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翌圣生物科技（上海）股份有限公司
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41102ESLentiviral Packaging Kit
| 參考價: | 面議 |
具體成交價以合同協(xié)議為準- 41102ES 產(chǎn)品型號
- Yeasen/翌圣生物 品牌
- 生產(chǎn)商 廠商性質(zhì)
- 上海市 所在地
訪問次數(shù)：859更新時間：2025-07-16 13:01:05
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- 網(wǎng)址：
- www.yeasen.com
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產(chǎn)品簡介
| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 貨號 | 41102ES |
|---|---|---|---|
| 應(yīng)用領(lǐng)域 | 醫(yī)療衛(wèi)生,化工,生物產(chǎn)業(yè) |
產(chǎn)品介紹
產(chǎn)品詳情
產(chǎn)品介紹
翌圣慢病毒包裝試劑盒（Lentiviral Packaging Kit）由優(yōu)化的慢病毒包裝輔助質(zhì)?；旌衔铮↙entiviral Mix）、表達eGFP蛋白的對照質(zhì)粒和高效轉(zhuǎn)染試劑（HG TransgeneTM Reagent）組成，可以兼容第二代和第三代的慢病毒包裝質(zhì)粒，且具有慢病毒包裝時間周期短（一周之內(nèi)即可拿到純化好的高滴度慢病毒）、病毒滴度高的優(yōu)勢，可應(yīng)用于針對不同基因和藥物靶標的臨床前細胞學實驗和整體動物實驗。非常適合于病毒包裝初試者。
產(chǎn)品特色
產(chǎn)品組分
| 類別 | 組分編號 | 組分名稱 | 儲存 | 產(chǎn)品編號/規(guī)格 | ||
| 41102ES10（10T） | 41102ES20（20T） | 41102ES40（40T） | ||||
| Part Ⅰ | 41102-A | Lentiviral Mix(1 μg/μL) | -25~-15℃ | 100 μL | 200 μL | 400 μL |
| 41102-C | eGFP 對照質(zhì)粒（Amp+） | -25~-15℃ | 1.5 μg | 1.5 μg | 1.5 μg | |
| Part Ⅱ | 41102-B | HG TransgeneTM Reagent | 2~8℃ | 0.6 mL | 1.2 mL | 2×1.2 mL |
應(yīng)用案例
慢病毒包裝所需其他材料（選用）
1）DMEM：Yeasen
2）FBS：Yeasen
3）Penicillin-Stretomycin：Yeasen
4）HEK 293T/293FT：慢病毒包裝及低度檢測所用工具細胞（HEK293T）
5）Antibiotics：Yeasen 用于穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細胞株篩選，如Puromycin，G418等
6）Competent cells：Yeasen
病毒包裝前的準備
慢病毒表達載體：包含病毒包裝，侵染和將病毒重組基因整合到基因組DNA中以便表達目的基因或者shRNA的基本元件。
DNA溶液的制備：以質(zhì)粒抽提試劑盒提取慢病毒包裝系統(tǒng)中各種質(zhì)粒DNA，質(zhì)粒DNA溶于無菌的TE或ddH2O中，以紫外光吸收法測定其濃度及純度，保證所提質(zhì)粒DNA 的A260/A280在1.8～2.0之間。
細胞狀態(tài)：良好的細胞狀態(tài)對病毒的包裝至關(guān)重要，避免細胞培養(yǎng)基有細菌、真菌或支原體的污染，盡量使用傳代次數(shù)較少的細胞，如果細胞是剛復(fù)蘇的話，最好傳兩代之后再包裝。
慢病毒包裝
翌圣生物慢病毒載體表達系統(tǒng)由pGMLV慢病毒載體和Lentiviral Mix質(zhì)粒組成。pGMLV慢載體中含有HIV的基本元件5’LTR和3’LTR以及其他輔助元件，例如WPRE和cPPT/CTS等。翌圣可以根據(jù)不同的實驗?zāi)康尼槍GMLV載體改造以進行啟動子活性研究、基因表達研究、RNA干擾等研究。Lentiviral Mix能夠表達病毒包裝需要的各種必需成分如：gag基因，編碼病毒主要的結(jié)構(gòu)蛋白；pol基因，編碼病毒特異性的酶；rev基因，編碼調(diào)節(jié)gag和pol基因表達的調(diào)節(jié)因子；還含有單純皰疹病毒來源的VSV-G基因，提供病毒包裝所需要的包膜蛋白，可以兼容第二代和第三代的慢病毒包裝質(zhì)粒。
