(diǎn)是可以獲得大量抗原性、免疫原性較好的，與天然蛋白功能相似的可溶性重組蛋白。這一特點(diǎn)優(yōu)于細(xì)菌、酵母和哺乳動(dòng)物細(xì)胞表達(dá)體系。由于這個(gè)載體系統(tǒng)的性質(zhì)，使其被廣泛地應(yīng)用于藥物開發(fā)、疫苗、促生長(zhǎng)因子、抑癌基因蛋白產(chǎn)物、免疫活性分子和基因表達(dá)調(diào)控等多個(gè)領(lǐng)域的研究中。

由于昆蟲是桿狀病毒的自然宿主，且每種桿狀病毒都只能感染一種或幾種昆蟲，不會(huì)感染其他動(dòng)物、植物及人類，所以認(rèn)為在應(yīng)用桿狀病毒進(jìn)行研究時(shí)不需考慮其安全性問題。

桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng)（Baculovirus expression system，BVES）就是以桿狀病毒作為外源基因載體，以昆蟲細(xì)胞作為宿主進(jìn)行外源蛋白生產(chǎn)的真核表達(dá)系統(tǒng)，由轉(zhuǎn)移質(zhì)粒、桿狀病毒載體和昆蟲宿主細(xì)胞系組成。BEVS最初是為了控制農(nóng)業(yè)害蟲而在20世紀(jì)70年代開發(fā)的，而隨著全球疫苗市場(chǎng)的擴(kuò)張，其逐漸引起疫苗生產(chǎn)商的關(guān)注。BVES具有易于規(guī)?；a(chǎn)、培養(yǎng)成本低、宿主殘留對(duì)脊椎動(dòng)物的生物安全性高等優(yōu)勢(shì)，現(xiàn)已作為一個(gè)成熟的外源蛋白表達(dá)平臺(tái)，在疫苗生產(chǎn)、基因治療和其他應(yīng)用中發(fā)揮有效作用。

常用的桿狀病毒載體包括苜蓿蠖核型多角體病毒（AcNPV）和家蠶核型多角體病毒（BmNPV），其中以AcMN-PV研究最為深入也常用。應(yīng)用較廣的昆蟲細(xì)胞系則主要有2種：草地夜蛾細(xì)胞系（Spodopteraugerda cell line，Sf），常用Sf21及其分離株Sf9細(xì)胞；粉紋夜蛾細(xì)胞系（Trichoplusia ni cell line，Tn），常用商品化的High Five™（Hi5）細(xì)胞。其中，Sf9細(xì)胞更適合于重組病毒擴(kuò)增及包裝，主要用于三個(gè)領(lǐng)域，即：生產(chǎn)重組蛋白、rAAV載體和疫苗。國(guó)際上已有Sf9細(xì)胞基質(zhì)流感疫苗批準(zhǔn)上市，另外還有一系列Sf9細(xì)胞系參與的生物制品正處于臨床試驗(yàn)階段。

桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞（Baculovirus-Sf9）表達(dá)平臺(tái)具有的優(yōu)勢(shì)，使其成為許多生物制品生產(chǎn)的有吸引力選擇。在此情況下，建立合適的檢測(cè)方法監(jiān)測(cè)生產(chǎn)工藝，控制Sf9細(xì)胞等宿主昆蟲細(xì)胞殘留核酸限度，以確保產(chǎn)品的安全性和質(zhì)量已經(jīng)成為監(jiān)管機(jī)構(gòu)和行業(yè)內(nèi)關(guān)注的重點(diǎn)。

嚴(yán)格的純化工藝可以去除一部分宿主細(xì)胞DNA（HCD）等殘留雜質(zhì)成分，但產(chǎn)品中仍然可能會(huì)有HCD殘留，這些殘留的外源宿主細(xì)胞DNA會(huì)引發(fā)潛在的安全問題（如潛在致瘤性、傳染性，甚至增加免疫源性或?qū)е峦蛔儯?，所以HCD檢測(cè)項(xiàng)目是生物制品生產(chǎn)工藝中重要的質(zhì)量檢測(cè)指標(biāo)之一。各國(guó)的藥典法規(guī)也相繼出臺(tái)了針對(duì)生物制品中外源宿主DNA殘留量限度的規(guī)定。

• 《中國(guó)藥典》2020年版三部規(guī)定，以細(xì)胞基質(zhì)生產(chǎn)的生物制劑外源宿主細(xì)胞DNA殘留量不能超過100pg/劑。

• 《歐洲藥典》（EP10.0）通則規(guī)定的生物制品殘留DNA限度大多為不超過10ng/劑。

• 美國(guó)食品藥品監(jiān)督管理局（FDA）發(fā)布的指導(dǎo)原則中指出生物制品宿主細(xì)胞DNA殘留限度不得超過100pg/劑，對(duì)于大劑量的生物制品（如單克隆抗體），根據(jù)其殘留DNA來源及給藥途徑，DNA殘留量可放寬至10ng/劑。

現(xiàn)行各國(guó)藥典中生物制品殘留DNA檢測(cè)方法主要有4種：雜交法、閾值法、熒光染料法和定量PCR法等。其中，qPCR法具有的靈敏度、序列特異性和準(zhǔn)確性，可為生物制藥工業(yè)在工藝研究和成品質(zhì)量控制方面提供可靠的檢測(cè)手段，現(xiàn)也已成為各生物制品企業(yè)檢測(cè)方法。

針對(duì)上述情況，翌圣生物自主研發(fā)了Sf9和桿狀病毒（AcNPV）DNA殘留檢測(cè)試劑盒，基于探針法熒光定量PCR原理，采用多重qPCR方法分別檢測(cè)Sf9和桿狀病毒（AcNPV）殘留DNA，Sf9定量限可達(dá)1fg/μL，桿狀病毒（AcNPV）定量限可達(dá)7copies/uL。還研發(fā)了與之配套使用的宿主細(xì)胞殘留DNA樣本前處理試劑盒，以及配套的自動(dòng)化核酸提取儀器。