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點(diǎn)突變試劑盒/QuikChange突變試劑盒系列

2016-2-18  閱讀(611)

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點(diǎn)突變試劑盒/QuikChange突變試劑盒系列

輕松實(shí)現(xiàn)準(zhǔn)確可靠的定點(diǎn)突
當(dāng)天即可完成的簡單實(shí)驗(yàn)方案,節(jié)省您的時(shí)間。QuikChange突變試劑盒采用了我們*的、一天內(nèi)即可完成的三步法,可在幾乎任何雙鏈質(zhì)粒模板中引入點(diǎn)突變、氨基酸替換、缺失突變和小插入突變,并且突變效率超過80%。這種簡單的三步法首先使用熱循環(huán)儀合成突變鏈,然后使用DpnI 降解親本DNA 模板,zui后通過轉(zhuǎn)化步驟完成實(shí)驗(yàn)(圖1)。該方法無需耗時(shí)的亞克隆、單鏈DNA 拯救或體外甲基化步驟。
減少不必要的錯(cuò)誤
在PCR 反應(yīng)過程中,錯(cuò)誤往往隨著每輪擴(kuò) 增循 環(huán) 而 逐 步 增 加 , 與 此 不 同 ,QuikChange方法采用了線性擴(kuò)增策略,只能以親本DNA作為模板進(jìn)行擴(kuò)增。由于循環(huán)次數(shù)少而模板起始量相對較高,因此可以確保以zui少的錯(cuò)配進(jìn)行穩(wěn)定的線性擴(kuò)增。為了保證只有親本鏈被復(fù)制,設(shè)計(jì)了可與親本鏈*匹配的互補(bǔ)引物。使用DpnI 酶處理擴(kuò)增產(chǎn)物,以消化dam 甲基化和半甲基化的親本鏈。這種非PCR 方法結(jié)合市場上保真度zui高的聚合酶,幾乎可*消除不需要的第二位點(diǎn)突變。

經(jīng)過優(yōu)化的試劑確保實(shí)驗(yàn)成
QuikChange 試劑盒包含所有必需試劑(包括對照),因此您什么都不缺。酶、緩沖液和dNTP經(jīng)過優(yōu)化,可節(jié)省時(shí)間并保持結(jié)果一致性。此外,我們所有試劑盒都包含Dpn I 酶和的感受態(tài)細(xì)胞。
引物設(shè)計(jì)更加容易
QuikChange 引物設(shè)計(jì)程序可幫助您設(shè)計(jì)突變引物,以進(jìn)行QuikChange 定點(diǎn)突變實(shí)驗(yàn)。
• 設(shè)計(jì)生成適用于點(diǎn)突變、缺失突變和插入突變的引物序列,設(shè)定*的解鏈溫度和自由能
• 為多位點(diǎn)突變和飽和突變提供建議
• 將導(dǎo)入的DNA 序列翻譯為氨基酸序列
• 支持我們所有QuikChange 定點(diǎn)突變試劑盒
定點(diǎn)突變領(lǐng)域的創(chuàng)新技
QuikChange Lightning定點(diǎn)突變試劑盒:功能強(qiáng)大的新工具在三小時(shí)內(nèi)即可引入點(diǎn)突變、插入突變或缺失突變,隨后便可進(jìn)行隔夜轉(zhuǎn)化,同時(shí)保持了QuikChange 試劑盒預(yù)期所能
達(dá)到的高準(zhǔn)確性和率(圖2)。由于采用了我們*的三步QuikChange實(shí)驗(yàn)方案及催化速度更快的酶,擴(kuò)增和篩選步驟所需時(shí)間得到了縮短。這些新型酶類僅為我們的QuikChange Lightning 定點(diǎn)突變試劑盒所*。