使用流程
制備編碼慢病毒顆粒的重組病毒質(zhì)粒及其輔助包裝原件載體質(zhì)粒，重組質(zhì)粒載體和輔助質(zhì)粒載體分別進行高純度無內(nèi)毒素抽提，使用HG TransgeneTM Reagent進行共轉(zhuǎn)染293T細胞，轉(zhuǎn)染后18 h 更換為完quan培養(yǎng)基，培養(yǎng)48 h后，收集富含慢病毒顆粒的細胞上清液，對其濃縮后得到高滴度的慢病毒濃縮液，在293T細胞中測定病毒滴度。在一定滴度范圍內(nèi)的慢病毒顆?？梢詽M足大部分體內(nèi)體外實驗需求。
1）293T細胞分盤：轉(zhuǎn)染前一天，將已經(jīng)長好的細胞以合適比例傳代到10 cm培養(yǎng)皿中，當細胞長到~80%時準備轉(zhuǎn)染。
2）轉(zhuǎn)染前換液：轉(zhuǎn)染前1~2 h 將需要轉(zhuǎn)染的細胞換新鮮的培養(yǎng)基，12 mL/10 cm皿。注意：293T細胞貼壁性不是很好，換液時應(yīng)小心滴加盡量避免沖起細胞。
3）轉(zhuǎn)染：取無菌的1.5 mL EP管或15 mL離心管，按下列組分配制反應(yīng)體系：
| 無血清DMEM | 1 mL |
| DNA | 10 μg |
| Lentiviral Mix | 10 μL(10 μg) |
| HG TransgeneTM Reagent | 60 μL |
混勻后，室溫放置18 min~20 min后，均勻滴加到提前換過液的培養(yǎng)皿中，后置于CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
4）換液：轉(zhuǎn)染18~20 h后，小心吸掉細胞培養(yǎng)液棄于盛有消毒液的廢液杯中（注意：此時培養(yǎng)基中已含有少量的病毒，必須經(jīng)處理后才能丟棄，所用的移液槍頭等必須經(jīng)消毒液浸泡處理后才能丟棄），然后加15 mL新鮮的培養(yǎng)基（也可根據(jù)實驗要求換為無血清的DMEM）繼續(xù)培養(yǎng)。
5）病毒收集：換液48 h后，吸取細胞上清液于50 mL離心管，4℃，500 g離心5 min，上清液用0.45 μm濾器過濾后轉(zhuǎn)移到新的離心管中。此時上清液中的病毒顆?？梢灾苯尤z測滴度或者感染目的細胞，如果對病毒的滴度及純度有較高要求，可對上清液進行濃縮與純化。
6）病毒分裝與保存：將病毒以40~50 μL分裝，后保存于-80℃。
存儲條件
冰袋運輸。HG TransgeneTM Reagent（41102-B）2~8 ℃保存，其余組分（41102-A、41102-C）均于-25~-15℃保存，有效期1年半。
FAQ
Q:慢病毒包裝試劑盒中是否含有 pGMLV 慢病毒載體？穩(wěn)轉(zhuǎn)怎么篩選？還需要再額外購買其他質(zhì)粒嗎？
A: 含有該載體；穩(wěn)轉(zhuǎn)篩選所用為Puromycin，G418；后期分選為熒光篩選；只需要客戶另外準備目的質(zhì)粒。
Q: 慢病毒包裝試劑盒中 pGMLV 慢病毒載體，有質(zhì)粒（陽性對照）序列嗎？
A: 慢病毒包裝，一般用三質(zhì)?；蛘咚馁|(zhì)粒系統(tǒng)，分別構(gòu)建病毒的不同組件，我們的慢病毒包裝試劑盒，提供陽性對照的質(zhì)粒，但是：
（1）質(zhì)粒序列都不提供；
（2）質(zhì)粒的酶切位點不能提供。
Q: 為什么容易個試劑盒包裝的病毒感染成功了，有的卻感染不成功？
A:
①質(zhì)粒構(gòu)建有問題，如果不是同一個質(zhì)粒，可以質(zhì)粒測序確定質(zhì)粒是否正確，是否有移碼或者脫靶問題；
②如果質(zhì)粒沒問題，可能是慢病毒載體不正確導(dǎo)致病毒包裝不成功，我們試劑盒是兼容二代，三代的慢病毒載體；
③如果以上兩種都沒問題，可能是感染的細胞是懸浮細胞或者是貼壁不牢的細胞，可以使用聚凝胺增加病毒感染率或者是使用腺病毒包裝。
Q: 轉(zhuǎn)染試劑放-20了，還可以再用嗎？
A: 不建議用了，轉(zhuǎn)染試劑是脂質(zhì)體的，不能冰凍。
Q: 慢病毒包裝試劑盒中陽性對照：eGFP 對照質(zhì)粒（Amp+）的推薦引物序列是什么？
