Hieff NGS^TM MaxUp DNA Library Prep Kit for Illumina^®

——DNA穩(wěn)定建庫

1、研發(fā)背景

穩(wěn)定的建庫產(chǎn)品，您用對了嗎？

DNA文庫制備是高通量測序前期的核心環(huán)節(jié)，文庫的產(chǎn)量與質(zhì)量直接決定了測序數(shù)據(jù)的產(chǎn)量與質(zhì)量。但目前市面上多數(shù)試劑盒的建庫方法，耗時、昂貴且操作非常繁瑣的。這些方法在性能方面也存在一定的缺陷：如僅適用于DNA量充足且品質(zhì)較好的樣本、Input DNA-片段化不*、常出現(xiàn)形成G尾、聚合物等副反應(yīng)或測序文庫表現(xiàn)出一定的偏好性等。這些情況顯著降低了DNA文庫的轉(zhuǎn)化率，并且極大影響后續(xù)測序數(shù)據(jù)的覆蓋度和準確度。

Yeasen MaxUp，您的高通量測序建庫的！

翊圣生物根據(jù)現(xiàn)狀，集中海內(nèi)外高通量測序領(lǐng)域的科研人員，歷時數(shù)年，開發(fā)了Hieff NGS^TM MaxUp DNA Library Prep Kit for Illumina^®常規(guī)DNA建庫試劑盒，從產(chǎn)品設(shè)計，產(chǎn)品原料選用，產(chǎn)品性能優(yōu)化，產(chǎn)品性能驗證，產(chǎn)品標準制定，到產(chǎn)品成型，產(chǎn)品規(guī)模化生產(chǎn)，每一步都在嚴苛的標準、精細的研究中，實現(xiàn)了產(chǎn)品品質(zhì)的飛躍。

Hieff NGS^TM MaxUp DNA Library Prep Kit for Illumina^®在文庫產(chǎn)量與質(zhì)量方面表現(xiàn)：DNA的文庫構(gòu)建步驟少、轉(zhuǎn)化率高，相對進口同款品牌至少高出20%，使文庫擴增循環(huán)數(shù)更低，顯著降低了測序數(shù)據(jù)的冗余度和偏好性。在建庫速度、簡便性、性價比以及樣本適用性方面，達到*品質(zhì)。

2、產(chǎn)品描述

Hieff NGS^TM MaxUp DNA Library Prep Kit for Illumina^®是針對Illumina^®高通量測序平臺專業(yè)開發(fā)設(shè)計的建庫試劑盒。本試劑盒可將低至1ng的微量片段化DNA制備成適用于Illumina^®測序平臺的文庫。該試劑盒精心優(yōu)化的配方體系，使他廣泛適用于各種DNA樣本。試劑盒整合了多個酶反應(yīng)步驟，提供簡并、線性化的操作方案，顯著提高DNA建庫效率。

Hieff NGS^TM產(chǎn)品具有嚴格的生產(chǎn)工藝，保證提供的每批次產(chǎn)品都經(jīng)過嚴格的質(zhì)量控制和功能驗證，zui高程度保障產(chǎn)品優(yōu)異性能與批間穩(wěn)定性。

1）2.75小時建庫

Hieff NGS^TM MaxUp DNA Library Prep Kit for Illumina^®提供簡并的、線性化的操作方案，將DNA建庫時間縮短至2.75小時以內(nèi)。

圖1 Hieff NGS^TM MaxUp DNA Library Prep Kit for Illumina^®相對進口品牌N*Ultra同類型產(chǎn)品，建庫更快。

2）文庫轉(zhuǎn)化率高

文庫轉(zhuǎn)化率，即DNA-片段轉(zhuǎn)化為雙端帶特定接頭DNA-片段的效率，是衡量建庫試劑盒效率的重要指標。文庫轉(zhuǎn)化率強烈影響文庫的多樣性和質(zhì)量，文庫轉(zhuǎn)化率高在一定程度上意味著測序覆蓋度更好。

圖2 Hieff NGS^TM MaxUp DNA Library Prep Kit for Illumina^®相對進口品牌N*Ultra同類型產(chǎn)品具有更高的文庫轉(zhuǎn)化率。

樣本：片段化E.coli gDNA。接頭比例：按各款試劑盒中推薦的數(shù)值。測定方法： qPCR文庫定量。

3）文庫擴增循環(huán)數(shù)少

獲得特定產(chǎn)量文庫所需的PCR循環(huán)數(shù)，是衡量試劑盒建庫效率的另一重要指標。PCR循環(huán)數(shù)不足，可能造成文庫產(chǎn)量低；PCR循環(huán)數(shù)過高，又將導(dǎo)致文庫偏好性增加、冗余度增加、嵌合產(chǎn)物增加、擴增突變積累等多種不良后果。在獲得相同產(chǎn)量文庫時，使用的PCR循環(huán)數(shù)越少，表示試劑盒的建庫效率更高。

