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10624ES86UCF.ME® T7 RNA Polymerase GMP-grade(50 U/μL)
參考價(jià): 面議
具體成交價(jià)以合同協(xié)議為準(zhǔn)
  • 10624ES86 產(chǎn)品型號(hào)
  • Yeasen/翌圣生物 品牌
  • 生產(chǎn)商 廠商性質(zhì)
  • 上海市 所在地

訪問次數(shù):426更新時(shí)間:2023-03-15 09:00:10

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產(chǎn)品簡(jiǎn)介
供貨周期 現(xiàn)貨 規(guī)格 2500U
貨號(hào) 10624ES86 應(yīng)用領(lǐng)域 醫(yī)療衛(wèi)生,化工,生物產(chǎn)業(yè)
本產(chǎn)品是大腸桿菌重組表達(dá)來源的噬菌體T7 RNA聚合酶,以含有T7啟動(dòng)子序列(5’-TAATACGACT CACTATAG*-3’)的雙鏈DNA為模板,以NTP為底物,合成與啟動(dòng)子下游的反向單鏈DNA互補(bǔ)的RNA。雙鏈線性平末端或5’突出末端DNA均可作為T7 RNA聚合酶的底物模板,因此線性質(zhì)粒、PCR產(chǎn)物均可用作體外合成RNA的模板。
產(chǎn)品介紹

產(chǎn)品信息

 

產(chǎn)品名稱

產(chǎn)品編號(hào)

規(guī)格

價(jià)格(元)

UCF.ME®T7 RNA Polymerase GMP-grade(50 U/μL)

10624ES86

2500 U

2655

10624ES90

5000 U

4855

10624ES96

25000 U

20155

10624ES97

50000 U

36255

 

產(chǎn)品描述

 

本產(chǎn)品是大腸桿菌重組表達(dá)來源的噬菌體T7 RNA聚合酶,以含有T7啟動(dòng)子序列(5’-TAATACGACT CACTATAG*-3’)的雙鏈DNA為模板,以NTP為底物,合成與啟動(dòng)子下游的反向單鏈DNA互補(bǔ)的RNA。雙鏈線性平末端或5’突出末端DNA均可作為T7 RNA聚合酶的底物模板,因此線性質(zhì)粒、PCR產(chǎn)物均可用作體外合成RNA的模板。

注:G*RNA轉(zhuǎn)錄的第一個(gè)堿基。

本品是按照GMP工藝要求生產(chǎn),產(chǎn)品以無菌液體形式提供。 

 

產(chǎn)品性質(zhì)

 

來源(Source)

重組E. coli

最適溫度(Optimum Temperature)

37℃

宿主核酸殘留Host nucleic acid residue

<10 fg/U

宿主蛋白殘留Host protein residue

<50 ppm

病原體(HBV/ HCV/HIV)檢測(cè)

無檢出

RNA酶殘留(RNase residue

陰性

內(nèi)毒素殘留Endotoxin residue

<10 EU/mg

支原體檢測(cè)Mycoplasma detection

無檢出

無菌檢測(cè)Sterility testing

無檢出

儲(chǔ)存緩沖液(Storage Buffer)

50 mM Tris-HCl1 mM EDTA10 mM DTT100 mM NaCl0.1% Triton X-100,50%v/v)甘油,pH7.9@25℃

活性單位定義(Unit Definition)

在37℃、pH 8.0的條件下,1 h內(nèi)使 1 nmol 的 [3H] GMP 摻入酸不溶性沉淀物所需要的酶量定義為1個(gè)活性單位。

注:具體產(chǎn)品質(zhì)檢數(shù)據(jù)及更多指標(biāo)請(qǐng)查看批次質(zhì)檢報(bào)告

 

產(chǎn)品組分

 

編號(hào)

組分

產(chǎn)品編號(hào)/規(guī)格

10624ES86

(2500 U)

10624ES90

(5000 U)

10624ES96

(25000 U)

10624ES97

(50000 U)

10624-A

T7 RNA polymerase (50 U/μL)

50 μL

100 μL

500 μL

1 mL

10624-B

10×Transcription Buffer

500 μL

1 mL

5 mL

10 mL

注:10×Transcription Buffer中含60 mM MgCl2100 mM DTT,但不含有NTP,如需請(qǐng)購(gòu)買本公司NTP set solution 10133。

 

產(chǎn)品應(yīng)用

 

1. 單鏈 RNA合成(包括mRNA,siRNA,gRNA等各類RNA前體,以及同位素標(biāo)記或非同位素標(biāo)記的RNA探針)

2. 以(Cap analog)為引物合成Capped mRNA 


運(yùn)輸和保存方法

 

干冰運(yùn)輸。-20℃保存,有效期一年。

 

應(yīng)用實(shí)例

 

1、按下列體系配制反應(yīng)體系

組分

體積(μL)

終濃度

10×Transcription Buffer

2

CTP/GTP/ATP/UTP (100 mM each)

0.4 each

2 mM each

T7 RNA Polymerase (50 U/μL)

0.5-1

-

RNase inhibitor (40 U/μL)

1

-

RNase free H2O

Up to 18

-

模板DNA

2 (100 ng-1μg)

-

【注】:
 DNA模板需要最后加入。由于10×Buffer中含有亞精胺,亞精胺濃度過高會(huì)引起DNA模板沉淀。

 Buffer和水建議放置到室溫,然后開始使用,反應(yīng)于室溫下配制,防止溫度低引起亞精胺沉淀高濃度DNA模板。

③ 若轉(zhuǎn)錄長(zhǎng)度< 100 nt,模板投入量可增加至2 μg。

④ RNase inhibitor (40 U/μL)請(qǐng)購(gòu)買本公司產(chǎn)品10603。

⑤ 為了特定區(qū)域的有效轉(zhuǎn)錄,建議在其區(qū)域下游把模板DNA預(yù)先切成平端或5′突出末端。

2、37℃反應(yīng)1-2 h(若轉(zhuǎn)錄長(zhǎng)度≤ 100 nt,增加時(shí)間至4-8 h)。

3、反應(yīng)結(jié)束后,使用2 U DNaseⅠ(無RNase)37℃、15 min去除DNA模板。

4、轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物純化體外轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物可選用RNA Cleaner磁珠進(jìn)行純化(12602),以去除蛋白、鹽離子和其他雜質(zhì)。也可以采用酚/氯仿純化法(具體操作步驟可聯(lián)系Yeasen索取)。

 

注意事項(xiàng)

 

1、DNA模板的種類:推薦使用含T7啟動(dòng)子的線性化質(zhì)粒和PCR產(chǎn)物作為模板。

2、轉(zhuǎn)錄模板的純度會(huì)顯著影響體外轉(zhuǎn)錄反應(yīng)。在質(zhì)粒DNA抽提過程中殘留的RNase A會(huì)顯著影響轉(zhuǎn)錄RNA的質(zhì)量。通過酚-氯仿抽提的質(zhì)粒DNA為最佳模板;PCR產(chǎn)物建議采用膠回收純化后使用。

3、20 μL反應(yīng)體系中加入0.02 U熱穩(wěn)定無機(jī)焦磷酸酶可顯著提高轉(zhuǎn)錄產(chǎn)量。

4、為了您的安全和健康,請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

 

HB211025




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