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Murine RNase Inhibitor 鼠源RNase抑制劑
-------讓RNase無所遁形,使RNA完好無缺
RNase無處不在
在樣品材料準備時,或RNA純化時,亦或?qū)嶒灥姆磻?yīng)體系配制的過程中,均有可能引入RNase的污染。RNase可謂是*,無處不在。RNase的來源主要包括實驗人員的皮膚或唾沫等、槍頭等在內(nèi)的實驗耗材及配制反應(yīng)體系的各組分等。
關(guān)于RNase
RNase(Ribonuclease,核糖核酸酶)是一類能夠催化RNA降解為小分子RNA的核酸酶,分為核糖核酸內(nèi)切酶和 核糖核酸外切酶。前者主要包括RNase A、RNase H等,后者主要包括RNase R等。
RNase——特別是RNase A家族的成員——是一些微小緊湊的蛋白,它們含有一些半胱氨酸殘基能夠形成許多分子內(nèi)二硫鍵。因此在冷卻至室溫后,在無變性劑存在的條件下,變性的RNase會重新恢復其天然結(jié)構(gòu)及部分功能。因此,RNase在反復凍融,甚至高壓滅菌后仍會保留相當?shù)幕钚浴?/span>
RNase可降解RNA,即使痕量的RNase也會降低RNA的完整度。RNase是一類極度穩(wěn)定、不易失活的RNA“天敵”。
關(guān)于RNase Inhibitor
在細胞內(nèi),為避免RNase對RNA的降解,RNA通常會被5’端“加帽”、3’端“加A”或者形成RNA-蛋白復合體。而在分子生物學實驗時,避免RNase污染的zui主要手段就是使用RNase Inhibitor。
RNase Inhibitor是人的胎盤中存在的一種特異性RNase抑制劑,能夠特異地與RNase以非共價鍵結(jié)合形成復合體從而使RNase失活。
Murine RNase Inhibitor
與人源RNase inhibitor相比,Murine RNase Inhibitor不含人源蛋白中的兩個對氧化非常敏感的半胱氨酸,因而具有更高的抗氧化活性,且更加適合于對高DTT敏感性的實驗(如qPCR)。翊圣生物在成熟的蛋白表達和純化平臺基礎(chǔ)上,借助大腸桿菌表達系統(tǒng),并通過離子交換和親和層析而純化獲得純度達95%的重組鼠源RNase抑制劑。
產(chǎn)品特點
廣譜的RNase抑制活性:可抑制包括RNase A、RNase B、RNase C等在內(nèi)的RNase。
兼容廣泛的反應(yīng)條件:在pH 5.0至9.0條件下和25℃至55℃的溫度下都具有活性(60℃時仍保留部分活性)。
熱穩(wěn)定性的RNase抑制劑:適用于熱穩(wěn)定型逆轉(zhuǎn)錄酶(55℃-60℃)。
兼容廣泛的下游實驗:對SP6、T7或T3 RNA聚合酶,AMV、M-MLV逆轉(zhuǎn)錄酶和Taq DNA聚合酶酶活性無影響。
批間穩(wěn)定性:成熟的蛋白表達和純化平臺,可大規(guī)模生產(chǎn),保證批次間產(chǎn)品的穩(wěn)定性。
質(zhì)量控制
核酸外切酶殘留檢測:200U本品和0.6μg λ-Hind III在74℃下反應(yīng)1小時,DNA的電泳譜帶不發(fā)生變化。
核酸內(nèi)切酶殘留檢測:200U本品和0.6μg Supercoiled pBR322 DNA在74℃下反應(yīng)1小時,DNA的電泳譜帶不發(fā)生變化。
大腸桿菌殘留DNA殘留檢測:50μL體系中,加入200U本品,以ddH2O為模板,擴增E.coli 16s rDNA基因。35個循環(huán)后進行1%瓊脂糖凝膠電泳,EB染色,無擴增條帶。
純度測試:經(jīng)SDS-PAGE檢測,純度達95%以上。
產(chǎn)品應(yīng)用
1. RT-PCR 逆轉(zhuǎn)錄合成cDNA。
2. qRT-PCR 實時熒光定量PCR保護RNA。
3. in vitro transcription/translation 體外轉(zhuǎn)錄和翻譯系統(tǒng)中保護RNA。
4. 用于RNase保護實驗。
5. 輔助制備無Rnase 的抗體等。
實驗數(shù)據(jù)
圖1. RNase inhibitor抑制RNase A活性,保護RNA完整性。
1μL RNA inhibitor可有效抑制5ng RNase。1μg HEK細胞總RNA電泳結(jié)果。
FAQ
1. Murine RNase inhibitor是否會影響RT-PCR和qRT-PCR實驗?
答:不會影響。經(jīng)質(zhì)量測試,每批次Murine RNase inbitior均不含有基因組污染,可適用于RT-PCR和qRT-PCR實驗。
2. 在使用Murine RNase inhibitor配制反應(yīng)體系時,有什么注意事項?
答:配制體系時,在其他可能引入RNase污染來源的組分加入前,RNase inhibitor可首先加入。
訂購信息
產(chǎn)品貨號 | 產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 價格(元) |
10603ES05 | Murine RNase inhibitor (40U/μL) 鼠源RNase抑制劑 | 2KU | 216.00 |
10603ES10 | Murine RNase inhibitor (40U/μL) 鼠源RNase抑制劑 | 10KU | 916.00 |
10603ES20 | Murine RNase inhibitor (40U/μL) 鼠源RNase抑制劑 | 20KU | 1695.00 |
10603ES60 | Murine RNase inhibitor (40U/μL) 鼠源RNase抑制劑 | 100KU | 11865.00 |
HB170531