增強(qiáng)的持續(xù)合成能力可減少篩選時(shí)間
我們的QuikChange Lightning DNA聚合酶融合蛋白是配方,能夠以超高的保真度在更短的時(shí)間內(nèi)延伸突變引物。我們的QuikChange Lightning DNA融合型聚合酶具有增強(qiáng)的持續(xù)合成能力,極為準(zhǔn)確和,并能擴(kuò)增長片段靶序列,同時(shí)大幅減少延伸時(shí)間。•QuikChange LightningDNA 聚合酶融合蛋白具有更快的延伸時(shí)間(30 秒/kb)•Dpn I限制性內(nèi)切酶經(jīng)強(qiáng)化,只需5分鐘即可消化親本質(zhì)粒DNA,為您節(jié)省多達(dá)55 分鐘的時(shí)間
適合大片段質(zhì)粒
使用高保真酶來擴(kuò)增長片段靶序列非常關(guān)鍵,因?yàn)橥蛔冾l率隨擴(kuò)增子的增大而線性增大。該試劑盒適合富含G/C 的復(fù)雜質(zhì)粒和/或長達(dá)14 kb的大片段質(zhì)粒。我們的新型QuikChange Lightning 試劑盒包含我們的QuikSolution 試劑,可促進(jìn)大片段質(zhì)粒的復(fù)制。
• 我們的XL-10 Gold® 超級感受態(tài)細(xì)胞提高了轉(zhuǎn)化過程中DNA 的轉(zhuǎn)化效率
輕松進(jìn)行結(jié)構(gòu)域交換
通過結(jié)構(gòu)域交換實(shí)驗(yàn)可在相關(guān)基因序列之間交換區(qū)域,從而繪制同源蛋白質(zhì)之間的功能差異圖譜。按照常規(guī)作法,這些實(shí)驗(yàn)通常難度大,耗時(shí)多,因?yàn)閷?shí)驗(yàn)中要生成含尿嘧啶的ssDNA1或者依賴方便的限制性酶切位點(diǎn)2。與之相比,使用經(jīng)過改進(jìn)的新型QuikChange試劑盒可快速輕松地進(jìn)行DNA 序列3交換(圖3)。插入與缺失突變的理想之選通過插入與缺失突變研究能夠繪制基因的獨(dú)立功能區(qū)圖譜、改造載體、引入親和標(biāo)簽以及糾正移碼突變。我們使用QuikChange方法進(jìn)行小片段插入和缺失(zui多12 bp),可觀察到高于80% 的突變效率4。公司外部的許多其他研究者使用QuikChange方法或其改進(jìn)方法可以引入31 bp5、87 bp6 和3 kb的缺失或者31 bp以及高達(dá)約1 kb的插入片段。同結(jié)構(gòu)域交換實(shí)驗(yàn)一樣,這些QuikChange試劑盒改良方法簡單且,可用任何質(zhì)粒DNA 模板zui大限度地實(shí)現(xiàn)多種功能研究。Qcbio公司提供,切勿拷貝。


QuikChange II 定點(diǎn)突變試劑盒:成熟的技術(shù)
使用我們QuikChange II試劑盒,可以實(shí)現(xiàn)且準(zhǔn)確的定點(diǎn)突變,該試劑盒特點(diǎn)在于包含經(jīng)由基因工程改造而來,具有增強(qiáng)地糾錯(cuò)功能的PfuUltra DNA 聚合酶d。
QuikChange II XL:應(yīng)對條件挑戰(zhàn)的應(yīng)用
我們的QuikChange II XL 定點(diǎn)突變試劑盒a 專為大片段質(zhì)粒模板或者其它難突變質(zhì)粒模板的突變而設(shè)計(jì)。QuikChange IIXL試劑盒的特點(diǎn)在于其試劑成分專門設(shè)計(jì)用于提高DNA 復(fù)制和增強(qiáng)細(xì)菌轉(zhuǎn)化效率。前塵提供,切勿拷貝。
•QuikSolution 試劑可促進(jìn)大片段質(zhì)粒復(fù)制
• 與原有QuikChange 試劑盒采用的XL1-Blue® 細(xì)胞相比,XL-10 Gold 超級感受態(tài)細(xì)胞的轉(zhuǎn)化率是前者的5 倍。
QuikChange II-E:實(shí)現(xiàn)zui高的電穿孔轉(zhuǎn)化效率
我們的QuikChange II-E 定點(diǎn)突變試劑盒f專為那些需要將分離的突變克隆轉(zhuǎn)化進(jìn)電轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞的研究者設(shè)計(jì)。該試劑盒包含我們的XL1-Blue 電轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞,該感受態(tài)細(xì)胞具有四環(huán)素抗性并且具有*的電轉(zhuǎn)化效率。
 

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