A: GFP-qF:TGTTCACCGAGTACCCCCAG；GFP-qR:CGCCGTAGAACTTGGACTCG。
產(chǎn)品文檔
COA
已發(fā)表文獻
[1] Bai D, Du J, Bu X, et al. ALDOA maintains NLRP3 inflammasome activation by controlling AMPK activation. Autophagy. 2022;18(7):1673-1693. doi:10.1080/15548627.2021.1997051(IF:16.016)
[2] Hu P, Li H, Sun W, et al. Cholesterol-associated lysosomal disorder triggers cell death of hematological malignancy: Dynamic analysis on cytotoxic effects of LW-218. Acta Pharm Sin B. 2021;11(10):3178-3192. doi:10.1016/j.apsb.2021.02.004(IF:11.614)
[3] Xu C, Wu J, Wu Y, et al. TNF-α-dependent neuronal necroptosis regulated in Alzheimer's disease by coordination of RIPK1-p62 complex with autophagic UVRAG. Theranostics. 2021;11(19):9452-9469. Published 2021 Sep 13. doi:10.7150/thno.62376(IF:11.556)
[4] Hu P, Wang J, Qing Y, et al. FV-429 induces autophagy blockage and lysosome-dependent cell death of T-cell malignancies via lysosomal dysregulation. Cell Death Dis. 2021;12(1):80. Published 2021 Jan 13. doi:10.1038/s41419-021-03394-4(IF:8.469)
[5] Qing Y, Li H, Zhao Y, et al. One-Two Punch Therapy for the Treatment of T-Cell Malignancies Involving p53-Dependent Cellular Senescence. Oxid Med Cell Longev. 2021;2021:5529518. Published 2021 Sep 21. doi:10.1155/2021/5529518(IF:6.543)
[6] Cao B, Deng H, Cui H, et al. Knockdown of PGM1 enhances anticancer effects of orlistat in gastric cancer under glucose deprivation. Cancer Cell Int. 2021;21(1):481. Published 2021 Sep 10. doi:10.1186/s12935-021-02193-3(IF:5.722)
[7] Qing Y, Wang X, Wang H, et al. Pharmacologic targeting of the P-TEFb complex as a therapeutic strategy for chronic myeloid leukemia. Cell Commun Signal. 2021;19(1):83. Published 2021 Aug 9. doi:10.1186/s12964-021-00764-5(IF:5.712)
[8] Gao Z, Zhong M, Ye Z, et al. PAK3 promotes the metastasis of hepatocellular carcinoma by regulating EMT process. J Cancer. 2022;13(1):153-161. Published 2022 Jan 1. doi:10.7150/jca.61918(IF:4.207)
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