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參考價(jià): | 面議 |
- 10624ES86 產(chǎn)品型號(hào)
- Yeasen/翌圣生物 品牌
- 生產(chǎn)商 廠商性質(zhì)
- 上海市 所在地
訪問次數(shù):426更新時(shí)間:2023-03-15 09:00:10
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- 上海市浦東新區(qū)天雄路166弄1號(hào)3樓
- 網(wǎng)址:
- www.yeasen.com
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供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 2500U |
---|---|---|---|
貨號(hào) | 10624ES86 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 醫(yī)療衛(wèi)生,化工,生物產(chǎn)業(yè) |
產(chǎn)品信息
產(chǎn)品名稱 | 產(chǎn)品編號(hào) | 規(guī)格 | 價(jià)格(元) |
UCF.ME®T7 RNA Polymerase GMP-grade(50 U/μL) | 10624ES86 | 2500 U | 2655 |
10624ES90 | 5000 U | 4855 | |
10624ES96 | 25000 U | 20155 | |
10624ES97 | 50000 U | 36255 |
產(chǎn)品描述
本產(chǎn)品是大腸桿菌重組表達(dá)來源的噬菌體T7 RNA聚合酶,以含有T7啟動(dòng)子序列(5’-TAATACGACT CACTATAG*-3’)的雙鏈DNA為模板,以NTP為底物,合成與啟動(dòng)子下游的反向單鏈DNA互補(bǔ)的RNA。雙鏈線性平末端或5’突出末端DNA均可作為T7 RNA聚合酶的底物模板,因此線性質(zhì)粒、PCR產(chǎn)物均可用作體外合成RNA的模板。
注:G*為RNA轉(zhuǎn)錄的第一個(gè)堿基。
本品是按照GMP工藝要求生產(chǎn),產(chǎn)品以無菌液體形式提供。
產(chǎn)品性質(zhì)
來源(Source) | 重組E. coli |
最適溫度(Optimum Temperature) | 37℃ |
宿主核酸殘留(Host nucleic acid residue) | <10 fg/U |
宿主蛋白殘留(Host protein residue) | <50 ppm |
病原體(HBV/ HCV/HIV)檢測(cè) | 無檢出 |
RNA酶殘留(RNase residue) | 陰性 |
內(nèi)毒素殘留(Endotoxin residue) | <10 EU/mg |
支原體檢測(cè)(Mycoplasma detection) | 無檢出 |
無菌檢測(cè)(Sterility testing) | 無檢出 |
儲(chǔ)存緩沖液(Storage Buffer) | 50 mM Tris-HCl, 1 mM EDTA, 10 mM DTT, 100 mM NaCl, 0.1% Triton X-100,50%(v/v)甘油,pH7.9@25℃ |
活性單位定義(Unit Definition) | 在37℃、pH 8.0的條件下,1 h內(nèi)使 1 nmol 的 [3H] GMP 摻入酸不溶性沉淀物所需要的酶量定義為1個(gè)活性單位。 |
注:具體產(chǎn)品質(zhì)檢數(shù)據(jù)及更多指標(biāo)請(qǐng)查看批次質(zhì)檢報(bào)告
產(chǎn)品組分
注:10×Transcription Buffer中含60 mM MgCl2和100 mM DTT,但不含有NTP,如需請(qǐng)購(gòu)買本公司NTP set solution 10133。
產(chǎn)品應(yīng)用
1. 單鏈 RNA合成(包括mRNA,siRNA,gRNA等各類RNA前體,以及同位素標(biāo)記或非同位素標(biāo)記的RNA探針)
2. 以(Cap analog)為引物合成Capped mRNA
運(yùn)輸和保存方法
干冰運(yùn)輸。-20℃保存,有效期一年。
應(yīng)用實(shí)例
1、按下列體系配制反應(yīng)體系
【注】:
① DNA模板需要最后加入。由于10×Buffer中含有亞精胺,亞精胺濃度過高會(huì)引起DNA模板沉淀。
② Buffer和水建議放置到室溫,然后開始使用,反應(yīng)于室溫下配制,防止溫度低引起亞精胺沉淀高濃度DNA模板。
③ 若轉(zhuǎn)錄長(zhǎng)度< 100 nt,模板投入量可增加至2 μg。
④ RNase inhibitor (40 U/μL)請(qǐng)購(gòu)買本公司產(chǎn)品10603。
⑤ 為了特定區(qū)域的有效轉(zhuǎn)錄,建議在其區(qū)域下游把模板DNA預(yù)先切成平端或5′突出末端。
2、37℃反應(yīng)1-2 h(若轉(zhuǎn)錄長(zhǎng)度≤ 100 nt,增加時(shí)間至4-8 h)。
3、反應(yīng)結(jié)束后,使用2 U DNaseⅠ(無RNase)37℃、15 min去除DNA模板。
4、轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物純化:體外轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物可選用RNA Cleaner磁珠進(jìn)行純化(12602),以去除蛋白、鹽離子和其他雜質(zhì)。也可以采用酚/氯仿純化法(具體操作步驟可聯(lián)系Yeasen索取)。
注意事項(xiàng)
1、DNA模板的種類:推薦使用含T7啟動(dòng)子的線性化質(zhì)粒和PCR產(chǎn)物作為模板。
2、轉(zhuǎn)錄模板的純度會(huì)顯著影響體外轉(zhuǎn)錄反應(yīng)。在質(zhì)粒DNA抽提過程中殘留的RNase A會(huì)顯著影響轉(zhuǎn)錄RNA的質(zhì)量。通過酚-氯仿抽提的質(zhì)粒DNA為最佳模板;PCR產(chǎn)物建議采用膠回收純化后使用。
3、在20 μL反應(yīng)體系中加入0.02 U熱穩(wěn)定無機(jī)焦磷酸酶可顯著提高轉(zhuǎn)錄產(chǎn)量。
4、為了您的安全和健康,請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
HB211025