表1 Hieff NGS^TM MaxUp DNA Library Prep Kit for Illumina^®相對進口品牌N*Ultra同類型產(chǎn)品具有更低的擴增循環(huán)數(shù)。

4）優(yōu)異的文庫質(zhì)量

使用Hieff NGS^TM MaxUp DNA Library Prep Kit for Illumina^®對100 ng E.coli gDNA建庫，所得文庫均為單一條帶，正態(tài)分布，無雜峰，片段大小符合測序要求。

圖3 Hieff NGS^TM MaxUp DNA Library Prep Kit for Illumina^®所建文庫Agilent 2100 Bioanalyzer檢測。

建庫樣本：片段化E. coli gDNA。雙輪分選比例（Post-adapter Ligation）：0.6×/0.2×和0.55×/0.15×。

5）的測序數(shù)據(jù)

測序數(shù)據(jù)是反映建庫試劑盒性能的zui重要指標。使用Hieff NGS^TM MaxUp DNA Library Prep Kit for Illumina^®和N*Ultra品牌同類型產(chǎn)品用于大腸桿菌基因組DNA文庫構(gòu)建，并使用Illumina^® Hiseq 4000平臺，以PE150模式進行測序。所得Q30、堿基質(zhì)量，Mapped Reads以及Coverage等方面均與品牌N*Ultra同類型產(chǎn)品相當，表現(xiàn)優(yōu)異。

表2 大腸桿菌K12菌株基因組DNA測序數(shù)據(jù)統(tǒng)計。

Input DNA: 100ng. Illumina Hiseq 4000, PE 150, reference genome: Escherichia coli str. K-12 substr. MG1655.

圖4. Yeasen樣品測序數(shù)據(jù)Fastqc報告（左：序列質(zhì)量分布；右：堿基分布）。

6）*的性價比

Yeasen致力于為您提供的產(chǎn)品??！

圖5 Hieff NGS^TM MaxUp DNA Library Prep Kit for Illumina^®性價比更高。

3、產(chǎn)品應(yīng)用：

將1ng-1μg片段化DNA制備成適用于Illumina^®測序平臺的文庫。

4、文獻引用

[1] Head S R, Komori H K, LaMere S A, et al. Library construction for next-generation sequencing: overviews and challenges[J]. Biotechniques, 2014, 56(2): 61.

[2] Parkinson N J, Maslau S, Ferneyhough B, et al. Preparation of high-quality next-generation sequencing libraries from picogram quantities of target DNA[J]. Genome research, 2012, 22(1): 125-133.

[3] van Dijk E L, Jaszczyszyn Y, Thermes C. Library preparation methods for next-generation sequencing: tone down the bias[J]. Experimental cell research, 2014, 322(1): 12-20.

[4] Wolf K, O'Neil D, Schroeer S, et al. Next‐Generation Sequencing Library Preparation from FFPE Tissue Samples[J]. Current Protocols in Molecular Biology, 2016: 7.24. 1-7.24. 14.

[5] Apone L, Liu P, Panchapakesa V, et al. Enhancing clinical utility of NGS with reduced bias, low DNA input, library construction[J]. 2016.

5、常見問題

Q: 該款試劑盒適用于哪些樣本的建庫？

A：本試劑盒適用于所有樣本的DNA建庫。

Q: 在使用該款試劑盒時，不同類型的樣本的Input DNA量應(yīng)為多少？

A：Input DNA特指投入末端修復(fù)/dA尾添加步驟中的DNA。下表列舉了本試劑盒在常見應(yīng)用中推薦的Input DNA量。

表1 常見應(yīng)用中推薦Input DNA量

【注】：上表為使用高質(zhì)量DNA時推薦的Input DNA量，當Input DNA質(zhì)量較差或需要進行片段分選時，應(yīng)適當上調(diào)使用量。

Q: 文庫制備過程中，是否需要片段長度分選？

A：文庫制備過程中需要進行片段長度分選。分選步驟可選擇在末端修復(fù)/dA尾添加之前，或在接頭連接之后，或在文庫擴增之后進行。當Input DNA質(zhì)量≥50ng，您可選擇在接頭連接后分選；如Input DNA質(zhì)量<50ng，建議您在文庫擴增后進行分選。

Q: 使用該款試劑盒所得的文庫是否可以用于Ion Torrent平臺？

A：本款試劑盒針對Illumina^®平臺開發(fā)，所得文庫僅適用于Illumina^®平臺。

Q: 產(chǎn)品的有效期與保存方法？

A：產(chǎn)品所有組分-20°C保存，有效期1年。

Q: 純化和分選步驟，可以使用哪些磁珠？

A：純化和分選步驟，建議使用Hieff NGS^TM DNA Selection Beads（Cat#12601）或AMPure XP Beads（Cat#A63880）或其他等效產(chǎn)品。

6、訂購信息

7、相關(guān)產(chǎn)品推薦

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