產(chǎn)品信息

產(chǎn)品描述

文庫(kù)構(gòu)建專用接頭試劑盒是Hieff NGS^® Stubby UDI Primer Kit for Illumina^®是Illumina高通量測(cè)序平臺(tái)文庫(kù)構(gòu)建專用接頭試劑盒，包含二代測(cè)序建庫(kù)中使用的PE adapter以及12/96/192/384種UDI Primer。該試劑盒提供的UDI Primer為I5、I7 Primer預(yù)混液，配合DNA Library Prep Kit for Illumina^®使用，可構(gòu)建多達(dá)384種雙端Index標(biāo)記的文庫(kù)。試劑盒中提供的所有試劑都經(jīng)過(guò)嚴(yán)格的質(zhì)量控制和功能驗(yàn)證，上保證了文庫(kù)構(gòu)建的穩(wěn)定性和重復(fù)性。

產(chǎn)品組分

運(yùn)輸與保存方法

冰袋運(yùn)輸。所有組分-20°C保存，有效期1年。

注意事項(xiàng)

1）本試劑盒中DNA Adapter的濃度為15 μM，單個(gè)文庫(kù)構(gòu)建的接頭使用量根據(jù)所用試劑盒進(jìn)行調(diào)整。

2）本試劑盒提供的PE Adapter為通用型短接頭，需要通過(guò)PCR擴(kuò)增獲得完整的文庫(kù)。UDI Primer提供Barcode序列標(biāo)簽，用于高通量測(cè)序時(shí)區(qū)分樣品。

3）本試劑盒有四種規(guī)格，分別提供12/96/192/384種UDI Primer，可以構(gòu)建多達(dá)384種雙端Index標(biāo)記文庫(kù)。

4）切勿加熱接頭，應(yīng)在室溫讓其緩慢溶解，實(shí)驗(yàn)室溫度最好設(shè)置為20-25°C。接頭避免反復(fù)凍融，建議分裝保存，可短暫存放于4°C。

5）使用Hieff NGS^® Stubby UDI Primer Kit for Illumina^®試劑盒構(gòu)建的DNA文庫(kù)結(jié)構(gòu)如下：

6）為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

7）本產(chǎn)品僅作科研用途！

使用方法

本試劑盒使用方法按照 Hieff NGS ^® MaxUp II DNA Library Prep Kit for Illumina^® 試劑盒操作說(shuō)明進(jìn)行。

接頭連接 (Adapter Ligation)

在末端修復(fù)產(chǎn)物兩端連接特定的Illumina^®接頭，即Hieff NGS^® MaxUp II DNA Library Prep Kit for Illumina^®操作步驟3.2。

1. 根據(jù)Input DNA量按照下表1選擇合適的Adapter用量；

表1 不同Input DNA推薦的Adapter使用濃度

【注】：Input DNA 摩爾數(shù) (pmol)≈Input DNA質(zhì)量(ng)/[0.66×Input DNA平均長(zhǎng)度 (bp)]

2. 將表2中的各種試劑解凍后顛倒混勻，置于冰上備用；

3. 配制表2所示反應(yīng)體系；

表2 Adapter Ligation反應(yīng)體系

【注】：*Ligation Enhancer比較粘稠，請(qǐng)上下顛倒、振蕩，充分混勻并瞬時(shí)后離心使用。

**本公司接頭濃度 (Cat#12404；Cat#12405；Cat#12406；Cat#12407)與常規(guī)商業(yè)化試劑盒一致，皆為15 μmol/L。

4. 使用移液器輕輕吹打或振蕩混勻，并短暫離心將反應(yīng)液收集至管底；

5. 將PCR管置于PCR儀中，設(shè)置表3所示反應(yīng)程序，進(jìn)行接頭連接反應(yīng)：

表3 Adapter Ligation反應(yīng)程序

【注】：當(dāng)Input DNA量較低，實(shí)驗(yàn)效果不理想時(shí)，可嘗試將連接時(shí)間延長(zhǎng)一倍。

連接產(chǎn)物磁珠純化 (Post Ligation Clean Up)

該步驟使用磁珠對(duì)連接產(chǎn)物進(jìn)行純化或分選。純化可除去未連接的Adapter或Adapter Dimer等無(wú)效產(chǎn)物，分選可篩選特定長(zhǎng)度DNA片段以符合測(cè)序需要，詳細(xì)操作步驟參照Hieff NGS^® MaxUp II DNA Library Prep Kit for Illumina^®建庫(kù)試劑盒說(shuō)明書。

文庫(kù)擴(kuò)增 (Library Amplification)

該步驟將對(duì)純化或長(zhǎng)度分選后的接頭連接產(chǎn)物進(jìn)行PCR擴(kuò)增富集，使用本試劑盒接頭時(shí)，該步驟為必做步驟；

1. 將表4中試劑解凍后顛倒混勻，置于冰上備用；

2. 于無(wú)菌PCR管中配制表4所示反應(yīng)體系；

表4  PCR擴(kuò)增反應(yīng)體系

【注】：文庫(kù)擴(kuò)增引物來(lái)自Yeasen接頭引物試劑盒 (Cat#12404；Cat#12405；Cat#12406；Cat#12407)。

3. 使用移液器輕輕吹打或振蕩混勻，并短暫離心將反應(yīng)液收集至管底；

4. 將PCR管置于PCR儀中，設(shè)置表5所示反應(yīng)程序，進(jìn)行PCR擴(kuò)增：

表5  PCR擴(kuò)增反應(yīng)程序

HB210809