Hieff NGS^TM cfDNA Clean Beads (100-200 bp)

產(chǎn)品信息

產(chǎn)品描述

cfDNA提取過(guò)程中，常會(huì)引入大片段DNA或gDNA的污染。常規(guī)情況下，這些污染物可以通過(guò)對(duì)目的片段進(jìn)行磁珠分選回收而去除。但是，由于cfDNA僅有170 bp左右，常用的AMPure XP或SPRI Select磁珠對(duì)100-200 bp的回收效率較低，無(wú)法獲得理想的cfDNA回收效果。

Hieff NGS^TM cfDNA Clean Beads (100-200 bp)是針對(duì)上述問(wèn)題的解決而專門設(shè)計(jì)的磁珠類產(chǎn)品，其基于SPRI (Solid Phase Reverse Immobilization)原理制備，配合精心優(yōu)化的緩沖體系和已經(jīng)驗(yàn)證的操作體系，可精確回收100-200 bp cfDNA，有效去除大片段DNA和gDNA的污染，同時(shí)具有操作簡(jiǎn)單、回收率高（>95%）等優(yōu)勢(shì)。使用本品獲得的cfDNA產(chǎn)物，可直接應(yīng)用二代測(cè)序文庫(kù)構(gòu)建、克隆、酶切、連接等反應(yīng)。本產(chǎn)品中提供的所有試劑組分均經(jīng)過(guò)嚴(yán)格質(zhì)檢，zui高程度保障產(chǎn)品優(yōu)異性能與批間穩(wěn)定性。

運(yùn)輸與保存方法

冰袋運(yùn)輸。2-8℃保存，效期一年。避免冷凍！

注意事項(xiàng)

1）為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

2）磁珠使用前須在室溫平衡至少30 min。

3）80%乙醇需現(xiàn)用現(xiàn)配，否則將影響回收效率。

4）進(jìn)行長(zhǎng)度分選時(shí)，初始樣品體積需≥50 μL，不足時(shí)請(qǐng)用超純水補(bǔ)齊。樣品體積太小，將導(dǎo)致移液誤差增大，進(jìn)而影響分選的準(zhǔn)確性。

使用方法

1. 準(zhǔn)備工作

將磁珠由冰箱中取出，室溫平衡至少30 min。配制80%乙醇。

2. 長(zhǎng)度分選（雙輪法）

長(zhǎng)度分選操作流程如圖1所示，具體操作如下。

圖1 雙輪分選操作流程。

表1磁珠cfDNA-片段回收推薦比例

注：“×”表示樣品DNA體積。若樣品DNA體積為100 mL，則*輪磁珠使用體積為0.47×100 mL=47 mL；第二輪磁珠使用體積為0.33×100 mL=33 mL。

1）請(qǐng)渦旋振蕩或充分顛倒磁珠以保證混勻。

2）根據(jù)要求，參考表1向DNA溶液中加入第一輪分選磁珠，渦旋混勻或移液器吹打10次混勻。

3）室溫孵育5 min。

4）將離心管短暫離心并置于磁力架中，待溶液澄清后（約5 min），小心轉(zhuǎn)移上清到干凈的離心管中。【注意：轉(zhuǎn)移上清時(shí)，請(qǐng)勿吸取磁珠，即使微量殘留都將影響后續(xù)文庫(kù)質(zhì)量?！?/span>

5）參考表1向上清中加入第二輪分選磁珠。

6）渦旋混勻或移液器吹打10次混勻，室溫靜置5 min。

7）將離心管短暫離心并置于磁力架中，待溶液澄清后（約5 min），小心移除上清。

8）保持EP管始終處于磁力架中，加入200 μL新鮮配制的80%乙醇漂洗磁珠，室溫孵育30 sec，小心移除上清。

9）重復(fù)步驟8。

10）保持離心管始終處于磁力架中，開(kāi)蓋干燥磁珠至剛剛出現(xiàn)龜裂（約5 min）。【注意：切記磁珠不要干燥時(shí)間太久，磁珠干燥過(guò)度將影響純化效果?！?/span>

11）將離心管從磁力架中取出，加入適量ddH₂O（≥20 μL），渦旋振蕩或使用移液器輕輕吹打充分混勻，室溫靜置5 min。

12）將離心管短暫離心并置于磁力架中分離磁珠和液體。待溶液澄清后（約5 min），小心吸取上清至干凈的管中，即完成分選。

3. 文庫(kù)大小分選參考條件

使用Hieff NGS^TM cfDNA Clean Beads以0.47×/0.33×的雙輪分選比例，回收100-200 bp DNA-片段。結(jié)果顯示：Hieff NGS^TM cfDNA Clean Beads的回收率高達(dá)95%以上（表2），且?guī)缀?去除了大片段污染（圖2）。

圖2. 模擬cfDNA純化結(jié)果。

陰性對(duì)照為20 bp ladder和100 bp ladder等比例混合物（紅色），使用cfDNA Clean Beads對(duì)混合物進(jìn)行0.47×/0.33×分選（綠色和藍(lán)色，平行重復(fù)）。

表2. 雙輪回收后100-200 bp各片段的回收率統(tǒng)計(jì)。

HB170811