伴刀豆球蛋白A磁珠是表面共價偶聯(lián)了伴刀豆球蛋白 A（ConA）的超順磁性聚合物微球，具有單分散和磁反應(yīng)性強等特點。ConA磁珠在Ca2+和Mg2+存在的情況下，通過伴刀豆球蛋白 A與末端α-D-甘露糖基和α-D-葡萄糖基的親和作用，快速高效地分離純化多糖、糖蛋白和糖脂等生物分子，而且使用ConA磁珠分離或固定細胞非常便捷，并在后續(xù)清洗過程中大程度減少細胞丟失，也可以用于收集和固定細胞核，也可以直接用于CUT & Run和CUT & Tag（ChIP-seq實驗的革新性技術(shù)）等實驗。

產(chǎn)品性質(zhì)

儲存條件

2~8℃保存，有效期2年。

使用說明

以捕獲細胞和純化糖蛋白為例，用于Cut-Tag具體操作見12598ES試劑盒。

1. 緩沖液配置

1）自備試劑

2）自備設(shè)備和耗材：磁性分離架，旋轉(zhuǎn)混合儀，PCR管，微量移液器及吸頭（RNase-free）。

3）將磁珠恢復(fù)至室溫，且均勻重懸。

2. 樣品準(zhǔn)備（以哺乳動物細胞為例）

1）準(zhǔn)備哺乳動物細胞(1.0×104~1.0×105個)，離心收集(4℃，600×g，3~5min)，小心吸棄上清；

2）加入 140 μL 結(jié)合緩沖液 ，充分混勻重懸細胞，離心收集(4℃，600×g，3~5min)，小心吸棄上清；

3）加入 90 μL 結(jié)合緩沖液，充分混勻重懸細胞。

【注】：貼壁較緊的細胞可使用   等部分消化獲得，對于動物組織、植物或真菌細胞可通過特殊處理獲得分散的細胞或原生質(zhì)體進行實驗。

3. 磁珠準(zhǔn)備

1）吸取10 μL均勻重懸的 Con A磁珠，加入40 μL 磁珠結(jié)合液，吹吸混合，磁吸棄上清。

2）加入10 μL 磁珠結(jié)合液，吹吸混合。

4. 細胞捕獲

1）將重懸在結(jié)合液中的ConA磁珠（步驟3）輕輕滴加在細胞懸液（步驟2）中，顛倒5次混勻后，置于旋轉(zhuǎn)儀上混勻，室溫孵育30 min 或者4 ℃過夜。

2）離心管在磁力架上放置1 min，吸棄上清。

3）取500ul清洗液加入磁珠中，用移液器輕柔吹打，重懸磁珠，再置于磁力架1 min，吸棄上清。

4）重復(fù)步驟3）洗滌3-4次。

5. 洗脫

1）糖蛋白的洗脫：加入50~250 μL洗脫液，置于翻轉(zhuǎn)混合儀上室溫孵育10~30 min，接著在磁力架上靜置 1 min，收集上清得到糖蛋白，可用于SDS-PAGE電泳或Western檢測

【注】：也可使用PNGase F酶切除糖基進行洗脫。

2）細胞的洗脫：磁珠粒徑小，對細胞的生長和活性影響較小，也可以選擇不洗脫。

注意事項

1. 磁珠應(yīng)避冷凍，否則可能會導(dǎo)致磁珠碎裂，性能下降。

2. 磁珠取用前應(yīng)恢復(fù)至室溫，且充分混勻；但不要劇烈震蕩，否則容易產(chǎn)生氣泡。

3. 建議樣本細胞活性不低于80% (細胞活性可以用臺盼藍染色來鑒定)。

4. ConA在Ca2+和Mn2+離子存在時才有活性，實驗中應(yīng)用的溶液不能含有EDTA等螯合劑，否則會導(dǎo)致結(jié)合效率降低。

5. 水平旋轉(zhuǎn)時定時輕彈底部混勻，細胞量較多時易聚集干結(jié)。

6. 槍頭吸吹時要緩慢，避免產(chǎn)生過多氣泡；避免用10 μL小槍頭吹吸細胞；

7. 吸除管內(nèi)液體時，槍頭遠離磁珠一端，避免槍頭粘連帶出磁珠。

8. 針對特定細胞類型和細胞量，可能需要增減磁珠用量以達到優(yōu)效果。

9. 本產(chǎn)品僅作科研用途！

10. 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。